公开(公告)号：CN111518777A

公开(公告)日：2020-08-11

申请号：CN202010426012.6

申请日：2020-05-19

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  王伟康 ,  秦爱建 ,  张伟 ,  隆玉兰 ,  谢泉 ,  张建军 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/866 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。

公开(公告)号：CN110423785A

公开(公告)日：2019-11-08

申请号：CN201910455249.4

申请日：2019-05-29

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  谢泉 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及到一种利用CRISPR-Cas9特异性靶向获得敲除鸡KPNA3基因的细胞系及其构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡KPNA3基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单个细胞株，从而获得鸡源KPNA3敲除的细胞系。通过本发明，本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡KPNA3基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。

公开(公告)号：CN109295012A

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201811212808.0

申请日：2018-10-18

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  吕璐 ,  李拓凡 ,  谢菁 ,  邵红霞 ,  秦爱建

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/48 ,  C12N15/63

Abstract: 本发明公开了一种构建表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV-J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV-K-env基因引物序列；PCR扩增ALV-K囊膜蛋白基因片段和ALV-J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF-1细胞拯救出表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV-J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV-K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV-K的中和抗体提供靶向病毒。

公开(公告)号：CN117384865A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311341861.1

申请日：2023-10-17

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  谢泉 ,  袁雅琴 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/861 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，其主体为野生型血清4型禽腺病毒SD株；所述血清8a型禽腺病毒的Fiber蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用血清8a型禽腺病毒Fiber基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的19位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的FAdV‑4毒株作为载体，将FAdV‑4的毒力基因Fiber‑2替换为FAdV‑8a的保护性抗原Fiber基因，获得高度致弱的表达FAdV‑8a的Fiber蛋白的重组FAdV‑4，为防控FAdV‑4和FAdV‑8a提供生物材料和技术支撑。

公开(公告)号：CN116970575A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202310903552.2

申请日：2023-07-22

Applicant: 扬州大学

Inventor： 万志敏 ,  李亚锋 ,  龚简汐 ,  赵喆泓 ,  姜文杰 ,  汤婷 ,  叶建强 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  李拓凡 ,  谢泉

IPC: C12N7/01 ,  C12N7/02 ,  C12N15/861 ,  C12N15/34 ,  C12N15/44 ,  C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  A61K39/145 ,  A61K39/235 ,  A61K39/295 ,  A61P31/16 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其的制备方法，H7N9禽流感病毒HA蛋白序列如SEQ ID NO.1所示；所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用H7N9禽流感病毒HA基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸。本发明的关键技术是利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入H7N9禽流感病毒HA基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达H7N9禽流感病毒HA蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为制备血清4型禽腺病毒和H7N9禽流感病毒二联疫苗奠定了基础。

公开(公告)号：CN116855459A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202310309128.5

申请日：2023-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 巢逸飞 ,  叶建强 ,  汤也 ,  谢泉 ,  刘时 ,  郭艺文 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/45 ,  C12N15/861 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新城疫病毒La Sota毒株HN蛋白，序列如SEQ ID NO.1所示。所述重组血清4型禽腺病毒，其中使用新城疫病毒La Sota毒株HN基因替换FAdV‑4的Fiber‑2基因，替换的是FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新城疫病毒HN基因，成功获得新城疫病毒HN蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新城疫病毒提供技术支撑和弱毒二联疫苗候选。

公开(公告)号：CN116426489A

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202310320468.8

申请日：2023-03-27

Applicant: 扬州大学

Inventor： 蒋蕙如 ,  叶建强 ,  任丹 ,  曹旭东 ,  郭艺文 ,  李涵 ,  殷楠 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  钱琨 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/861 ,  C12N15/40 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，所述新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端，其序列如SEQ ID NO.1所示。重组血清4型禽腺病毒，其中使用新型鹅星状病毒GD毒株ORF2蛋白C端替换FAdV‑4的Fiber‑2基因的253位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。通过本发明，利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端，成功获得表达新型鹅星状病毒ORF2蛋白C端的重组血清4型禽腺病毒，为同时免疫防控血清4型禽腺病毒和新型鹅星状病毒提供了技术支撑与二联弱毒疫苗候选。

公开(公告)号：CN115840044A

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202211251264.5

申请日：2022-10-13

Applicant: 扬州大学

Inventor： 高巍 ,  任丹 ,  叶建强 ,  万志敏 ,  李拓凡 ,  谢泉

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/68 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明涉一种检测新型鹅星状病毒ORF2蛋白抗体的特异性多肽‑ELISA试剂盒及其方法，所述试剂盒包含包被GAstV独有特异性多肽的酶标板、阳性阴性对照、HRP标记的兔抗鸡二抗、样品稀释液、洗涤液、显色液以及终止液；所述包被的GAstV独有特异性多肽是根据GAstV线性B细胞抗原表位序列设计合成，具体的序列如下：CQTLTDPEEDDDPLSDVTSLFD。通过本发明，可以实现快速特异检测GAstV抗体。此试剂盒能用于大规模血清学检测和流行病学调查，在GAstV感染以及免疫检测中具有良好的应用和推广价值。

公开(公告)号：CN115786282A

公开(公告)日：2023-03-14

申请号：CN202211600743.3

申请日：2022-12-12

Applicant: 扬州大学

Inventor： 郭艺文 ,  邵红霞 ,  林昀 ,  叶建强 ,  谢泉 ,  张雯苑 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/861 ,  C12N15/65 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒的构建，构建方法包括以下步骤：设计针对血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的sgRNA；通过PCR和同源重组的方法构建携带鸭3型腺病毒Fiber‑2基因和RFP表达盒的供体质粒，其中的RFP表达盒两端分别带有LoxP位点；将生长良好的LMH细胞经胰酶消化后接种六孔板培养，第二天转染sgRNA和供体质粒各3μg，转染6h后换成细胞生长液；转染48h后感染血清4型禽腺病毒，感染2h后换成细胞维持液；感染血清4型禽腺病毒后观察RFP红色荧光，进行红色荧光重组病毒的纯化，获得带有RFP表达盒的表达鸭3型腺病毒Fiber‑2蛋白的重组血清4型禽腺病毒。通过本发明，为构建鸭3型腺病毒和血清4型禽腺病毒的二价疫苗提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN113354717A

公开(公告)日：2021-09-07

申请号：CN202110631147.0

申请日：2021-06-07

Applicant: 扬州大学

Inventor： 叶建强 ,  李拓凡 ,  阚秋琪 ,  秦爱建 ,  万志敏 ,  邵红霞 ,  谢泉

IPC: C07K14/165 ,  C07K19/00 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。