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公开(公告)号：CN106636052A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611108889.0
申请日：2016-12-06
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/90 , C12P7/46 , C12P13/20 , C12Y502/01001
Abstract: 本发明公开了一种马来酸顺反异构酶的热稳定性改造及其应用，属于酶工程领域。本发明将来源于粘质沙雷氏菌的马来酸顺反异构酶基因maiA通过半理性设计的方法进行了热稳定改造，得到的突变体与野生型的马来酸顺反异构酶相比，突变体G27A‑G171A在55℃的半衰期是野生型的2.9倍，酶活是野生型的1.96倍；突变体G27A‑K104R在55℃的半衰期是野生型的4.18倍，酶活是野生型的1.59倍。
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公开(公告)号：CN106591309A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201611112241.0
申请日：2016-12-07
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/125
CPC classification number: C07K14/32 , C12N15/75 , C12N2800/101 , C12N2830/002 , C12N2840/002
Abstract: 本发明公开了一种茶碱诱导型基因表达系统，属于微生物生物技术领域。本发明以组成型强启动子P43为基础组件，融合经过改造了人工SD元件和SD序列和起始密码之间的间隔区长度的茶碱控制元件riboE1，构建出茶碱诱导型基因表达元件P43‑riboE1，并将序列克隆至枯草芽孢杆菌表达载体pBSG中，构建出诱导表达载体pBSG11，转化宿主168菌，使外源基因在茶碱控制下实现高水平、高诱导率表达。利用此重组菌实现了报告基因GFP，GUS和天冬氨酸酶的高效、可控重组表达。茶碱相比木糖、IPTG等诱导剂，具有无毒、价格低廉等优势，利用它作为诱导剂的基因表达系统具有较广阔的应用空间。
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公开(公告)号：CN106544336A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611108474.3
申请日：2016-12-06
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/001 , C12Y402/01084
Abstract: 本发明公开了一种对脂肪族二腈区域选择性提高的腈水合酶，属于微生物基因工程领域。本发明将恶臭假单胞菌来源的腈水合酶的第37位的亮氨酸分别突变为苯丙氨酸、色氨酸或者酪氨酸之后，相比野生型，腈水合酶催化己二腈转化得到的产物以己二酰二胺为主，产物中，己二酰二胺的含量在90％以上。本发明提供的腈水合酶突变体将在针对性合成己二酰二胺的过程中，更好地发挥作用，减少分离纯化目标产物的成本。
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公开(公告)号：CN104962571A
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201510364026.9
申请日：2015-06-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化马来酸顺反异构酶及其制备方法与应用，属于酶学与酶工程技术领域与生物化工领域。本发明将R5肽段连接在马来酸顺反异构酶的N端，再将R5-MaiA用戊二醛交联，最后用硅反应液将交联后的R5-MaiA进行包埋，完成马来酸顺反异构酶的固定化。用成本低、易操作的方法获得了稳定性高的固定化马来酸顺反异构酶(R5-MI-CLEA-Si)，固定化酶最适反应温度为55℃，最适反应pH为7.7；在55℃条件下固定化酶的半衰期为4h，游离酶的半衰期为0.5h，固定化酶的稳定性是游离酶的8倍，重复催化反应8次后固定化酶的酶活仍能保留75％。
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公开(公告)号：CN104774829A
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201510195795.0
申请日：2015-04-22
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/88 , C07K2319/00 , C12P13/02 , C12P21/02 , C12Y402/01084 , C12N15/70
Abstract: 本发明公开了一种比酶活和稳定性提高的融合型腈水合酶，属于基因工程领域。本发明将来源于恶臭假单胞菌的腈水合酶在大肠杆菌中高效表达并采用亚基融合策略提高稳定性及产物耐受性。本发明方法简单高效安全，能够在较短的表达周期里获得稳定性高，产物耐受性强的大量可溶性腈水合酶，有利于在简单条件下进行大规模工业生产，以及进一步对融合型腈水合酶成熟机制的理论研究。
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公开(公告)号：CN104774790A
公开(公告)日：2015-07-15
申请号：CN201510158566.1
申请日：2015-04-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效发酵生产L-丙氨酸的大肠杆菌，属于微生物代谢工程技术领域。本发明提供的大肠杆菌(Escherichia coli)CGMCC No.10628的染色体上副产物乙酸、甲酸、乙醇、琥珀酸、乳酸合成途径编码基因ackA-pta、pflB、adhE、frdA、ldhA被删除，且其染色体dadX基因被替换为丙氨酸脱氢酶基因。利用该重组菌在28～45℃条件下发酵26h，产生106g/L或以上具有高光学纯度和高化学纯度的L-丙氨酸，整个发酵过程生产强度达到4.27g/L·h或以上。
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公开(公告)号：CN118207146A
公开(公告)日：2024-06-18
申请号：CN202410375657.X
申请日：2024-03-29
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N9/88 , C12N9/48 , C12N15/55 , C12N15/60 , C12N15/31 , C12N15/70 , C07K14/245 , C12P13/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种生产γ‑氨基丁酸的工程菌株及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的工程菌株可在3h内完成2moL·L‑1L‑Glu的转化，产量为197.0g·L‑1，与出发菌株相比产量提升了5.2倍。改造后工程菌株的生物量并未受到明显影响，且以1.5moL·L‑1L‑Glu为底物催化时，可以在4h内完成两批次的转化，具有工业应用的潜力。
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公开(公告)号：CN114350660B
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202111458760.3
申请日：2021-12-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于Lux群体感应元件的枯草芽孢杆菌自诱导基因表达系统，属于基因工程技术领域。本发明将来源于V.fischeri的lux群体感应系统重新设计，并在野生型PluxI启动子的基础之上对其‑10区上游4bp进行随机建库获得了活性提升的突变体启动子P22，P47，P56和P58，并以sfGFP作为报告基因来检测所述系统表达外源蛋白的水平，将sfGFP置于PluxI，P22，P47，P56和P58启动子下游，结果显示突变后的启动子较野生型PluxI有了明显的提升。本发明提供的这种系统可高效表达外源蛋白，从而在外源蛋白高效表达和合成生物学研究中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN114250215B
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202111483679.0
申请日：2021-12-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种超嗜热II型普鲁兰酶及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对超嗜热II型普鲁兰酶进行氨基酸突变，获得了超嗜热II型普鲁兰酶突变体Q13H、I25E和Q13H/I25E。本发明获得的突变体催化性能有了很大的提高，且突变体在反应过程中不需要其他金属离子辅助(例如Ca2+)，有助于降低产物提取成本。本发明构建的突变体具有极强的热稳定性，在100℃保温10h还剩余50％的酶活，并具有较为广泛的pH活性范围和pH耐受性，在pH 5.8‑7.0范围保有70％活性，于不同的pH下，4℃放置剩余酶活均在75％以上，能很好的应用于淀粉工业中的糖化过程中。
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