公开(公告)号：CN117402840A

公开(公告)日：2024-01-16

申请号：CN202310000620.4

申请日：2023-01-03

Applicant: 天津科技大学

Inventor： 刘晓光 ,  杨滨瑞 ,  路福平 ,  毛淑红

IPC: C12N9/02 ,  C12P33/10 ,  C12N15/81 ,  C12N15/80 ,  C12R1/80 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明提供了一种高效制备11α‑羟基孕酮的重组雷斯青霉菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域；本发明运用农杆菌介导转化的技术手段，将编码赭曲霉的甾体C11α‑羟化酶突变体CYP68J5mL491F的基因定点整合取代雷斯青霉甾体C15α‑羟化酶基因，获得的重组雷斯青霉菌能够高效转化甾体底物孕酮生成11α‑羟基孕酮。突变体CYP68J5mL491F氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示。底物孕酮的投料量为15g/L，转化72h，产物11α‑羟基孕酮得率达到92％。本发明专利为研究开发高效C11α‑羟化孕酮生产C11α‑羟基孕酮工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。

公开(公告)号：CN116891835A

公开(公告)日：2023-10-17

申请号：CN202310000666.6

申请日：2023-01-03

Applicant: 天津科技大学

Inventor： 刘晓光 ,  杨滨瑞 ,  路福平 ,  毛淑红 ,  李金红

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/81 ,  C12N15/80 ,  C12P33/06 ,  C12R1/645 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明提供了高效合成氢化可的松的11β‑羟化重组丝状真菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域；本发明将来源于新月弯孢霉的C11β‑羟化酶CYP5103B6突变体T291Y/M365A/A372F在缺失11α‑羟化酶CYP68J5的赭曲霉菌株中过表达，获得的赭曲霉重组菌能够高效转化底物11‑脱氧皮质甾醇生成氢化可的松。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。底物11‑脱氧皮质甾醇的投料量为3g/L，转化72h，产物氢化可的松的得率达到78％。本发明为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质甾醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。

公开(公告)号：CN114891756A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210196272.8

申请日：2022-03-03

Applicant: 天津科技大学

Inventor： 刘晓光 ,  路福平 ,  毛淑红 ,  曾玉龙 ,  杨滨瑞

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P33/10 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明提供了赭曲霉甾体C11α‑羟化酶CYP68J5突变体构建及其应用。所述突变体的氨基酸序列是在如SEQ ID NO：1所示的序列基础上进行突变：突变体V64K的64位氨基酸由原来的缬氨酸(GTT)突变成赖氨酸密码(AAA)；突变体N66D的66位氨基酸由原来的天冬酰胺(AAT)突变成天冬氨酸密码(GAT)。同C11α‑羟化酶CYP68J5相比，突变体V64K、N66D转化甾体底物孕酮和双酮特异性明显提高，副产物明显减少。本发明还提供了基于突变体V64K、N66D异源过表达的表达载体及其甾体转化工艺，为研究开发高效孕酮和双酮C11α‑羟化生产工艺提供了宝贵材料(基因和菌种)和基础数据支撑。