公开(公告)号：CN102839185A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201110166533.3

申请日：2011-06-21

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  卫一鸣 ,  王维婧 ,  马百成 ,  胡晓宇 ,  张耀方 ,  乔坤艳 ,  李宠 ,  马志华

IPC: C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  A61K38/58 ,  A61P3/10 ,  A61P7/02 ,  C12R1/19 ,  A61K38/26

Abstract: 本发明涉及一种生产治疗糖尿病及血栓并发症的双功能药物(rolGLP-HV)工程菌的构建、制备方法和应用技术。将对2型糖尿病具有“治标治本”疗效的长效促胰岛素rolGLP-1与有效防治其心脑血管并发症的水蛭素rHV1融合，使其具有预防和治疗糖尿病及血栓并发症的双重功能。具体来说，应用基因工程技术获得rolGLP-1和rHV1的融合基因rolGLP-HV，并将其克隆到大肠杆菌表达载体pET22b(+)，构建表达载体pNK-EC-rolGLP-HV，转化大肠杆菌，获得高表达rolGLP-HV的工程菌NK-rolGLP-HV-E007。该菌株通过诱导表达和纯化可获得高纯度rolGLP-HV。胡氏血栓模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可显著减缓其尾部血栓出现的时间和程度；糖尿病模型小鼠灌胃rolGLP-HV，可明显降低血糖水平并改善糖尿病症状，因此，本发明可用于开发同时治疗糖尿病及其血栓并发症的双功能药物。

公开(公告)号：CN100497591C

公开(公告)日：2009-06-10

申请号：CN200510013514.1

申请日：2005-05-16

Applicant: 南开大学

Inventor： 李明刚 ,  侯建华 ,  方园园 ,  薄涛 ,  王翠艳 ,  杨少辉 ,  武志强 ,  闫瑞香

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/66 ,  C12N15/10 ,  C07K14/575 ,  C07H21/00 ,  C12R1/84 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母GS115中，从而获得能够高效分泌表达促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌，该工程菌的促胰岛素激素产量可达到100mg/L。同时，利用该高产工程菌生产的促胰岛素激素产品，其氨基酸序列不同于天然产品，且已被消除了胰蛋白酶切位点，因此不仅在体内不会被特异性的蛋白酶降解而能够长时间的保持活性，而且由于不会被胰蛋白酶降解，还可以制成口服制剂使用。