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公开(公告)号：CN116083519A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202211648260.0
申请日：2022-12-21
Applicant: 云南农业大学 , 云南云科特色植物提取实验室有限公司
Abstract: 本发明属于酶活性检测技术领域，具体涉及一种基于荧光检测的短链脱氢还原酶(SDR酶)活性的高通量测定方法及其应用。所述高通量测定方法包括以下步骤：(1)SDR粗酶的表达；(2)SDR粗酶中SDR目标蛋白的提取；(3)NADH的荧光信号检测，以确定所述SDR酶活性；其中，优选地，所述测定方法是在96孔板中进行的。本发明提供的基于荧光检测的SDR酶活性的高通量测定方法通量高、灵敏度高、操作方便、成本低廉，为快速、高效筛选SDR酶突变体的催化活性，提高SDR酶筛选过程中的定向进化效率提供了新方法，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN115896136A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202211655229.X
申请日：2022-12-22
Applicant: 云南农业大学 , 云南云科特色植物提取实验室有限公司
Abstract: 本发明涉及一种与葫芦二烯醇羟化相关的细胞色素P450基因及其编码产物，属于基因工程领域。所述基因其核苷酸分别如SEQ ID NO：1‑5所示。本发明还提供了与基因相关的编码蛋白、载体、工程菌以及应用。
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公开(公告)号：CN117417949B
公开(公告)日：2024-12-20
申请号：CN202311356007.2
申请日：2023-10-19
Applicant: 云南农业大学 , 云南云科特色植物提取实验室有限公司
Inventor： 张广辉 , 李志远 , 杨生超 , 郝冰 , 陈庚 , 舒彦宇 , 冯孝林 , 马迪娜 , 和四梅 , 卢迎春 , 马骁 , 马飞飞 , 郭振宇 , 黄春丽 , 贺雪颖 , 张建丽
Abstract: 本发明提供了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58基因，所述基因的序列如SEQ NO：1所示。本发明构建了雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58转基因酵母工程菌，该菌能够高产多种葫芦素中间体，包括11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,20,25‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑3β,20,23‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑20,25‑diol‑3β‑one和11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑20,23‑diol‑3β‑one，为葫芦素生产提供了来源。
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公开(公告)号：CN117844830A
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN202410119212.5
申请日：2024-01-29
Applicant: 云南农业大学 , 云南云科特色植物提取实验室有限公司
Inventor： 张广辉 , 黄春丽 , 杨生超 , 郝冰 , 陈庚 , 舒彦宇 , 李志远 , 冯孝林 , 和四梅 , 卢迎春 , 马骁 , 马飞飞 , 郭振宇 , 马迪娜 , 张建丽 , 贺雪颖 , 刘勤勤
Abstract: 本发明提供了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D19基因，所述基因的序列如SEQNO：1所示。本发明构建了共转染雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D19和HcCYP81Q58的转基因酵母工程菌，该菌能够高产多种葫芦素中间体，包括11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,16a,20,25‑tetrol(6)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,16α,20,25‑tetrol(6b)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑16α,20,25‑triol‑3‑one(6a)、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑16α,20,23‑triol‑3‑one(6c)，为葫芦素生产提供了来源。
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公开(公告)号：CN117417949A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202311356007.2
申请日：2023-10-19
Applicant: 云南农业大学 , 云南云科特色植物提取实验室有限公司
Inventor： 张广辉 , 李志远 , 杨生超 , 郝冰 , 陈庚 , 舒彦宇 , 冯孝林 , 马迪娜 , 和四梅 , 卢迎春 , 马骁 , 马飞飞 , 郭振宇 , 黄春丽 , 贺雪颖 , 张建丽
Abstract: 本发明提供了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58基因，所述基因的序列如SEQ NO：1所示。本发明构建了雪胆细胞色素氧化酶HcCYP81Q58转基因酵母工程菌，该菌能够高产多种葫芦素中间体，包括11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑3β,20,25‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑3β,20,23‑triol、11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,23‑diene‑20,25‑diol‑3β‑one和11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑20,23‑diol‑3β‑one，为葫芦素生产提供了来源。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115161208B
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202210045159.X
申请日：2022-01-15
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种编码短链脱氢酶的基因能催化葫芦二烯醇生成葫芦素中间体cucurbita‑5‑24‑dien‑3‑one，该酶在葫芦二烯醇的C3位进行脱氢反应形成酮基，形成多数葫芦素的骨架，这极大地推动了对葫芦素生物合成分子机理的认知，也将为葫芦素的全合成奠定基础。目前来源于雪胆、南瓜、西瓜、甜瓜、西葫芦、笋瓜等16种葫芦科植物的短链脱氢酶已经被成功克隆验证功能，并使用来源于雪胆的HcSDR1基因，采用酵母同源重组组装构建酿酒酵母底盘细胞生产目标化合物cucurbita‑5‑24‑dien‑3‑one。
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公开(公告)号：CN120005914A
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202510355472.7
申请日：2025-03-25
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP89A140基因及其应用，属于生物技术领域。雪胆细胞色素氧化酶HcCYP89A140基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以11‑Carbonyl‑cucurbita‑5,24‑diene‑3β,16α,20,23‑tetrol为底物，在HcCYP89A140催化下进行C20位羟基和C24位羟基缩合脱水呋喃化，然后再在SDR34的催化下进行C3位酮基化，生成16α,23‑Dihydroxy‑gratiogenin‑3‑one。本发明实现了16，23双羟基化葛兰素的异源合成，对葫芦素类化合物生物合成机制以及其衍生化合物和高效异源合成具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118773148A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202310352553.2
申请日：2023-04-04
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N9/02 , C12N9/10 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N1/21 , C12P17/18 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供一种酶，其同时具有钩吻2‑氧戊二酸双加氧酶和氮甲基转移酶、其基因及其在制备(19(Z)‑anhydrovobaxinediol)上的应用，所述酶具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明出人意料的从钩吻中获得同时具有钩吻2‑氧戊二酸双加氧酶和氮甲基转移酶的基因，通过重组质粒在体外表达后获得同时具有钩吻2‑氧戊二酸双加氧酶和氮甲基转移酶的酶，本发明的酶可以对底物钩吻素戊进行催化，直接生成(19(Z)‑anhydrovobaxinediol)。
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公开(公告)号：CN115161208A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210045159.X
申请日：2022-01-15
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种编码短链脱氢酶的基因能催化葫芦二烯醇生成葫芦素中间体cucurbita‑5‑24‑dien‑3‑one，该酶在葫芦二烯醇的C3位进行脱氢反应形成酮基，形成多数葫芦素的骨架，这极大地推动了对葫芦素生物合成分子机理的认知，也将为葫芦素的全合成奠定基础。目前来源于雪胆、南瓜、西瓜、甜瓜、西葫芦、笋瓜等16种葫芦科植物的短链脱氢酶已经被成功克隆验证功能，并使用来源于雪胆的HcSDR1基因，采用酵母同源重组组装构建酿酒酵母底盘细胞生产目标化合物cucurbita‑5‑24‑dien‑3‑one。
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公开(公告)号：CN116334106A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202211121519.6
申请日：2022-09-15
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因及其转基因工程菌在制备葫芦素中间体中的应用。鉴别获得雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59基因，极大地推进了雪胆素(葫芦素IIa和葫芦素IIb)生物合成路径关键酶基因的挖掘，不仅能够帮助育种家进行分子标记辅助育种，而且还可以借助代谢工程和合成生物学方法对葫芦素进行工业化生产，也将为新药开发提供新的思路。提供了含有雪胆细胞色素氧化酶HcCYP87D20和HcCYP81Q59的重组质粒、转基因工程菌和酿酒酵母重组菌Cuol04，为通过生物工程方法合成11‑羰基‑20β‑羟基‑Cuol、11‑羰基‑Cuol以及11‑羰基‑2β,20β‑二羟基‑Cuol，进一步为雪胆素生物合成调控研究奠定基础。
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