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公开(公告)号：CN110777140B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201911228661.9
申请日：2019-12-04
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供了一种硫酸软骨素酶AC突变体，该突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明同时还通过一种上述硫酸软骨素酶AC突变体的制备方法。本发明通过将野生型硫酸软骨素酶AC氨基酸序列SEQ ID NO:1中的第170位突变为甘氨酸构建硫酸软骨素酶AC突变体，如此，减小了该硫酸软骨素酶AC突变体与多糖底物结合空间位阻，扩大了其与多糖的结合口袋，使其更容易结合多糖底物，从而提高硫酸软骨素酶AC的活性。
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公开(公告)号：CN109777816A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201711120265.5
申请日：2017-11-14
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供了一种ChSaseABC酶蛋白的制备方法，该方法包括：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；将所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及培养所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。本发明还提供一种ChSase ABC酶蛋白及其应用。上述ChSase ABC酶蛋白具有高酶活，能够用于生产低分子量硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
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公开(公告)号：CN108795917A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201810792057.8
申请日：2018-07-18
Applicant: 北京电子科技职业学院
CPC classification number: C12N9/88 , C07K2319/21 , C07K2319/23 , C07K2319/24 , C12N2800/22 , C12P19/26 , C12Y402/02005
Abstract: 本发明提供一种外切型ChSase AC，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供一种外切型ChSase AC融合蛋白，该融合蛋白融合有上述外切型ChSase AC和纯化标签。本发明还提供一种含有上述外切型ChSase AC的重组载体和转化体。本发明提供的外切型ChSase AC的DNA序列对大肠杆菌的偏好性达到90%以上，从而提高了ChSase AC的DNA序列在大肠杆菌中的表达效率，进而直接降低了ChSase AC的生产成本，有利于ChSase AC的推广应用。另外，本发明还提供一种上述外切型ChSase AC的制备方法和应用。上述外切型ChSase AC可以去除类肝素原料中的硫酸软骨素。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110791495B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201911227594.9
申请日：2019-12-04
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供一种硫酸软骨素ABC复合酶，包括硫酸软骨素酶ABC I和硫酸软骨素酶ABC II。所述硫酸软骨素酶ABC I和所述硫酸软骨素酶ABC II的酶活力比为(1～10):(1～10)。所述硫酸软骨素ABC复合酶为固定化酶。本发明还提供一种硫酸软骨素ABC复合酶的应用，利用该复合酶裂解硫酸软骨素。本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶具有协同增效作用，既突破了硫酸软骨素ABC I更偏向于大分子的结合的限制，又突破了硫酸软骨素ABC II对裂解速度的限制；因此，利用本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶可以有效提高裂解底物硫酸软骨素的效率及活性。
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公开(公告)号：CN110791495A
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201911227594.9
申请日：2019-12-04
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供一种硫酸软骨素ABC复合酶，包括硫酸软骨素酶ABC I和硫酸软骨素酶ABC II。所述硫酸软骨素酶ABC I和所述硫酸软骨素酶ABC II的酶活力比为(1～10):(1～10)。所述硫酸软骨素ABC复合酶为固定化酶。本发明还提供一种硫酸软骨素ABC复合酶的应用，利用该复合酶裂解硫酸软骨素。本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶具有协同增效作用，既突破了硫酸软骨素ABC I更偏向于大分子的结合的限制，又突破了硫酸软骨素ABC II对裂解速度的限制；因此，利用本发明提供的上述硫酸软骨素ABC复合酶可以有效提高裂解底物硫酸软骨素的效率及活性。
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公开(公告)号：CN110777140A
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201911228661.9
申请日：2019-12-04
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供了一种硫酸软骨素酶AC突变体，该突变体具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明提供了一种所述硫酸软骨素酶AC突变体的编码基因，该编码基因具有SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。本发明还分别提供一种上述硫酸软骨素酶AC突变体的重组载体及工程菌。本发明同时还通过一种上述硫酸软骨素酶AC突变体的制备方法。本发明通过将野生型硫酸软骨素酶AC氨基酸序列SEQ ID NO:1中的第170位突变为甘氨酸构建硫酸软骨素酶AC突变体，如此，减小了该硫酸软骨素酶AC突变体与多糖底物结合空间位阻，扩大了其与多糖的结合口袋，使其更容易结合多糖底物，从而提高硫酸软骨素酶AC的活性。
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公开(公告)号：CN108795918A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201810792833.4
申请日：2018-07-18
Applicant: 北京电子科技职业学院
CPC classification number: C12N9/88 , C07K2319/21 , C07K2319/23 , C07K2319/24 , C12N2800/22 , C12P19/26 , C12Y402/02021
Abstract: 本发明提供一种外切型硫酸软骨素酶ABC，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供一种外切型硫酸软骨素酶ABC融合蛋白，该融合蛋白融合有上述外切型硫酸软骨素酶ABC和纯化标签。同时，本发明还提供一种含有上述外切型硫酸软骨素酶ABC的重组载体和转化体。本发明提供的外切型硫酸软骨素酶ABC的DNA序列对大肠杆菌的偏好性达0.97，从而提高了硫酸软骨素酶ABC的DNA序列在大肠杆菌中的表达效率，进而直接降低了外切型硫酸软骨素酶ABC的生产成本。另外，本发明还提供一种上述外切型硫酸软骨素酶ABC的制备方法和应用。
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公开(公告)号：CN109777816B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201711120265.5
申请日：2017-11-14
Applicant: 北京电子科技职业学院
Abstract: 本发明提供了一种ChSaseABC酶蛋白的制备方法，该方法包括：分别克隆所述硫酸软骨素ABC酶基因和分子伴侣蛋白GroES基因，然后连接上述两个蛋白基因到同一个表达载体，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的重组载体；将所述重组载体转化到宿主细胞中进行表达，获得含有所述硫酸软骨素ABC酶蛋白和分子伴侣蛋白GroES的转化体；以及培养所述转化体，并进行物理破碎处理，制得所述硫酸软骨素ABC酶蛋白。本发明还提供一种ChSase ABC酶蛋白及其应用。上述ChSase ABC酶蛋白具有高酶活，能够用于生产低分子量硫酸软骨素，并且硫酸软骨素的生成条件不高、方法简便且容易控制。
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