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公开(公告)号：CN117004748A
公开(公告)日：2023-11-07
申请号：CN202311200379.6
申请日：2023-09-18
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6841 , C12Q1/6869 , G01N15/14
Abstract: 一种基于MDC‑FFFISH‑FACS定向分离土壤中目标微生物的方法，通过膜扩散(MDC)方式富集目标微生物，根据其16S rRNA基因序列设计寡核苷酸探针，按照无固定的荧光原位杂交(FFFISH)方式对目标微生物进行杂交，最后采用荧光激活流式细胞仪(FACS)对目标微生物进行单细胞分离。本发明为单细胞测序获得未培养微生物基因组揭示功能提供材料，从而使未培养的微生物可以更高效的被获得和研究，集富集、标记、分选于一体，可以准确标记并分离到目标微生物。
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公开(公告)号：CN108676723A
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201810580803.7
申请日：2018-06-07
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一株海洋珊瑚来源新属、新种藻及其分离培养方法；所述珊瑚来源新属、新种藻是保藏编号为CCTCC NO：M2018096的珊瑚来源新属、新种藻Symbiochlorium hainandiae Un01；该微藻为绿藻门，石莼纲一新属、新种，与已公开发表的近缘藻类在来源、形态、进化方面存在较大差异；该藻为研究海洋藻类功能以及该藻与珊瑚可能的共生关系提供了良好的研究材料，在珊瑚人工培育、珊瑚礁重建、新型藻类材料等方面也具有应用潜力。
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公开(公告)号：CN103497975A
公开(公告)日：2014-01-08
申请号：CN201310275382.4
申请日：2013-07-02
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种伏立诺他的用途及促进海绵共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法；所述伏立诺他能够促进海绵共生土曲霉合成(+)-Terrein；本发明还涉及前述伏立诺他促进海绵共生土曲霉合成(+)-Terrein的方法，包括如下步骤：在海绵共生土曲霉发酵的过程中添加伏立诺他。本发明在摇瓶水平上，于第4天添加终浓度为900μM的伏立诺他，24天后，(+)-Terrein的产量达到5.58g/L，较未添加时的产量为4.31g/L，提高了49.8%，(+)-Terrein的产量有较为显著的提高；本发明方法简单，容易实现，效率高，效果显著，有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN101914615B
公开(公告)日：2012-09-05
申请号：CN201010186100.X
申请日：2010-05-28
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一种亚历山大藻荧光定量聚合酶链反应标准品的构建方法，通过提取A.catenella ACDH01的DNA，聚合酶链反应扩增A.catenella的18SrDNA到28S rDNA基因片段，并将扩增产物和T载体连接，构建重组质粒。经确认的重组质粒梯度稀释成聚合酶链式反应标准品；以5.8S-b5’和5.8S-b3’为引物，以重组质粒标准品为模板，real-time聚合酶链反应，根据反应中的临界循环数以及重组质粒标准品的梯度浓度对数值制备标准曲线。本发明建立了带有A.catenella的18S rDNA-28S rDNA基因片段的重组质粒real-time聚合酶链反应标准品，采用一对通用引物，可以准确、高效、快速地对待测的亚历山大藻real-time聚合酶链反应检测。
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公开(公告)号：CN102559780A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110311460.2
申请日：2011-10-14
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种海绵共生土曲霉发酵制备Terrein的培养基及其制备方法。所述培养基包括：葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、麦芽提取物、谷氨酸钠、氯化铵以及人工海水。优选方案为所述培养基具体为：当培养基中含有的人工海水为1L时，培养基含有葡萄糖28.41g、麦芽糖23.18g、甘露醇20.00g、麦芽提取物8.52g、谷氨酸钠10.00g、氯化铵10.00g。所述制备方法，包括以下步骤：第一步，配制人工海水；第二步，在配制好的人工海水中加入葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、麦芽提取物、谷氨酸钠和氯化铵并搅拌溶解，然后进行高温杀菌得到培养基。与现有技术相比，采用本发明方法成功的对海绵共生土曲霉产Terrein的培养基成分进行了优化，使得Terrein产量有明显提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101974626A
公开(公告)日：2011-02-16
申请号：CN201010503053.7
申请日：2010-10-12
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种细菌检测技术领域的基于量子点荧光原位杂交的海绵细胞内共生细菌的检测方法，通过获取海绵单细胞，按照经典的荧光原位杂交方法，采用生物素标记的寡核苷酸探针对海绵单细胞内的微生物基因组DNA进行杂交，最后采用链亲和素标记的量子点进行孵育处理，得到在激发光为紫外区的荧光显微镜下呈现蓝色的海绵细胞以及呈现红色的细菌。本发明将机械法与化学法相结合，可以快速获取海绵细胞，避免海绵细胞自发荧光的干扰，成功探测到海绵细胞内的细菌。
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公开(公告)号：CN101914615A
公开(公告)日：2010-12-15
申请号：CN201010186100.X
申请日：2010-05-28
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一种亚历山大藻荧光定量聚合酶链反应标准品的构建方法，通过提取A.catenella ACDH01的DNA，聚合酶链反应扩增A.catenella的18SrDNA到28S rDNA基因片段，并将扩增产物和T载体连接，构建重组质粒。经确认的重组质粒梯度稀释成聚合酶链式反应标准品；以5.8S-b5’和5.8S-b3’为引物，以重组质粒标准品为模板，real-time聚合酶链反应，根据反应中的临界循环数以及重组质粒标准品的梯度浓度对数值制备标准曲线。本发明建立了带有A.catenella的18S rDNA-28S rDNA基因片段的重组质粒real-time聚合酶链反应标准品，采用一对通用引物，可以准确、高效、快速地对待测的亚历山大藻进行real-time聚合酶链反应检测。
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公开(公告)号：CN101871009A
公开(公告)日：2010-10-27
申请号：CN201010199187.4
申请日：2010-06-13
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一种海绵共附生抑菌活性菌株筛选方法，将海洋细菌pks基因分子生物学筛选与抑菌活性检测相结合，首先，分离纯化海绵共附生菌株，通过酚-氯仿方法提取海绵共附生菌DNA并以此为模板，以细菌pks基因的ks域通用引物GB1/GB2为引物，进行聚合酶链反应扩增pks基因片段，获得海绵共附生菌的690bp片段经测序后，提交Genbank，并Blast分析；测定pks阳性菌株的抑菌活性；以筛选到有690bp目标片段的抑菌活性菌株DNA为模板，以细菌16S rDNA通用引物27f/1492r为引物，聚合酶链反应扩增目的片段以及测序鉴定，所获得的序列提交GenBank，并Blast分析，确定pks基因片段阳性海绵共附生抑菌活性菌株的种属。
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公开(公告)号：CN1326866C
公开(公告)日：2007-07-18
申请号：CN200510029320.0
申请日：2005-09-01
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种海绵共附生微生物群落总DNA的快速提取方法。先将海绵样品切成小块，悬浮于TE缓冲液中放置冰上直接研磨，完成海绵组织的裂解；然后在得到的TE悬浮海绵裂解物中，加入溶菌酶、十二烷基磺酸钠及蛋白酶K处理；离心后加入Tris-饱和酚抽提，然后依次采用Tris-饱和酚、氯仿、异戊醇溶液及氯仿、异戊醇溶液提取；再依次加入NaCl及异丙醇得到DNA沉淀，洗涤后溶解于TE缓冲液，采用RNA酶消解RNA；最后琼脂糖凝胶电泳分析检测提取的DNA样品。本发明可在一般实验室快速、方便地得到大片段的海绵共附生微生物的群落总DNA样品，可满足基于核酸的海绵共附生微生物种群结构与多样性分析的需要。
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公开(公告)号：CN1320098C
公开(公告)日：2007-06-06
申请号：CN200510029319.8
申请日：2005-09-01
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种海绵共生微生物混合培养及可培养种群监测方法。无菌水洗净海绵表面附生微生物后以人工海水浸泡、震荡释放海绵体内共生微生物制备种子液；用乙醇提取制备海绵浸出汁，添加进海水培养基中制成复合培养基；接种进行混合微生物培养。提取混合培养的微生物总DNA，采用细菌通用引物PCR扩增得到小于500bp的16S rDNA片段，进行变性梯度凝胶电泳得到基因指纹图谱；通过不同培养时间混合微生物样品指纹图条带的回收、克隆测序、同源性与系统发育分析鉴定微生物种群中的细菌种类，实现体外混合培养海绵共生微生物种群的监测。本发明可提高海绵共生微生物体外分离与培养的效率，也为制备多菌诱导产生的活性物质提供原料和技术支撑。
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