一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法

    公开(公告)号:CN118879761A

    公开(公告)日:2024-11-01

    申请号:CN202410993726.3

    申请日:2024-07-24

    Abstract: 本发明公开了一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法,该方法包含:将含有TRV2‑CpCHLD载体的重组质粒转入农杆菌GV3101中,用含有卡那霉素和利福平的LB液体培养基分别对含有TRV2‑CpCHLD或TRV1的农杆菌进行过夜活化培养,之后离心收集菌体,弃上清液后重悬菌体;将TRV2‑CpCHLD重悬菌液与TRV1重悬菌液混合,于室温、避光下静置,最后注入蜡梅子叶、幼叶和成熟叶的背面刻伤处。本发明解决了现有技术未曾在蜡梅中实现VIGS高效基因沉默的问题,首次实现VIGS技术在蜡梅中的应用,用于注射侵染的最佳器官是蜡梅子叶,用于注射侵染的农杆菌菌液最佳OD600为1.2~1.5。

    一种梅花离体再生的方法

    公开(公告)号:CN114431151A

    公开(公告)日:2022-05-06

    申请号:CN202210224871.6

    申请日:2022-03-09

    Abstract: 本发明公开了一种梅花离体再生的方法,涉及植物组织培养技术领域。具体而言,该方法包括对再生的梅花不定芽进行伸长培养,伸长培养包括依次进行的第一阶段伸长培养、第二阶段伸长培养、第三阶段伸长培养和第四阶段伸长培养。该方法促进了梅花再生芽的伸长生长,可以有效抑制继代过程中顶芽褐化枯死及叶片黄化等现象的发生。

    一种香石竹叶片原生质体的制备方法

    公开(公告)号:CN109628376B

    公开(公告)日:2021-05-07

    申请号:CN201910050668.X

    申请日:2019-01-20

    Abstract: 本发明属于植物组织和细胞培养技术领域,具体涉及一种香石竹叶片原生质体的制备方法。以香石竹组培苗为试验材料,建立了低速振荡酶解—沉降法纯化的高效的原生质体制备体系。本发明操作简便且可常年进行,经低速震荡酶解分离与密度梯度纯化后的原生质体产量高,可达183×105个/gFW,细胞完整率高,并保证活力在75%以上。本发明为利用香石竹叶片瞬时转化体系进行基因功能鉴定、亚细胞定位以及蛋白质互作等方面的研究奠定了基础。

    基于烟草脆裂病毒沉默体系提高石竹转化率的方法

    公开(公告)号:CN108707622B

    公开(公告)日:2021-03-30

    申请号:CN201810416934.1

    申请日:2018-05-03

    Abstract: 本发明属于园艺花卉植物基因工程技术领域,具体涉及基于烟草脆裂病毒沉默体系提高石竹转化率的方法。本发明的沉默体系含有SEQ ID NO:1所示的PDS基因序列,根据石竹PDS基因片段设计特异引物,通过PCR在石竹中扩增出305bp的cDNA片段,将获得的片段连接到TRV2载体上,构建得到重组表达载体TRV2‑DcPDS,利用农杆菌介导的机械损伤法对石竹进行侵染,并利用重组表达载体TRV2‑DcPDS通过瞬时转化法转化石竹,诱导石竹目的基因发生沉默,从而鉴定石竹目的基因功能。本发明可用于石竹基因功能的快速鉴定和转基因操作。

    一种构建二球悬铃木子叶高频再生体系的方法及其应用

    公开(公告)号:CN106857259B

    公开(公告)日:2020-01-10

    申请号:CN201710109602.4

    申请日:2017-02-27

    Abstract: 本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及一种构建二球悬铃木子叶高频再生体系的方法及其应用。本发明以二球悬铃木种子萌发的子叶为外植体,通过器官直接再生途径建立二球悬铃木子叶不定芽的高频再生体系。该体系包括五个培养阶段:种子消毒;种子萌发;子叶不定芽再生诱导培养;不定芽芽增殖培养与生根培养。通过综合比较不同激素种类及浓度组合对子叶不定芽的诱导率、平均芽数、生长状态的影响,优选得到二球悬铃木子叶不定芽高效再生系列培养基。本发明的方法及其专用培养基可获得稳定的高频的二球悬铃木再生体系。

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