线粒体替代实验小鼠品系C57BL/6J-MitC3H/HeJ的构建

    公开(公告)号:CN101502248A

    公开(公告)日:2009-08-12

    申请号:CN200810202245.7

    申请日:2008-11-05

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及线粒体替代实验小鼠品系C57BL/6J-MitC3H/HeJ的构建,包括:(1)回交取C3H和B6两种品系的小鼠,以C3H做母本,B6做父本杂交得F1代;将F1代母鼠与B6雄鼠杂交得C3B61,为回交一代;以此轮回杂交十代,得到回交十代的小鼠C3B610;(2)鉴定回交(a)通过Blast两品系小鼠的线粒体序列,找到4个SNP位点,本实验通过扩增线粒体片段再对片段进行测序,鉴定回交小鼠的线粒体DNA;(b)从小鼠全基因组中随机选取40个STR位点,对40个STR位点进行引物设计,鉴定回交小鼠的基因组DNA。本发明用于研究小鼠性发育启动的影响。

    通用方案和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法

    公开(公告)号:CN101245388A

    公开(公告)日:2008-08-20

    申请号:CN200810034460.0

    申请日:2008-03-11

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及通用方案和构象敏感凝胶电泳筛查单核苷酸多态性位点法,该方法首先利用通用引物方案对目的核酸序列区段进行PCR扩增,再应用F-CSGE技术进行高通量快速检测,最后通过DNA测序技术对筛查出的位点进行最终确证。与其他检测方法比较,本发明方法通量更高,检测速度更快,成本更低,可用于检测未知SNP和致病基因的单碱基突变,用于未知单碱基多态性、基因突变、单碱基插入或缺失等单碱基改变的筛查和确认。

    一种利用实时荧光定量PCR技术精确检测端粒绝对长度的方法

    公开(公告)号:CN118064558A

    公开(公告)日:2024-05-24

    申请号:CN202410124430.8

    申请日:2024-01-29

    Abstract: 本申请涉及分子检测领域,公开了一种利用实时荧光定量PCR技术精确检测端粒绝对长度的方法,包括以下步骤:1,合成端粒引物和内参引物;2,提取基因组DNA;3,qPCR扩增;4,以标准品的端粒或者内参CT值作为横坐标,标准品3个浓度梯度的log2为纵坐标构建端粒和内参的拟合方程,待测样本与校正品带入拟合方程分别计算端粒T/S值,校正品的绝对长度/检测长度得到校正系数,待测样本的T/S值都要用校正系数进行校正,样本的绝对长度利用校正后T/S*标准品绝对长度得到。本申请的方法,检测结果的稳定性大大提高,且检测结果更加准确,实现了利用实时荧光定量PCR技术个性化检测端粒绝对长度。

    一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法

    公开(公告)号:CN106544322A

    公开(公告)日:2017-03-29

    申请号:CN201611108955.4

    申请日:2016-12-06

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种用于研究Kiss1基因表达调控的报告系统及其构建方法,所述系统为红色荧光蛋白稳定表达,绿色荧光受Kiss1表达调控元件调控的双荧光Kiss1基因表达调控报告系统。构建方法包括:构建红色荧光蛋白打靶载体Ai9‑dtomato;构建绿色荧光蛋白打靶系统;EGFP受Kiss1表达调控元件控制的Cas9‑GT1‑7‑Kiss1‑2A‑EGFP细胞的构建;插入稳定表达的红色荧光背景,即得。本发明实现对研究对象对Kiss1作用效应的量化评估。

    一种逆转录miR-505的茎环引物的设计方法

    公开(公告)号:CN104372083B

    公开(公告)日:2016-11-16

    申请号:CN201410606864.8

    申请日:2014-10-31

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种逆转录miR‑505的茎环引物的设计方法,包括:以miRNA‑505‑3P基因为特异性的转录本,分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度,经过对miRNA‑505‑3P的逆转录和real time‑PCR检测,最终筛选出一个对于miRNA‑505‑3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰,通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整,可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响,因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。

    一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法

    公开(公告)号:CN105177111A

    公开(公告)日:2015-12-23

    申请号:CN201510587021.2

    申请日:2015-09-15

    Applicant: 东华大学

    Abstract: 本发明涉及一种热启动Taq酶的热启动效率表征方法,所述表征方法为手工热启动法、热变性时间法、最低循环数法、多重PCR法以及热变性时间与多重PCR法结合。本发明的热启动Taq酶,解决了使PCR反应发生引物二聚体以及非特异性的扩增,影响产物的特异性的问题。本发明的热启动Taq酶热启动效率表征方法从多个角度进行验证,及对热启动效率进行半定量的评估,可以保证结果的可靠性。

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