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公开(公告)号：CN106801064A
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201710077962.0
申请日：2017-02-14
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种脱氢异构酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及应用，包括如下步骤：(1)以裂殖壶菌的基因组为DNA模板，用上游引物对和下游引物对分别PCR扩增FabA基因的上游片段UFabA和下游片段DFabA；(2)将上游片段UFabA和下游片段DFabA与敲除载体连接，构建重组敲除质粒；(3)将上述重组敲除质粒电转化裂殖壶菌，用抗性平板筛选，并经PCR抗性基因序列验证，得转化子，即所述脱氢异构酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌。本发明提供了裂殖壶菌敲除基因的工程菌的构建方法构，建了敲除FabA基因裂殖壶菌重组菌，该工程菌产多不饱和脂肪酸的能力比出发菌株中所占总油脂的比例减少了26％，而饱和脂肪酸的生产量增加16％。
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公开(公告)号：CN106801064B
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201710077962.0
申请日：2017-02-14
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种脱氢异构酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及应用，包括如下步骤：(1)以裂殖壶菌的基因组为DNA模板，用上游引物对和下游引物对分别PCR扩增FabA基因的上游片段UFabA和下游片段DFabA；(2)将上游片段UFabA和下游片段DFabA与敲除载体连接，构建重组敲除质粒；(3)将上述重组敲除质粒电转化裂殖壶菌，用抗性平板筛选，并经PCR抗性基因序列验证，得转化子，即所述脱氢异构酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌。本发明提供了裂殖壶菌敲除基因的工程菌的构建方法构，建了敲除FabA基因裂殖壶菌重组菌，该工程菌产多不饱和脂肪酸的能力比出发菌株中所占总油脂的比例减少了26％，而饱和脂肪酸的生产量增加16％。
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公开(公告)号：CN106676127B
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201710078025.7
申请日：2017-02-14
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及应用，包括如下步骤：(1)以裂殖壶菌的基因组为DNA模板，用上游引物对和下游引物对分别PCR扩增KS基因的上游片段UKS和下游片段DKS；(2)将上游片段UKS和下游片段DKS与敲除载体连接，构建重组敲除质粒；(3)将上述重组敲除质粒电转化裂殖壶菌，用抗性平板筛选，并经PCR抗性基因序列验证，得转化子，即所述酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌。本发明提供了裂殖壶菌敲除基因的工程菌的构建方法构，建了敲除FabA基因裂殖壶菌重组菌，该工程菌产多不饱和脂肪酸的能力比出发菌株中所占总油脂的比例减少了43％，而16碳和18碳饱和脂肪酸的生产量增加29％。
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公开(公告)号：CN107177640A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710548502.1
申请日：2017-07-06
Applicant: 厦门大学
CPC classification number: C12P7/6427
Abstract: 本发明公开了一种促进裂殖壶菌产油脂的方法，在裂殖壶菌的发酵培养基中一次添加终浓度为100mg/L～3g/L的苯甲酸对位衍生物，添加苯甲酸对位衍生物的时机为发酵培养开始至发酵培养结束前1～2d中的任意时间。本发明的通过在发酵培养基中添加适量苯甲酸对位衍生物中的苯甲酸钠相较于裂殖壶菌在原始培养基中油脂产量提高了32.12％，添加对甲基苯甲酸油脂产量提高了38.21％，叶酸的添加使油脂产量提高了56.84％，对氨基苯甲酸使油脂产量提高了66.51％，但这类物质的添加对ω‑3PUFA并无抑制作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106676127A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710078025.7
申请日：2017-02-14
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌的构建方法及应用，包括如下步骤：(1)以裂殖壶菌的基因组为DNA模板，用上游引物对和下游引物对分别PCR扩增KS基因的上游片段UKS和下游片段DKS；(2)将上游片段UKS和下游片段DKS与敲除载体连接，构建重组敲除质粒；(3)将上述重组敲除质粒电转化裂殖壶菌，用抗性平板筛选，并经PCR抗性基因序列验证，得转化子，即所述酮基合成酶基因敲除的裂殖壶菌工程菌。本发明提供了裂殖壶菌敲除基因的工程菌的构建方法构，建了敲除FabA基因裂殖壶菌重组菌，该工程菌产多不饱和脂肪酸的能力比出发菌株中所占总油脂的比例减少了43％，而16碳和18碳饱和脂肪酸的生产量增加29％。
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公开(公告)号：CN109913513B
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN201811609170.4
申请日：2019-04-04
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法，包括如下步骤：(1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌接种至种子培养基中培养，获得一级种子；(2)将上述一级种子接种至种子培养基中培养，获得二级种子；(3)将上述二级种子接种至葡萄糖的含量为25～185g/L的第一级高糖驯化培养基中进行驯化培养获得第一代后，进行连续传代的驯化培养，每驯化培养9～11代，接种至葡萄糖的含量高28～32g/L的下一级高糖驯化培养基中继续进行连续传代的驯化培养，直至葡萄糖的含量达到85～215g/L，再进行连续驯化培养9～11代，获得高糖驯化菌株；(4)将上述高糖驯化菌株接种至发酵罐中的发酵培养基扩大培养，期间分析不同时期内的油脂组分。
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公开(公告)号：CN107177640B
公开(公告)日：2020-06-26
申请号：CN201710548502.1
申请日：2017-07-06
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种促进裂殖壶菌产油脂的方法，在裂殖壶菌的发酵培养基中一次添加终浓度为100mg/L～3g/L的苯甲酸对位衍生物，添加苯甲酸对位衍生物的时机为发酵培养开始至发酵培养结束前1～2d中的任意时间。本发明的通过在发酵培养基中添加适量苯甲酸对位衍生物中的苯甲酸钠相较于裂殖壶菌在原始培养基中油脂产量提高了32.12％，添加对甲基苯甲酸油脂产量提高了38.21％，叶酸的添加使油脂产量提高了56.84％，对氨基苯甲酸使油脂产量提高了66.51％，但这类物质的添加对ω‑3PUFA并无抑制作用。
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公开(公告)号：CN110157748A
公开(公告)日：2019-08-23
申请号：CN201910230157.6
申请日：2019-03-25
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种裂殖壶菌发酵产多不饱和脂肪酸的调控方法，将产PUFAs的裂殖壶菌经过平板培养基培养和种子培养基活化后，获得种子液，将该种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养，在该发酵培养处于对数生长初期时，向发酵液中添加三氯生，使三氯生在发酵液中的浓度达到3-10μM/L，以在对发酵液的生物量基本无影响的同时，促进发酵液中总油脂的大量积累和PUFAs的转化，同时提高中性油脂占比。本发明采用三氯生作为烯酰ACP还原酶的抑制剂，在裂殖壶菌体内，能抑制FAS途径，从而降低了C16：0的含量；同时促进细胞体内非极性油脂向极性油脂的转化，提高极性油脂占比。
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公开(公告)号：CN109913513A
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201811609170.4
申请日：2019-04-04
Applicant: 厦门大学
Abstract: 本发明公开了一种驯化裂殖壶菌产油脂的方法，包括如下步骤：(1)将保存在甘油管中的裂殖壶菌接种至种子培养基中培养，获得一级种子；(2)将上述一级种子接种至种子培养基中培养，获得二级种子；(3)将上述二级种子接种至葡萄糖的含量为25～185g/L的第一级高糖驯化培养基中进行驯化培养获得第一代后，进行连续传代的驯化培养，每驯化培养9～11代，接种至葡萄糖的含量高28～32g/L的下一级高糖驯化培养基中继续进行连续传代的驯化培养，直至葡萄糖的含量达到85～215g/L，再进行连续驯化培养9～11代，获得高糖驯化菌株；(4)将上述高糖驯化菌株接种至发酵罐中的发酵培养基扩大培养，期间分析不同时期内的油脂组分。
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