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公开(公告)号：CN118516387A
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202410760998.9
申请日：2024-06-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生产戊二胺的重组大肠杆菌及其构建方法与发酵放大应用。本方面以产赖氨酸的大肠杆菌KA30为底盘，过表达赖氨酸脱羧酶(cadA)。为了减少诱导剂的使用成本，删除了乳糖操纵子。将所述的重组大肠杆菌在50L发酵罐以固定的比例补入葡萄糖与硫酸铵进行发酵，实现了戊二胺的高效率转化。本发明解决了目前的生产方法中戊二胺转化率不高的技术问题。
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公开(公告)号：CN114806996A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210648397.X
申请日：2022-06-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株高产戊二胺基因工程菌及构建方法与应用，所述高产戊二胺基因工程菌为在出发菌中过表达大肠杆菌生物膜调控基因pgaABCD，得到高产戊二胺基因工程菌。该菌株使大肠杆菌固定化发酵产戊二胺过程中生物膜量增加，能够发挥出固定化发酵的优势，在12批连续发酵后，菌株发酵性能保持稳定，最终戊二胺的产量与原始菌株KACCPG相比提高16.45％，发酵周期也从84h减少到72h，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112920984A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110162536.3
申请日：2021-02-05
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种构建基于甲酸和CO2生长的重组菌株的方法与应用。本发明通过将外源基因甲酸‑四氢叶酸连接酶（FtfL）、亚甲基四氢叶酸脱氢酶（MtdA）、甲基四氢叶酸环水解酶（Fch）表达在大肠杆菌工程菌株MG1655中，并且过表达甘氨酸裂解系统氨基甲基转移酶（GcvT）、甘氨酸裂解系统H蛋白（GcvH）、甘氨酸脱羧酶（GcvP），构建了能够高效利用底物甲酸及CO2生产的大肠杆菌。同时构建了甘氨酸营养缺陷型菌株验证其路径可行性。本发明首次实现了大肠杆菌利用底物甲酸及CO2生成甘氨酸从而生成丙酮酸进入三羧酸循环，实现生物量增长。
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公开(公告)号：CN118599871A
公开(公告)日：2024-09-06
申请号：CN202410761786.2
申请日：2024-06-13
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高大肠杆菌戊二胺的耐受基因ubiE及其应用。本发明提供一种参与大肠杆菌耐受戊二胺的基因ubiE。本发明通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中表达基因ubiE，得到的基因工程菌在戊二胺浓度胁迫下的生长实验和转录组学验证过表达ubiE基因可以有效提高大肠杆菌对戊二胺的耐受性。将过表达该基因的菌株应用到戊二胺的生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升。
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公开(公告)号：CN114774423A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210654193.7
申请日：2022-06-10
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种大肠杆菌戊二胺响应启动子及应用。从头合成谷氨酸棒状杆菌中的丙酮酸羧化酶并在大肠杆菌中异源表达，PCR拷贝大肠杆菌中戊二胺响应启动子PgrcA及赖氨酸脱羧酶cadA，构建了PcadR‑PgrcA‑pyc‑trc‑cadA‑rrnB重组质粒。该质粒在赖氨酸高产的大肠杆菌中生长良好，基因表达稳定，葡萄糖被高效利用，能够响应戊二胺，发酵周期短，副产物少。从发酵结果可以看出，重组的大肠杆菌KAGPC的戊二胺产量较对照组有显著提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117286088A
公开(公告)日：2023-12-26
申请号：CN202311274548.0
申请日：2023-09-28
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生产戊二胺的重组大肠杆菌及其构建方法与应用。本发明以产赖氨酸的大肠杆菌KA30作为底盘，异源表达Calvin–Benson–Bassham(CBB)循环的两个固碳关键酶核酮糖‑1,5‑二磷酸羧化酶(RuBisCO)和磷酸核酮糖激酶(PRK)，同时表达大肠杆菌内源分子伴侣及过表达赖氨酸脱羧酶。为提高异源代谢途径的通量，减少CO2扩散，提高RuBisCO酶的CO2捕获能力，将戊二胺生产过程的二氨基庚二酸脱羧酶和赖氨酸脱羧酶和两个固碳关键酶通过Spytag‑SpyCatcher之间的共价作用力固定在EutM支架蛋白上。本发明解决了戊二胺在生物合成过程中脱羧释放CO2造成原子经济性低和温室效应的问题。为生物合成材料单体提供了新的理论知识和关键技术，为可持续、绿色低碳、高效的生物制造奠定基础。
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公开(公告)号：CN114774472B
公开(公告)日：2023-04-28
申请号：CN202210654192.2
申请日：2022-06-10
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐受戊二胺的重组大肠杆菌构建及应用。通过大肠杆菌ASKA文库筛选出大量潜在戊二胺耐受靶点，结合生物信息学技术，最终挖掘到编码内膜蛋白的耐受基因ydgK。通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中过表达，菌株在含30 g/L戊二胺的培养基中生长延滞期缩短39.3%，证实靶点具有提升底盘细胞戊二胺耐受能力的功能，进一步将其整合至KA30基因组中转座子IS1上，实现基因组多拷贝稳定表达。将重组大肠杆菌应用到戊二胺生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升20.6%。本发明具有过程简洁、效果显著等特点，是一条简单、快速、高效的提升工业底盘细胞鲁棒性的方法。
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公开(公告)号：CN114806996B
公开(公告)日：2023-07-21
申请号：CN202210648397.X
申请日：2022-06-09
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一株高产戊二胺基因工程菌及构建方法与应用，所述高产戊二胺基因工程菌为在出发菌中过表达大肠杆菌生物膜调控基因pgaABCD，得到高产戊二胺基因工程菌。该菌株使大肠杆菌固定化发酵产戊二胺过程中生物膜量增加，能够发挥出固定化发酵的优势，在12批连续发酵后，菌株发酵性能保持稳定，最终戊二胺的产量与原始菌株KACCPG相比提高16.45％，发酵周期也从84h减少到72h，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113817762B
公开(公告)日：2023-06-20
申请号：CN202111110911.6
申请日：2021-09-23
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/66 , C12N15/64 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12N15/31 , C12N1/21 , C12P13/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种产戊二胺的重组大肠杆菌及其应用。本发明从头合成红螺菌中的二磷酸核酮糖羧化酶基因、菠菜中的磷酸核糖激酶基因和赖氨酸脱羧酶基因，PCR拷贝大肠杆菌分子伴侣基因，构建质粒pTrc99a‑cadA‑cbbM和质粒pCWJ‑prkA‑GroEL/GroES，双质粒重组菌在特定培养基中生长良好，葡萄糖被高效利用。在不同时间段分别加入诱导剂阿拉伯糖和IPTG，异源基因表达稳定，反应体系简单、条件温和、周期短、副产物少，而且清洁无污染，是一条简单、快速、高效的生产途径，从发酵结果中可以看出，重组大肠杆菌KACCPG产量有着明显的提高。
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公开(公告)号：CN114774472A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210654192.2
申请日：2022-06-10
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种耐受戊二胺的重组大肠杆菌构建及应用。通过大肠杆菌ASKA文库筛选出大量潜在戊二胺耐受靶点，结合生物信息学技术，最终挖掘到编码内膜蛋白的耐受基因ydgK。通过在高产赖氨酸的大肠杆菌KA30中过表达，菌株在含30 g/L戊二胺的培养基中生长延滞期缩短39.3%，证实靶点具有提升底盘细胞戊二胺耐受能力的功能，进一步将其整合至KA30基因组中转座子IS1上，实现基因组多拷贝稳定表达。将重组大肠杆菌应用到戊二胺生产中，最终实现发酵生产戊二胺产量提升20.6%。本发明具有过程简洁、效果显著等特点，是一条简单、快速、高效的提升工业底盘细胞鲁棒性的方法。
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