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公开(公告)号：CN107099608A
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201710443863.X
申请日：2017-06-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 金瑞鸿捷(厦门)生物科技有限公司 , 北京华安瑞基生物科技有限公司
CPC classification number: C12Q1/689 , C12Q2600/166
Abstract: 本发明公开了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的iiPCR试剂盒，它属于分子生物学检测领域。所述试剂盒包括：Premix Ex Taq引物Mccp‑specific‑Forward和Mccp‑specific‑Revers，探针Mccp‑specific‑Probe，阴性对照和阳性对照。本发明将检测结果同之前建立的山羊支原体山羊肺炎亚种实时荧光定量PCR检测结果进行比较，发现两种方法的符合率为100％。同时，本发明也对试剂盒的稳定性进行了检测，发现在‑20℃条件下，试剂盒至少可以保存一个月，这为山羊支原体山羊肺炎亚种的现场检测提供了极大的便利，省去了现场操作带来的交叉污染以及费时费力等问题。
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公开(公告)号：CN109680080B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN201811514580.0
申请日：2018-12-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/35
Abstract: 本发明公开了一种牛支原体的nfo‑RPA检测方法及检测试剂盒。本发明通过以牛支原体的P80基因序列为模板，从P80基因克隆出包含R1序列的M.b序列，以该R1序列为目标设计探针M.b‑specific‑Probe；其中，所述M.b序列如SEQ ID NO：1所示。相应的，本发明的检测试剂盒，其成分除了商品化的Freeze‑dried reaction，280mM MgAc，Rehydration buffer，Test device和PCRD Extraction buffer外，主要包括特别设计的牛支原体特异性的引物、探针及配套试剂：M.b‑specific‑Forward，M.b‑specific‑Reverse，M.b‑specific‑Probe，Nuclease‑free water，阳性对照模板。本发明除了用于实验室常规检测牛支原体核酸外，特别适用于无实验室条件下(如基层兽医部门、养殖场等)的现场检测，具有高特异性和灵敏性，是一种快速、准确的牛支原体核酸检测试剂盒，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112760392B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN202011284368.7
申请日：2020-11-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于检测绵羊肺炎支原体的特异性PCR引物，本发明首先通过对绵羊肺炎支原体基因测序和对比，筛选到用于检测绵羊肺炎支原体的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其特异性PCR引物，可将Mo与Mccp、Mmc、精氨酸支原体以及常见反刍动物支原体、细菌区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mo诊断技术。
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公开(公告)号：CN106591177B
公开(公告)日：2020-04-21
申请号：CN201611070622.7
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种低血清高效培养基，含有以下组分：PPLO肉汤、丙酮酸钠、乳糖、胰蛋白胨、新鲜酵母浸出液、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、马血清、青霉素、酚红、去离子水；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的山羊支原体山羊肺炎亚种培养基血清含量仅为5%，仅为现有技术培养基血清量的1/5～1/4；此外，用本发明方法制备的半成品菌液滴度达1010 CCU/ml，明显高于现有技术培养基。本发明低血清高效培养基培养山羊支原体山羊肺炎亚种，既有利于减轻异源血清对羊体的过敏应激反应，提高生物安全，又提高了活菌滴度，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN106635865A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201610689925.0
申请日：2016-08-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤10.5 g、脑心浸出液8.0 g、氯化钠4.0 g、硫酸镁0.05 g、氯化钾0.2 g、氯化钙0.09 g、磷酸氢二钠0.024 g、磷酸二氢钾0.03 g、葡萄糖5.0 g、水解乳蛋白5.0 g、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法及应用。本发明的有益效果为：本发明提供的一种用于牛鼻支原体分离纯化的培养基及其制备方法和应用，与现有技术相比，具有生长迅速和滴度高的特点，分离出牛鼻支原体的成功率高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106479936A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611071307.6
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12N1/20
Abstract: 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体低血清培养基，含有以下组分：PPLO肉汤、丙酮酸钠、酚红、去离子水、乳糖、胰蛋白胨、新鲜酵母浸出液、胰岛素、L-谷氨酰胺、L-半胱氨酸、水解乳蛋白、转铁蛋白、青霉素和少量马血清；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的绵羊肺炎支原体培养基血清含量仅为5%，是现有技术培养基血清含量的1/4；培养绵羊肺炎支原体活菌滴度达7×109 CCU/ml，明显高于现有技术培养基。与现有技术相比，本发明的绵羊肺炎支原体低血清培养基具有血清含量低、生长迅速和活菌滴度高的特点。
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公开(公告)号：CN110819684B
公开(公告)日：2022-09-13
申请号：CN201910834074.8
申请日：2019-09-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/04
Abstract: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进行比较判定。本发明的方法具有操作简单、成本低、无需复杂动物饲养条件、实验动物易得、耗时短、重复性好等优点，大大减少动物试验工作量，避免了现有技术实验动物山羊存在价格较为昂贵、个体差异较大且饲养要求较高、试验操作复杂、试验周期长、工作量大等不足。
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公开(公告)号：CN111323602A
公开(公告)日：2020-06-23
申请号：CN202010178953.2
申请日：2020-03-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37℃温箱1h后4℃过夜；加入封闭液，37℃封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37℃孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。
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公开(公告)号：CN106350472B
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201611072164.0
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开一种牛支原体液体培养基及其制备方法，涉及兽医生物技术领域。本发明的牛支原体液体培养基由基础培养基和辅助培养基混合构成，培养基的组成为：蛋白胨、葡萄糖、丙酮酸钠、新鲜酵母浸出液、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、转铁蛋白、胰岛素、少量马血清、青霉素、酚红、去离子水。本发明的牛支原体培养基有利于牛支原体的生长，活菌滴度达1010CCU/ml，明显高于现有技术培养基。此外，本发明培养基中血清含量仅为5%，为现有技术培养基血清含量的1/4～1/2。与现有技术相比，本发明培养基具有血清含量低、生长迅速和活菌滴度高的特点。
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公开(公告)号：CN110256555A
公开(公告)日：2019-09-20
申请号：CN201910483526.2
申请日：2019-06-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/12 , C12N5/20 , G01N33/569 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种丝状支原体簇单克隆抗体及其制备方法和应用，所述丝状支原体单克隆抗体通过支原体培养和免疫原制备、动物免疫、细胞融合及阳性杂交瘤细胞筛选和克隆获得，所述支原体为山羊支原体山羊肺炎亚种M1601，细胞融合时髓瘤细胞和脾细胞的数量比为1/5～1/10，得到的丝状支原体簇单克隆抗体杂交瘤细胞株为5E5，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为C201972。所述的丝状支原体簇单克隆抗体可用于区分丝状支原体簇和细菌/病毒类病原体。本发明的杂交瘤细胞株能够分泌稳定的丝状支原体簇单克隆抗体特异性好，能够有效区分丝状支原体簇和其他常见反刍动物支原体。
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