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公开(公告)号：CN102660515B
公开(公告)日：2013-12-11
申请号：CN201210145179.0
申请日：2012-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活性提高的谷氨酰胺转氨酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以MTG在大肠杆菌中的高效表达为改造平台，对MTG成熟酶N端氨基酸进行缺失和饱和突变，得到了酶学性质较好的突变株，比酶活提高1.85倍，热稳定性提高2.7倍。改造后的酶更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN102559628A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201210035336.2
申请日：2012-04-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种添加IPTG、低温策略诱导提高重组Escherichia Coli(大肠杆菌)BL21(DE3)发酵生产pro-TGase(谷氨酰胺转胺酶酶原)的方法。本发明采用分泌性表达载体pET22b重组Escherichia Coli BL21(DE3)为发酵菌株，初始生长阶段控制温度为37℃，当菌体生长至一定菌体浓度时进行降温诱导，添加终浓度为0.4mM的IPTG，降温至20℃，诱导pro-TGase的表达。通过在发酵过程中降低诱导阶段温度，最终实现了提高pro-TGase产量的目标。本发明的优点是能有效地提高pro-TGase的产量及生产强度，并减少发酵液中杂蛋白的含量，提高了下游提取时的效率，增加了产品纯度，并且减少了能耗，有利于工业化大规模生产。
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公开(公告)号：CN102367437A
公开(公告)日：2012-03-07
申请号：CN201110326843.7
申请日：2011-10-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种重组大肠杆菌发酵生产果胶酶的方法，属于发酵工程技术领域。以Escherichia coliBL21DE3)为出发菌株，按照一定比生长速率流加甘油培养基，本发明简单易行，大幅提高了碱性果胶酶的产量与生产强度以及分泌表达效率，有利于大规模工业化生产，同时对于指导其他大肠杆菌表达系统分泌表达外源蛋白量具有重要意义。
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公开(公告)号：CN102080054A
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN201010581331.0
申请日：2010-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产PVA脱氢酶（polyvinylalcoholdehydrogenase,EC1.1.99.23，简称PVADH）的基因工程菌及其构建方法与应用，属于遗传工程领域。本发明通过将优化后的PVA脱氢酶基因连接到毕赤酵母GS115（Pichiapastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达PVA脱氢酶的基因工程菌，解决了PVA脱氢酶产量低的问题。应用该菌种生产PVA脱氢酶，产量高达110U/mL，工艺简单、便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN100500833C
公开(公告)日：2009-06-17
申请号：CN200610097161.2
申请日：2006-10-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 添加十六烷基三甲基溴化铵提高谷氨酰胺转胺酶产量的方法，涉及吸水链霉菌发酵制备谷氨酰胺转胺酶技术领域。本发明采用吸水链霉菌为发酵菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中经液体发酵制备谷氨酰胺转胺酶。通过在发酵过程中添加十六烷基三甲基溴化铵，实现了提高谷氨酰胺转胺酶产量的目标。本发明的优点是所用十六烷基三甲基溴化铵用量较少，且价格低廉，可显著提高谷氨酰胺转胺酶的产量，在其它培养条件相同的情况下，本发明比不添加十六烷基三甲基溴化铵的对照例提高产量达24.7%，达到发酵法制备谷氨酰胺转胺酶的先进水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101698836B
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN200910223521.2
申请日：2009-11-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种谷氨酰胺转胺酶发酵过程中的补料方法，特别涉及一种提高谷氨酰胺转胺酶发酵过程中溶氧的补料方法。在吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus CCTCC No.M203062)发酵8h-16h，通过流加氮比为1.0-1.5的葡萄糖(800g/L)与蛋白胨(800g/L-1200g/L)的混合液控制比生长速率为0.15h-1，16h-24h，通过流加混合液控制比生长速率为0.10h-1。此方法一方面避免氮源被谷氨酰胺转胺酶交联，影响了发酵过程中的溶氧水平；另一方面通过流加氮源的方式，提高了菌体的生物量。该方法的效果是显著的，生物量提高125-140％，酶活提高了58-63％。
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公开(公告)号：CN102277317B
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201110212308.9
申请日：2011-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产脂肪氧合酶的铜绿假单胞菌及其筛选方法和应用，属于生物技术领域。本发明将土壤样品涂布于含有亚油酸和β-胡萝卜素的筛选平板上进行初筛，挑选有变色圈的菌株进行摇瓶复筛。成功筛选得到一株能产脂肪氧合酶的铜绿假单胞菌。本发明有效地提高了筛选产脂肪氧合酶菌株的效率，可用于选育产脂肪氧合酶的菌株。
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公开(公告)号：CN102643820A
公开(公告)日：2012-08-22
申请号：CN201210145188.X
申请日：2012-05-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种优化的谷氨酰胺转胺酶启动子，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。应用本发明提供的启动子可使MTG产量达到4U/mL，提高了1倍。通过本发明提供的启动子及发酵方法，实现了MTG在S.lividan TK24中高效率分泌性表达，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN102586164A
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN201210034340.7
申请日：2012-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效分泌谷氨酰胺转胺酶的变铅青链霉菌(Streptomyces lividan)，其细胞内含有高效表达MTG基因的载体pIJ86/tg1，MTG基因如Genebank：EU477523所示，通过发酵优化本发明以pIJ86为表达载体，利用TGase天然启动子、信号肽构建了TGase表达载体pIJ86/tg1，并将它们转化表达宿主S.lividans TK24。在较优的发酵条件下，S.lividansTK24(pIJ86/tg1)摇瓶发酵的TGase活力可达到3.0U/mL，3L发酵罐培养最高酶活为2.3 U/mL。通过本发明提供的工程菌及发酵方法，实现了MTG在S.lividan TK24中高效率分泌性表达，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN101121747B
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN200710023721.4
申请日：2007-07-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法，属于生物制品的分离纯化技术领域。本发明采用吸水链霉菌为出发菌株，经液体深层发酵制备的谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子，在经过乙醇沉淀、阳离子交换色谱和疏水色谱之后，得到了电泳纯的谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子溶液，可用于后续的蛋白质测序和性质研究。该方法步骤简单，酶纯度高，是一种简便有效的酶分离纯化方法。
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