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公开(公告)号：CN116891835A
公开(公告)日：2023-10-17
申请号：CN202310000666.6
申请日：2023-01-03
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明提供了高效合成氢化可的松的11β‑羟化重组丝状真菌及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域；本发明将来源于新月弯孢霉的C11β‑羟化酶CYP5103B6突变体T291Y/M365A/A372F在缺失11α‑羟化酶CYP68J5的赭曲霉菌株中过表达，获得的赭曲霉重组菌能够高效转化底物11‑脱氧皮质甾醇生成氢化可的松。所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。底物11‑脱氧皮质甾醇的投料量为3g/L，转化72h，产物氢化可的松的得率达到78％。本发明为研究开发高效C11β‑羟化11‑脱氧皮质甾醇生产氢化可的松工艺提供了宝贵的工业菌种和技术方法。
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公开(公告)号：CN115125218A
公开(公告)日：2022-09-30
申请号：CN202110322846.7
申请日：2021-03-25
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明专利提供了一种用于制备重要药物中间体11α‑左旋乙基双酮的新型雷斯青霉重组菌，同时也提供了一种赭曲霉甾体C11α‑羟化酶突变体T367V，DNA序列如DNA SEQ ID NO：2所示。同C11α‑羟化酶CYP68J5相比，突变体T367V转化甾体底物左旋乙基甾烯双酮的特异性明显提高，副产物明显减少。本发明专利还提供了基于突变体T367V表达载体和酵母重组菌株。
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公开(公告)号：CN114958787A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210604268.0
申请日：2022-05-31
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明专利提供了新月弯孢霉甾体C14α‑羟化酶突变体Y10(S129A/T130A/D131G/T132L/V133I/R134K/S135K)、D131G，其编码核苷酸序列如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6所示。同C14α‑羟化酶CYP5103B5相比，突变体Y10(S129A/T130A/D131G/T132L/V133I/R134K/S135K)、D131G转化甾体底物孕酮的特异性明显提高，副产物明显减少。本发明专利还提供了涉及CYP5103B5突变体异源过表达的表达载体及其甾体转化工艺，为研究开发高效孕酮C14α‑羟化生产工艺提供了宝贵材料(基因和菌种)和基础数据支撑。
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公开(公告)号：CN107746849A
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201710910330.8
申请日：2017-09-29
Applicant: 天津科技大学
CPC classification number: C12N9/0071 , C12N1/14 , C12N15/1096 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明属于生物催化技术领域，具体涉及一种甾体羟化酶的高效筛选方法。本发明针对雷斯青霉的生长特性和产酶特性，获得了雷斯青霉专用的高效产孢培养基，然后通过筛选合适的助溶剂和建立最佳诱导条件进一步强化了诱导过程对目标基因转录表达的良性驱动，同时引入转录组测序和qRT-PCR组合的方法借助计算机分析生物信息学信息形成了高效筛选具备C15α位羟化酶功能编码基因的识别方法，获得来源于雷斯青霉的C15α位羟化酶编码基因，在原始基因序列的基础上通过进一步筛选获得编码高活性C15α位羟化酶的新基因。
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公开(公告)号：CN103255095B
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201310077602.2
申请日：2013-03-12
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明涉及一种用于甾体化合物A环1,2位脱氢的基因工程菌及发酵剂，所述工程菌的宿主菌为简单节杆菌，保藏编号为ACCC 12070，所述基因工程菌内含有如序列2所述的重组基因片段，所述基因工程菌的发酵底物包括醋酸可的松、含氟皮质激素、4-AD。本发明构建的工程菌在含有酵母提取物、磷酸盐、玉米浆和葡萄糖等营养成分的基础上，通过恒温通气搅拌发酵，在甾体化合物浓度不高于10%(m/V)时，采用一次加投甾体化合物底物，在32～48小时内生物脱氢转化率能够达到95%以上；在甾体化合物浓度高于10%时，采用连续补加甾体化合物底物的情况下，在60小时内生物脱氢转化率能够达到95%以上。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104357526A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410522163.6
申请日：2014-09-30
Applicant: 天津科技大学
IPC: C12P33/02
Abstract: 本发明涉及一种以低共熔物作为促溶剂利用静息细胞转化制备胆甾烯酮的方法，⑴静息细胞在发酵培养基中培养好以后，离心，加入无菌磷酸缓冲液重悬作为转化液；所述静息细胞具有将胆固醇氧化生成胆甾烯酮的能力；⑵在转化液中投入胆固醇，并添加低共熔物为促溶剂，乙酸乙酯萃取转化液，采用HPLC法检测产物胆甾-4-烯-3-酮的产率；⑶用柱层析分离法将底物胆固醇与产物胆甾烯酮进行分离，并纯化得到胆甾烯酮纯品。本发明采用低共熔物(DES)代替甲醇等有机溶剂作为绿色添加剂，添加低共熔物后，提高底物的分散率，有效促进底物胆固醇与菌体的接触，有效提高了静息细胞的转化效率，在加入和转化过程中操作条件温和，步骤简单。
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公开(公告)号：CN104017786A
公开(公告)日：2014-09-03
申请号：CN201410279966.3
申请日：2014-06-20
Applicant: 天津科技大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12Y301/01004
Abstract: 本发明涉及一种磷脂酶A2突变体及其制备的方法，其技术方案是利用重组DNA技术定点突变来源于天蓝色链霉菌的野生型磷脂酶A2的Glu37、Asp78的氨基酸残基，得到活力较高的磷脂酶A2基因，然后将高活力磷脂酶A2基因在枯草芽孢杆菌表达系统、毕赤酵母表达系统(包括毕赤酵母游离表达系统和毕赤酵母细胞表面展示系统)中表达，得到产高活力磷脂酶A2的重组菌株，表达后，检测高活力磷脂酶A2的比酶活较野生型磷脂酶A2提高13.7％，其中枯草芽孢杆菌高活力磷脂酶A2重组菌发酵后磷脂酶A2的酶活可达到53.5U/ml，毕赤酵母游离表达高活力磷脂酶A2重组菌的酶活可达106.4U/ml，毕赤酵母细胞表面展示高活力磷脂酶A2全细胞催化剂的酶活可达260U/(g·干细胞)。
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公开(公告)号：CN103205450A
公开(公告)日：2013-07-17
申请号：CN201310080877.1
申请日：2013-03-14
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明涉及一种能在简单节杆菌（Arthrobacter Simplex）中复制并高效表达甾体类化合物A环1,2位脱氢酶基因的质粒在构建高效表达甾体化合物A环1,2位脱氢的简单节杆菌工程菌中的应用。本发明质粒能在简单节杆菌里复制并且高效表达甾体类化合物A环1,2位脱氢酶基因，本发明质粒为进一步利用质粒pXJM19通过分子手段改良简单节杆菌提供了依据，具有重要的实用意义。
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公开(公告)号：CN102382771A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110243864.2
申请日：2011-08-25
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明涉及了一种利用体外微生物发酵法模拟体内肠道微生物转化的方式对京尼平苷进行有效的转化而生成京尼平，即利用本实验室筛选保藏的β-葡萄糖苷酶的高产菌发酵中药栀子，通过单因素实验优化，确定微生物转化得到产物京尼平的最佳条件，一方面在温和条件下水解其中的京尼平苷，避免了传统方法导致有效成分损失的缺陷，另一方面利用现代微生物发酵工程技术使桅子的有效成分京尼平苷在体外可控条件下实现规模转化，具有较大的经济效益和社会效益，市场开发前景广阔。
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公开(公告)号：CN102286439A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110249360.1
申请日：2011-08-29
Applicant: 天津科技大学
Abstract: 本发明涉及一种以大孔阴离子树脂为填充料的果糖基转移酶的初纯化方法，将经预处理大孔阴离子树脂装层析柱，用磷酸缓冲液冲洗层析柱层析柱，平衡层析柱，将含有果糖基转移酶的粗酶液上样，用两倍体积的磷酸缓冲液洗脱，再用两倍体积的磷酸缓冲液配置的1mol/mL的NaCl溶液0-1mol/mL梯度洗脱，用UV280nm在线监测，收集有酶活的峰，将收集到有酶活的酶液浓缩即得果糖基转移酶。本发明通过先球磨再超高压均质的方法得到了酶活较高的酶液，再采用大孔阴离子树脂D290为填充料对果糖基转移酶进行初纯化，得到具有一定纯度的果糖基转移酶，对于利用果糖就转移酶生产低聚果糖具有十分重要的现实意义和工业价值。
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