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公开(公告)号：CN118638218A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410651611.6
申请日：2024-05-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , C12N5/20 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒新型变异毒株VP2蛋白第221位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白的单克隆抗体VP2‑5B5，经鉴定重链亚型为IgG2b，其识别的构象抗原表位的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5特异性良好，仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白，可用于IBDV新型变异株的鉴别诊断。3）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5所识别的抗原表位为构象表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。
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公开(公告)号：CN118497134A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410694499.4
申请日：2024-05-31
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577 , C07K14/08 , C12N15/70 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒VP2蛋白第343‑348位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种广谱的识别IBDV VP2高变区蛋白的单克隆抗体5G10，经鉴定重链亚型为IgG1，其识别的线性抗原表位位于343PGALRP348。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体5G10与不同毒力IBDV毒株的VP2蛋白均有良好的反应性，可用于IBDV的检测。3）本发明制备的单克隆抗体5G10所识别的抗原表位为线性表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2 343PGALRP348。
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公开(公告)号：CN117825704A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410020201.1
申请日：2024-01-07
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/535 , C07K14/075 , C12N15/70 , C12N5/20 , C12N15/34 , C07K16/08
Abstract: 本发明涉及一种基于Fiber‑2蛋白和抗Fiber‑2蛋白单克隆抗体的检测鸭3型腺病毒抗体的竞争ELISA方法，首次使用单克隆抗体进行鸭3型腺病毒抗体的检测，与间接ELISA技术相比，本发明的特异性高，能够有效提高检测的准确性，且不依赖于商品化的酶标二抗，可以应用于不同物种（鸡、鸭和鹅）血清中鸭3型腺病毒抗体检测，是一种简便、快速、稳定、特异的检测鸭3型腺病毒抗体的ELISA方法。使用本发明只需采集鸭群的血清，即可快速准确地检测血清中是否含有鸭3型腺病毒抗体，本发明适合应用于基层鸭群的大批量检测。本发明为鸭3型腺病毒的感染检测以及免疫效果监测提供了技术支持，具有一定的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN110483637B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN201910659588.4
申请日：2019-07-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , C07K16/40 , C12N15/13 , A61K39/42 , A61P31/16 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体、编码基因及其应用，属于生物医学技术领域。抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体特异性地识别禽流感病毒神经氨酸酶蛋白N2，具有抑制神经氨酸酶活性和中和病毒能力。本发明还克隆了抗禽流感病毒神经氨酸酶N2单克隆抗体的轻、重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认了基因序列和氨基酸序列的唯一性。本发明涉及的单克隆抗体、可变区基因及氨基酸序列可用于N2的禽流感病毒的诊断和治疗药物研发等，具有广泛的临床应用价值。
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公开(公告)号：CN113005101A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110332197.9
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其载体骨架为野生型血清4型禽腺病毒SD株；本发明所述的一种基于CRISPR‑Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒的构建及其应用，选择当下流行的血清4型禽腺病毒作为骨架，通过银染、质谱和免疫共沉淀等技术发现并鉴定FAdV‑4中F2基因与宿主蛋白互作的功能区，随后将功能区删除后成功获得了F2部分缺失型重组FAdV‑4病毒，在体内及体外实验结果均显示，FA4‑Del重组病毒毒力显著降低，能够为SPF鸡提供很好的免疫保护。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109082423A
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201810910732.2
申请日：2018-08-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种流感病毒HA融合肽+helix A蛋白表达载体的制备方法及其应用与引物。本发明的原理和最核心的关键技术是科学地设计扩增出pGEX-6p-1线性化载体以及流感病毒HA融合肽-helix A基因片段的引物，利用商品化的重组酶ExnaseTM II不经酶切连接反应，直接在体外快速重组克隆HA融合肽-helix A，转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、实现流感病毒HA融合肽-helix A蛋白与GST的融合表达，并获得纯化的HA融合肽-helix A融合蛋白。
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公开(公告)号：CN104450695A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410704520.0
申请日：2014-11-26
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种流感病毒基因克隆方法，具体涉及A型流感病毒基因PCR扩增引物及A型流感病毒基因快速克隆方法。本发明提供了A型流感病毒8个基因片段的PCR扩增引物和流感病毒反向遗传线性化载体的引物。本发明还提供了A型流感病毒基因快速克隆方法，用上述引物通过PCR反应即聚合酶链式反应扩增出流感病毒基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体，然后利用重组酶将上述线流感病毒各基因片段以及线性化的流感病毒反向遗传载体在体外重组克隆，并转化到大肠杆菌进行克隆。本发明的大大简化了传统的流感病毒反向遗传技术中的基因克隆过程，解决传统的流感病毒反向遗传技术中流感病毒基因的克隆过程复杂、效率不高的问题。
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公开(公告)号：CN117384865A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311341861.1
申请日：2023-10-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/34 , C12N15/861 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其主体为野生型血清4型禽腺病毒SD株；所述血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用血清8a型禽腺病毒Fiber基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的19位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的FAdV‑4毒株作为载体，将FAdV‑4的毒力基因Fiber‑2替换为FAdV‑8a的保护性抗原Fiber基因，获得高度致弱的表达FAdV‑8a的Fiber蛋白的重组FAdV‑4，为防控FAdV‑4和FAdV‑8a提供生物材料和技术支撑。
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公开(公告)号：CN116970575A
公开(公告)日：2023-10-31
申请号：CN202310903552.2
申请日：2023-07-22
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N7/02 , C12N15/861 , C12N15/34 , C12N15/44 , C12N15/12 , C12N15/113 , C12N9/22 , A61K39/145 , A61K39/235 , A61K39/295 , A61P31/16 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其的制备方法，H7N9禽流感病毒HA蛋白序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用H7N9禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明的关键技术是利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入H7N9禽流感病毒HA基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为制备血清4型禽腺病毒和H7N9禽流感病毒二联疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116855459A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310309128.5
申请日：2023-03-27
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/45 , C12N15/861 , C12N15/65 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白，序列如SEQ ID NO.1所示。所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用新城疫病毒La Sota毒株HN基因替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新城疫病毒HN基因，成功获得新城疫病毒HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新城疫病毒提供技术支撑和弱毒二联疫苗候选。
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