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公开(公告)号：CN116004471B
公开(公告)日：2025-04-29
申请号：CN202310086780.5
申请日：2023-02-09
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高霍氏假单胞菌5‑羟甲基糠醛氧化能力的培养方法。以有机酸酸解石花菜获得石花菜水解液，顺序添加氧化钙和氢氧化钠调节水解液pH，离心后所得清液为培养基碳源，在此基础上添加少量廉价有机氮源及无机盐，制得石花菜酸解液培养基。该培养基成本低廉，以该培养基培养霍氏假单胞菌，所得细胞氧化5‑羟甲基糠醛的催化能力高于用昂贵碳源和氮源培养基培养的细胞。
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公开(公告)号：CN119709452A
公开(公告)日：2025-03-28
申请号：CN202411984516.4
申请日：2024-12-31
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种高产赤松素的重组解脂耶氏酵母菌及其构建方法与应用。本发明以解脂耶氏酵母菌为底盘细胞，通过在基因组上插入苯丙氨酸解氨酶基因PtrPAL3、对香豆酰辅酶A连接酶基因Pc4CL1和芪合成酶基因PtSTS，并过表达3‑脱氧‑D‑阿拉伯庚酮糖酸‑7‑磷酸合成酶基因ARO3和乙酰辅酶A羧化酶基因ACC1，敲除4‑羟基苯丙酮酸双加氧化酶基因HPD和苯丙酮酸脱羧酶基因ARO10，构建得到重组解脂耶氏酵母菌。该菌株经遗传改造后具有从头合成赤松素的能力，利用葡萄糖摇瓶发酵产量达到260mg/L，在5L发酵罐中发酵赤松素产量达到1200mg/L。本发明首次利用解脂耶氏酵母实现了赤松素的高效率生产，构建的重组解脂耶氏酵母菌的赤松素产量是目前微生物发酵生产的最高水平。
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公开(公告)号：CN117802057A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311849415.1
申请日：2023-12-29
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明属于生物催化转化领域，具体涉及一种呋喃醛氧化酶及其伴侣蛋白、重组菌株构建与应用。本发明从霍氏假单胞菌Pseudomonas rhodesiae CCTCC NO:M2021356中得到了一个新的呋喃醛氧化酶及其伴侣蛋白，该呋喃醛氧化酶由三个不同的亚基构成，该呋喃醛氧化酶必须在特定的伴侣蛋白辅助下才能折叠为有活力的成熟蛋白。呋喃羧酸是一种极具吸引力的生物基平台化合物，所述的呋喃醛氧化酶可以高效地转化呋喃醛生成高附加值的呋喃羧酸，底物转化率和产物得率可达到100％，且催化时不需要NAD(P)+等昂贵辅因子，底物醛基在水溶液中的水合程度不影响酶催化效率，同时本发明催化过程温和、简单。
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公开(公告)号：CN117143841A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311344981.7
申请日：2023-10-17
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及羧酸还原酶突变体及其应用。本发明的羧酸还原酶突变体是将母本羧酸还原酶Nicar的氨基酸序列第301位异亮氨酸、第305位异亮氨酸、第341位苯丙氨酸、第425位丙氨酸中的一个或多个氨基酸残基替换为其他氨基酸残基所形成的新氨基酸序列构成的衍生蛋白质，所述衍生蛋白质的底物亲和力、催化效率相较于母本羧酸还原酶，对L‑乳酸底物亲和力、催化效率提高。与现有技术相比，本发明所述突变体具有对L‑乳酸高底物亲和力和催化效率等优势，能够很好的应用于催化制备L‑乳醛和全细胞催化制备1,2‑丙二醇中，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN116064634A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202210813546.3
申请日：2022-07-12
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种耐受糠醛的重组表达转化体及其应用。这些糠醛耐受的重组表达转化体分别含有携带突变位点的基因，这些基因包括PP_RS18130T65A/A67G，PP_RS02880T517A，PP_RS19785C20A，PP_RS20740G1012T，PP_RS02385A1046G。包含这些基因的重组表达转化体应用于预处理木质纤维素水解液的脱毒，可有效减轻水解液中有毒副反应产物对发酵微生物的抑制作用，从而改进木质纤维原料到生物基产品的有效生产。本发明还提供了这些重组表达转化体的制备方法，包括重组表达载体的构建、表达载体的转化以及重组表达转化体对糠醛的毒性耐受及转化能力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113151208B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202110660318.2
申请日：2021-06-15
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开一种短链脱氢酶BLSDR1及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白是由SEQ NO.2所示的氨基酸序列编码的蛋白质。本发明从凝结芽孢杆菌NL01中克隆得到了一个新的短链脱氢酶基因blsdr1，可在宿主细胞中表达该基因以生产此短链脱氢酶，该酶在还原羰基化合物方面具有广泛的底物谱，并且具有一定的有机溶剂耐受能力，可用于多种酮醛类化合物的脱除还原。
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公开(公告)号：CN114107356B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN202111226302.7
申请日：2021-10-21
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12N15/78
Abstract: 本发明涉及一种改造恶臭假单胞菌使其同化D‑半乳糖的方法，通过在恶臭假单胞菌中导入外源半乳糖酸转运模块和代谢模块，并结合适应性实验室进化，使得恶臭假单胞菌能够高效同化代谢D‑半乳糖。基于该策略，获得了一株可以以D‑半乳糖为唯一碳源快速生长的重组恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）ZF21，已于2021年09月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO:M20211155。
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公开(公告)号：CN112795586A
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN202110096419.1
申请日：2021-01-25
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开一种羧酸还原酶重组质粒，该重组质粒通过将羧酸还原酶基因和磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因连接到pRSFDuet‑1载体上得到。本发明进一步提出了包含该重组质粒的重组菌，并进一步利用该重组菌生产羧酸还原酶SrCAR并应用于1，2‑丙二醇生产。本发明实现了生物制备1，2‑丙二醇的高效合成途径，具有很高的应用前景，利用上述羧酸还原酶SrCAR催化葡萄糖产1，2‑丙二醇，在未对大肠杆菌菌株进行基因敲除的情况下，4h得到的1，2‑丙二醇产量是文献报道利用含有羧酸还原酶MavCAR的基因敲除大肠杆菌菌株合成1，2‑丙二醇产量的4‑5倍。
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公开(公告)号：CN110272402B
公开(公告)日：2021-02-26
申请号：CN201910634868.X
申请日：2019-07-15
Applicant: 南京林业大学
IPC: C07D307/68 , C12P17/04 , C12R1/40 , C12R1/38
Abstract: 本发明公开了一种化学反应和生物反应耦合生产2,5‑呋喃二甲酸的方法，在漆酶‑TEMPO体系中，催化5‑羟甲基糠醛转化，得到氧化中间产物，然后调节产物pH值为5.0～6.0，加入假单胞菌属微生物细胞和CaCO3进行催化反应，得到2,5‑呋喃二甲酸。本发明的合成方法能显著提高2,5‑呋喃二甲酸的产量，且避免了复杂，耗时耗力繁琐的遗传学改造，只需通过简单的催化反应耦合，即可实现HMF催化生产FDCA。本发明能催化转化的底物浓度更高，FDCA的产率更高，不需要昂贵的辅因子。该过程简单可控，克服了遗传工程菌不稳定的问题。
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公开(公告)号：CN105238770A
公开(公告)日：2016-01-13
申请号：CN201510780545.3
申请日：2015-11-13
Applicant: 南京林业大学
CPC classification number: C12N9/2402 , C12P19/14 , C12Y302/01007
Abstract: 本发明公开了一种原位定向拆分制备内切菊粉酶的方法，将含纤维素的底物与微生物产天然菊粉酶混合，加入pH缓冲液混合至固液质量比为1g∶7～50mL，体系pH值控制在4～6，于5～55℃条件下吸附0.5～2h，体系经固液分离，弃去固形物，保留清液，即得内切菊粉酶液。本发明方法由于原位定向拆分去除了天然菊粉酶系中大部分的外切菊粉酶，天然菊粉酶系中的外切菊粉酶含量大幅度降低，提高了低聚果糖的得率，降低了产品中无生理活性的单糖含量，为微生物天然产菊粉酶制备低聚果糖提供了一个高效、低成本的新途径。
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