公开(公告)号：CN106979938A

公开(公告)日：2017-07-25

申请号：CN201710139424.X

申请日：2017-03-09

Applicant: 东华大学

Inventor： 周宇荀 ,  李晓宁 ,  王斯佳 ,  肖君华 ,  李凯

IPC: G01N21/64

CPC classification number: G01N21/6486

Abstract: 本发明提供了一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与目的基因同时表达，但彼此独立形成各自的蛋白；所形成的能同时表达红、绿两种荧光蛋白的细胞用于对影响目的基因表达的外部因素进行筛选；用流式细胞仪定量检测细胞的绿色荧光信号的强弱，再用其红色荧光信号值进行均一化，从而对外部因素对目的基因表达的影响进行定量比较，定量检测出影响目的基因表达的外部因素。本方法能同时比较细胞在多种处理条件下，特定基因的表达量差异，在较高通量和较短时间内对基因表达的影响因素进行高灵敏度的筛选。

公开(公告)号：CN104170792A

公开(公告)日：2014-12-03

申请号：CN201410397040.4

申请日：2014-08-13

Applicant: 东华大学

Inventor： 李凯 ,  高遄 ,  晁天柱 ,  徐福意 ,  周宇荀 ,  肖君华

IPC: A01K67/02 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法，包括：将ZZ2小鼠与小鼠C57BL/6J杂交，获得F1代，取F1代小鼠与C57BL/6J回交，获得F2代，通过基因分型筛选出整个1号染色体为杂合状态的小鼠；F2代小鼠与C57BL/6J回交，以相同的方式回交，筛选10代后，形成1号染色体为杂合状态，其余染色体均为纯合C57BL/6J基因型的小鼠群体；鉴定回交小鼠的基因DNA；1号染色体为ZZ2与B6杂合状态的回交小鼠经过10代回交后，育成携带ZZ2小鼠1号染色体的同源基因导入近交系，通过兄妹自交和基因鉴定筛选，即得。

公开(公告)号：CN103937826A

公开(公告)日：2014-07-23

申请号：CN201410136599.1

申请日：2014-04-04

Applicant: 东华大学

Inventor： 周宇荀 ,  仝莉 ,  李晓宁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC: C12N15/66

Abstract: 本发明涉及一种中枢神经系统中特异表达miR-505的载体的制备方法，包括：用PCR方法获得目的基因，将GFAP启动子从pAAV-GFAP-hchR2-mcherry-WPRE载体上用合适的限制性内切酶切下，与目的基因连接克隆到pUC19载体上，然后通过合适的酶切位点将GFAP-EGFP-mir-505片段从pUC载体上切下，克隆到PB载体上，获得载体。本发明可与表达转座酶的辅助载体共注射小鼠的受精卵的雄性原核，得到转基因小鼠，用以研究miR-505在神经系统特别是在神经胶质细胞中的包括调控性发育启动在内的生物学功能，并且EGFP蛋白能方便地显示外源基因在神经系统中的定位。

公开(公告)号：CN103719021A

公开(公告)日：2014-04-16

申请号：CN201210382423.5

申请日：2012-10-10

Applicant: 上海西普尔-必凯实验动物有限公司 ,  东华大学

Inventor： 赵莹 ,  肖君华 ,  邢正弘 ,  陈国强 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  赵丽亚 ,  晁天柱 ,  柏熊 ,  高捷

IPC: A01K67/027

Abstract: 本发明涉及1号染色体替换野生小家鼠C57BL/6.枣庄2-Chr1的建立。构建了一种新的染色体C57BL/6替代实验小鼠品系，该小鼠品系的遗传背景以C57BL/6小鼠为主，但其中1号染色体以枣庄2小鼠为主。本发明的染色体替换品系可用于研究在相同基因组背景下，由不同的1号染色体基因组带来的性状差异，是采用遗传学方法研究染色体基因组功能的有用工具。

公开(公告)号：CN103710372A

公开(公告)日：2014-04-09

申请号：CN201310754411.5

申请日：2013-12-31

Applicant: 东华大学

Inventor： 周宇荀 ,  马骁骁 ,  肖君华 ,  李凯

IPC: C12N15/66

Abstract: 本发明涉及一种用于功能研究的miR-505高表达载体的构建方法，包括：（1）采用PCR方法得到shRNA基因，并用限制性内切酶EcoRI进行酶切，得到经EcoRI酶切后的miR-505片段；（2）将FUGW载体或Fsy载体用EcoRI进行酶切，并CIAP处理使其5’端去磷酸化，然后将处理后的线性化FUGW载体或Fsy载体与经EcoRI酶切后的miR-505片段进行连接，转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α，提取质粒，经PCR和BamHI酶切检测目的基因插入的方向和拷贝数，测序确认后，得到表达载体。本发明的构建方法操作简单，得到的载体可实现miR-505成熟体在哺乳动物细胞中的高表达。

公开(公告)号：CN101509034A

公开(公告)日：2009-08-19

申请号：CN200810202886.2

申请日：2008-11-18

Applicant: 东华大学

Inventor： 王勤熙 ,  李凯 ,  周宇荀 ,  汤周睿 ,  肖君华

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/06 ,  G01N21/64

CPC classification number: Y02A50/451

Abstract: 本发明涉及一种人体肠道菌群检测分型及定量的方法，包括：由通用引物PCR扩增和特异探针LDR两部分组成，在PCR扩增中，设计的通用引物同时扩增出所选菌属的16s rDNA片段；再经过连接反应，各菌属特异的LDR探针达到分型的目的；LDR信号由ABI Prism 377型测序仪检出，测得的荧光值作为定量的依据。本发明的检测方法针对肠道菌的通用引物有效扩增出所有目标肠道菌16S rDNA序列，保证了各目标序列以及其中低拷贝的模板可被检测到，本方法使各菌属的特异探针进一步保证了特异性，使各目标序列完全区分出来，实现多重分型定量。

公开(公告)号：CN116144743B

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202211621752.0

申请日：2022-12-16

Applicant: 东华大学 ,  上海翼和应用生物技术有限公司

Inventor： 肖君华 ,  路萌 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  巢凯悦 ,  任琴琴 ,  陈烨

IPC: C12Q1/6858 ,  C12Q1/6876 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。

公开(公告)号：CN118308470A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410287890.2

申请日：2024-03-13

Applicant: 东华大学

Inventor： 肖君华 ,  路萌 ,  周宇荀 ,  李凯 ,  巢凯悦 ,  任琴琴 ,  陈烨

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12N15/10

Abstract: 一种基于多重PCR和产物分选建库方法及磁珠分选方法及应用，涉及核酸检测领域。本发明采用极低循环数多重PCR对靶标区段进行扩增，提高了扩增子间的均一性；随后在扩增产物中添加Carry DNAs并进行两轮磁珠分选，此步骤避免了扩增产物大量丢失。最后通过PCR反应连接测序引物形成适合于NGS测序平台的扩增子。利用极低循环数的多重PCR，避免了高循环带来的扩增子间的不均一性和产生的大量引物二聚体；通过添加Carry DNAs的两轮磁珠分选能够避免扩增产物丢失，并提供有效的质量控制，方便后续实验。该技术是一种成本低廉，操作方便，适合于常规实验室的多重PCR扩增捕获建库方法。

公开(公告)号：CN110846399B

公开(公告)日：2022-11-04

申请号：CN201910938718.8

申请日：2019-09-30

Applicant: 东华大学 ,  上海市松江区中心医院

Inventor： 李凯 ,  王斌 ,  肖君华 ,  周宇荀 ,  侯彦强 ,  曹辉

IPC: C12Q1/6883 ,  C12Q1/6858

Abstract: 本发明涉及一种心血管疾病个体化用药基因检测体系试剂盒及其应用，包括PCR反应体系、LDR的反应体系。本发明所述试剂盒采用多重PCR技术和多重LDR技术，两种技术相结合，基于杂交反应和连接反应，双重保证，检测过程中无需DNA纯化，减少了污染的可能性，结果更加准确。PCR‑LDR检测的准确度可以与Sanger测序相媲美，但是前者多样性更高、成本更低。

公开(公告)号：CN106854680A

公开(公告)日：2017-06-16

申请号：CN201710160439.4

申请日：2017-03-17

Applicant: 上海星耀医学科技发展有限公司 ,  上海翼和应用生物技术有限公司 ,  东华大学

Inventor： 龚戬 ,  夏懿 ,  杨志军 ,  王家敏 ,  肖君华 ,  周宇荀 ,  李凯

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6858 ,  C12Q2537/143 ,  C12Q2545/101 ,  C12Q2561/125

Abstract: 本发明提供了CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，试剂盒包括PCR缓冲液，DNA聚合酶，LDR缓冲液，DNA连接酶，阳性对照，阴性对照。本发明可对提取好的DNA直接进行PCR‑LDR反应，对样本中的CYP2C19基因进行定性检测，并依靠内参基因序列作为内对照、利用UDG酶预防污染。本发明的试剂盒扩增方法简单、程序简短、操作简便、预防污染，检测结果特异性强、敏感度高、结果明晰、可信度高，可用于全血中CYP2C19基因定性检测。