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公开(公告)号：CN118638218A
公开(公告)日：2024-09-13
申请号：CN202410651611.6
申请日：2024-05-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K16/10 , C12N5/20 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒新型变异毒株VP2蛋白第221位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白的单克隆抗体VP2‑5B5，经鉴定重链亚型为IgG2b，其识别的构象抗原表位的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5特异性良好，仅特异性识别IBDV新型变异株VP2蛋白，可用于IBDV新型变异株的鉴别诊断。3）本发明制备的单克隆抗体VP2‑5B5所识别的抗原表位为构象表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2第221位氨基酸K。
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公开(公告)号：CN118497134A
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202410694499.4
申请日：2024-05-31
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577 , C07K14/08 , C12N15/70 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及一种识别传染性法氏囊病毒VP2蛋白第343‑348位氨基酸的单克隆抗体制备，本发明提供了一种广谱的识别IBDV VP2高变区蛋白的单克隆抗体5G10，经鉴定重链亚型为IgG1，其识别的线性抗原表位位于343PGALRP348。与现有技术相比，本发明的有益技术效果在于：1）本发明以IBDV新型变异株VP2的高变区蛋白作为免疫原，该段序列抗原性和亲水性良好，制备的重组蛋白rVP2‑HVR以可溶性形式表达于上清中。2）本发明制备的单克隆抗体5G10与不同毒力IBDV毒株的VP2蛋白均有良好的反应性，可用于IBDV的检测。3）本发明制备的单克隆抗体5G10所识别的抗原表位为线性表位，其所识别的关键氨基酸位于VP2 343PGALRP348。
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公开(公告)号：CN117825704A
公开(公告)日：2024-04-05
申请号：CN202410020201.1
申请日：2024-01-07
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , G01N33/535 , C07K14/075 , C12N15/70 , C12N5/20 , C12N15/34 , C07K16/08
Abstract: 本发明涉及一种基于Fiber‑2蛋白和抗Fiber‑2蛋白单克隆抗体的检测鸭3型腺病毒抗体的竞争ELISA方法，首次使用单克隆抗体进行鸭3型腺病毒抗体的检测，与间接ELISA技术相比，本发明的特异性高，能够有效提高检测的准确性，且不依赖于商品化的酶标二抗，可以应用于不同物种（鸡、鸭和鹅）血清中鸭3型腺病毒抗体检测，是一种简便、快速、稳定、特异的检测鸭3型腺病毒抗体的ELISA方法。使用本发明只需采集鸭群的血清，即可快速准确地检测血清中是否含有鸭3型腺病毒抗体，本发明适合应用于基层鸭群的大批量检测。本发明为鸭3型腺病毒的感染检测以及免疫效果监测提供了技术支持，具有一定的市场应用价值。
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公开(公告)号：CN113005101A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110332197.9
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其载体骨架为野生型血清4型禽腺病毒SD株；本发明所述的一种基于CRISPR‑Cas9技术的F2部分缺失型重组血清4型禽腺病毒的构建及其应用，选择当下流行的血清4型禽腺病毒作为骨架，通过银染、质谱和免疫共沉淀等技术发现并鉴定FAdV‑4中F2基因与宿主蛋白互作的功能区，随后将功能区删除后成功获得了F2部分缺失型重组FAdV‑4病毒，在体内及体外实验结果均显示，FA4‑Del重组病毒毒力显著降低，能够为SPF鸡提供很好的免疫保护。
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公开(公告)号：CN119101660A
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202410802456.3
申请日：2024-06-20
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , C07K14/075 , G01N33/577 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种识别高致病性血清4型禽腺病毒Hexon蛋白第188位氨基酸的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用，该细胞株2C5的保藏编号为CGMCC NO.45829，并分泌一种特异性识别高致病性血清4型禽腺病毒六邻体Hexon蛋白单克隆抗体2C5，其识别的抗原表位的氨基酸序列为Hexon蛋白GPGRNP，其中Hexon蛋白中R188氨基酸是其识别的关键氨基酸。本发明制备的单抗2C5具有高致病性FAdV‑4的特异性，能够特异性识别高致病性FAdV‑4，而与非致病性FAdV‑4和其他血清型的FAdV没有交叉反应，可作为诊断试剂应用于区分高致病性FAdV‑4和非致病性FAdV‑4。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118185885A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410361207.5
申请日：2024-03-27
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术构建的表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，H3N8禽流感病毒HA蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，其中使用H3N8禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入H3N8禽流感病毒HA基因，成功获得了表达H3N8禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，此重组病毒可作为免疫防控H3N8以及血清4型腺病毒的二联疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN113354717B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202110631147.0
申请日：2021-06-07
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K14/165 , C07K19/00 , C12N15/50 , C12N15/70 , C07K16/10 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113201561A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110497755.7
申请日：2021-05-08
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及到一种精确敲除鸡NHE1基因W38位氨基酸的细胞系构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡NHE1基因W38位氨基酸的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因位点的精确敲除，通过药物筛选及亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源NHE1基因W38位敲除的细胞系。
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公开(公告)号：CN113061586A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110332476.5
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/113 , C12N15/34 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，发明的原理和最核心的关键技术是利用sgRNA，替换EGFP后进行病毒纯化，获得可以稳定扩增血清8型禽腺病的纤突蛋白的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F，成功获得了表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白的重组FAdV‑4，在体外实验结果显示，FAdV4‑F1‑F‑F2重组病毒与FAdV‑4野毒的复制能力几乎相同，可作为防控FAdV‑4和FAdV‑8的灭活重组多价苗。
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公开(公告)号：CN109295010B
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM‑F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于‑80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF‑1细胞和BHK‑21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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