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公开(公告)号：CN118702782A
公开(公告)日：2024-09-27
申请号：CN202410796459.0
申请日：2024-06-20
Applicant: 安徽农业大学 , 合肥综合性国家科学中心大健康研究院
Abstract: 本发明属于生物医药或生物工程技术领域，具体涉及一种复合缓冲液组合物、病毒样颗粒包涵体蛋白的复性方法及应用。所述复合缓冲液组合物中含有小分子有机还原剂DTT，其在本发明中用于稳定含有游离巯基的酶和其他蛋白二硫键的还原，结合所述复合缓冲液中的其他组分对包涵体蛋白进行复性和组装；相对于使用传统的8M尿素或6M异硫氰酸胍强变性剂进行复性的方法更加温和，实现病毒样颗粒包涵体蛋白有效复性和快速组装的基础上，能够保证包涵体蛋白的活性，且整个方法操作简便，对环境也更加友好。基于所述复合缓冲液组合物和方法开发疫苗更具有意义，有助于推进新型高效疫苗的开放。
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公开(公告)号：CN114959115A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210593501.X
申请日：2022-05-27
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q1/6806 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测GAstV的检测方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取1g的各组织样品，加入1mL PBS放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以8500rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(离心柱型)提取病毒RNA；本发明GAstV ORF2基因的保守区域设计了特异性的引物和探针，并使用MIRA技术对GAstV进行核酸扩增，建立了GAstV的快速检测方法。该方法提高了生物学的检测效率，降低了检测门槛，节省了检测时间，并且操作简单，对仪器设备要求不高且二十分钟内就能得到结果，即使偏远地区也能对疫病进行实时监测。
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公开(公告)号：CN112961941A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110281107.8
申请日：2021-03-16
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及PCV3病毒检测技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，包括四对引物和一个探针，四对引物和一个探针的基因序列具体如下：第一对引物：PCV3‑MIRA‑F1：5'‑GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT‑3'；PCV3‑MIRA‑R1：5'‑GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA‑3'；本发明解决了聚合酶链式反应最后需要核酸胶电泳呈现结果，耗时较长，实时荧光定量PCR需要昂贵的热循环仪，对精密仪器依赖度高，需要专业的技术人员操作和判读结果，在基层和现场的检测应用受到很大限制，等温核酸技术中的LAMP方法需要多对引物，对靶基因的要求高，容易出现假阳性的问题。
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公开(公告)号：CN109580941A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811376701.X
申请日：2018-11-19
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法，利用鸭坦布苏病毒全基因序列设计一对引物以扩增NS1基因，构建蛋白表达载体，通过IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达获得重组表达蛋白包涵体，以包涵体经纯化、复性、浓缩后作为包被抗原，建立检测鸭血血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。本发明的抗体为非结构蛋白中的NS1蛋白，检验结果中假阳性少，IFA符合率高，且检验结果重复性好，敏感性强，检测时间快，5小时内基本可以检测出结果。动物试验结果显示抗体在感染鸭坦布苏病毒后出现阳性时间早，持续时间长。
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公开(公告)号：CN103614381A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310489097.2
申请日：2013-10-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了鸡β-防御素AvBD6基因，其序列如序列表所示。参照乳酸乳球菌密码子的偏爱性进行密码子优化处理，将稀有密码子agg、cgg、tgc等优化为偏爱密码子cgt、tgt，设计并合成后命名为Op-AvBD6。本发明还公开了鸡β-防御素AvBD6基因乳酸菌载体的构建方法：对载体pNZ8148、Op-AvBD6进行双酶切；回收酶切产物，经DNA Ligation Kit连接后电转化到Lactococcus lactis NZ9000中；经氯霉素筛选、PCR鉴定，双酶切鉴定后得到目的产物。本发明的有益效果在于，可明显提高雏鸡的平均日增重和免疫器官指数，维持雏鸡肠道菌群结构的稳定。同时，在感染甲型副伤寒沙门氏菌后，可降低雏鸡的死亡率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103614380A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310488740.X
申请日：2013-10-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了鸡β-防御素9酵母工程菌制备及表达方法，属于生物技术及基因工程制药技术领域。首先利用毕赤酵母惯用密码子优化鸡β-防御素9基因，在其前端添加Kex2酶切位点编码序列并人工合成该基因，然后将合成的β-防御素9基因序列插入酵母组成型表达载体，通过同源重组整合到甲基营养型毕赤酵母染色体中，经多次筛选得到生产鸡β-防御素9的酵母工程菌。经发酵培养，它能持续性进行蛋白高水平表达，表达产物产量高、更接近天然结构且分泌到发酵液中，也具有较强的抗食源性病原活性。将发酵液通过初步分离，经浓缩或干燥后可直接作为饲料添加剂，用于动物养殖业，降低了防御素的生产成本，提高了生产企业的经济效益。本发明为β-防御素9的工业化大规模生产和应用及开发家禽饲料抗生素添加剂替代品奠定了技术基础。
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公开(公告)号：CN117604166A
公开(公告)日：2024-02-27
申请号：CN202311318676.0
申请日：2021-12-31
Applicant: 安徽农业大学 , 安徽省动物疫病预防与控制中心 , 安徽省兽药饲料监察所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，且公开了一种用于检测猪圆环4型病毒的引物对及检测方法，包括ERA引物对和crRNA引物对，其中crRNA引物对为PCV4‑crRNA‑1、PCV4‑crRNA‑2、PCV4‑crRNA‑3中的任意一对。本研究在CRISPR技术的基础上与ERA技术相结合，建立了PCV4的快速检测方法，该方法敏感性高、特异性高、操作简单、检测时间短、结果分析简单、抗干扰性强、不需要复杂仪器设备，对于冷链运输和非专业人员，即使偏远地区也能对疫病进行实时监测，为PCV4的流行病学的调查，掌握其传播规律以及疫病的防控提供技术支持。
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公开(公告)号：CN114381552A
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN202111667501.1
申请日：2021-12-31
Applicant: 安徽农业大学 , 安徽省动物疫病预防与控制中心 , 安徽省兽药饲料监察所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，且公开了一种基于CRISPR‑Cas12a检测猪圆环4型病毒的引物、探针及检测方法，包括以下操作步骤：(1)组织样品的处理；(2)病毒DNA的提取；(3)引物设计；(4)PCR产物回收及纯化；(5)标准质粒的构建；(6)重组质粒鉴定；(7)质粒DNA小量抽提；(8)crRNA纯化；(9)猪圆环病毒4型CRISPR‑Cas12a检测体系建立；(10)实验结果；本研究在CRISPR技术的基础上与ERA技术相结合，建立了PCV4的快速检测方法，该方法敏感性高、特异性高、操作简单、检测时间短、结果分析简单、抗干扰性强、不需要复杂仪器设备，对于冷链运输和非专业人员，即使偏远地区也能对疫病进行实时监测，为PCV4的流行病学的调查，掌握其传播规律以及疫病的防控提供技术支持。
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公开(公告)号：CN114277099A
公开(公告)日：2022-04-05
申请号：CN202210000997.5
申请日：2022-01-04
Applicant: 安徽农业大学 , 安徽省动物疫病预防与控制中心 , 安徽省兽药饲料监察所
IPC: C12Q1/6816 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及病毒检测技术领域，且公开了一种PPV检测的crRNA引物对、CRISPRCas12a系统及应用方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取约1g的各组织样品，加入1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以12000rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒对病毒进行核酸提取；S3、引物设计：在GenBank中检索猪细小病毒全基因组(GenBank ID:NC_001718.1)，通过Meglign软件分析比对，确定猪细小病毒全基因组中高度保守片段为VP2基因，使用Primer Premier 5软件，设计VP2基因的全长引物，根据猪细小病毒全基因组中高度保守片段VP2基因，使用CRISPR‑DT网站中Cpf1引物设计软件设计猪细小病毒VP2基因的crRNA引物，并委托某生物公司合成生产。
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公开(公告)号：CN109468281A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811376693.9
申请日：2018-11-19
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/40 , C12N15/867 , A61K39/12 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系建立方法，该鸭坦布苏病毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏名称为鸭黄病毒AH-F10株，保藏编号为：CCTCC V201213；构建方法如下：1)重组质粒pLOV-eGFP-NS1的构建；2)慢病毒样颗粒的制备；3)表达NS1细胞系的构建与筛选；4)NS1基因转录和核酸检测；5)NS1蛋白表达水平的检测。本发明可以获得在细胞外表达的具有生物活性构象的分泌表达的可溶性的鸭坦布苏病毒NS1蛋白。表达NS1细胞系筛选中我们以10μg/mL的嘌呤霉素培养液进行筛选，传代5次后即可检测到NS1基因的表达，第十代NS1细胞系就可以稳定表达，能够稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的BHK-21细胞系方法比传统细胞系方法的时间缩短2/3。
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