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公开(公告)号：CN109975264A
公开(公告)日：2019-07-05
申请号：CN201910315163.1
申请日：2019-04-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，包括如下步骤：培养碟的制备：取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h。慢病毒转染囊胚：用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；清洗好的囊胚置于培养碟中，转染10‑14h；用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10‑30min，再用DPBS清洗干净；DAPI染核，压片。本发明通过慢病毒转染实现干扰滋养层细胞中目的基因表达，从而有效地解决滋养层细胞中基因不能敲低或过表达的问题。
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公开(公告)号：CN109975264B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN201910315163.1
申请日：2019-04-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种慢病毒转染囊胚滋养层细胞研究其基因功能的方法，包括如下步骤：培养碟的制备：取20.83uL胚胎培养液置于离心管中，加入1uL慢病毒，吹打混匀；再将胚胎培养液在培养皿中做培养滴，并加入3mL矿物油，将培养皿放在培养箱平衡3‑5h。慢病毒转染囊胚：用胚胎培养液将去除透明带后的囊胚清洗干净；清洗好的囊胚置于培养碟中，转染10‑14h；用DPBS液体将囊胚清洗干净，并用4％PFA固定10‑30min，再用DPBS清洗干净；DAPI染核，压片。本发明通过慢病毒转染实现干扰滋养层细胞中目的基因表达，从而有效地解决滋养层细胞中基因不能敲低或过表达的问题。
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公开(公告)号：CN109406471A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811260712.1
申请日：2018-10-26
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了以凡士林柱为支撑的胚胎立体结构的荧光成像方法，包括如下步骤：胚胎准备；DAPI染核；制备凡士林柱支撑柱及添加抗淬灭剂：首先，用凡士林在载玻片一侧方形区域的四角点四个柱，且四个凡士林柱所围成的面积要小于盖玻片的面积；在四个凡士林柱围成区域内的正中央滴加15μL抗淬灭剂；压片、封片；激光共聚焦显微镜扫描成像；将制备凡士林柱为支撑的载玻片分别在激光共聚焦显微镜的普通光和紫外光激发下观察猪第七天囊胚的立体结构。本发明的以凡士林柱为支撑保持胚胎立体结构的荧光成像技术，通过降低胚胎立体荧光成像时耗材使用的成本而代替商业化耗材依赖的成像技术，使胚胎立体成像技术的应用更加广泛。
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公开(公告)号：CN110013292A
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201910426993.1
申请日：2019-05-21
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A61B17/435
Abstract: 本发明公开了一种能够维持囊胚立体结构的移胚针。该移胚针包括细开口端和粗开口端，且粗开口端的开口直径大于细开口端的开口直径；细开口端的内圆直径为0.20mm～0.28mm，壁厚为0.01mm～0.05mm，且细开口端的端口平齐光滑。将移胚针的粗开口端与口吸管的一端连接，口吸管的另一端与移液吸头连接，由此组装构成一种口吸式移胚器。将移胚针的粗开口端与注射器的管嘴通过连接管连接，则构成一种手持式移胚器。本发明提供了一种用于收集囊胚且能维持囊胚立体结构的专用工具——移胚针。该移胚针系采用常见易得的试验材料制成，且制作方法简单便捷，易操作易掌握。使用该移胚针能够大大提高囊胚收集的工作效率。
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公开(公告)号：CN109504742A
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201811311187.1
申请日：2018-11-06
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/6834
Abstract: 本发明公开了一种简易的斑点杂交加样方法，包括如下步骤：猪耳缘成纤维细胞的培养；细胞RNA的提取、浓度的测定以及调整；添加样品：预热金属浴至85℃，并将硝酸纤维素膜裁剪至所需要的合适大小；通过美纹纸将硝酸纤维素膜固定于层板上；在硝酸纤维素膜上于85℃烘烤下进行加样；加样后用重物压住层板，以使硝酸纤维素膜和金属浴紧密接触；进行斑点杂交；分析结果，比较灰度值。本发明整合利用了实验室里现有的资源，仅仅利用了盛装白枪头的层板和恒温金属浴，节省了很多耗材，而且省下了安装多管吸印仪耗费的时间和人力，还对加样操作进行了简化，对于技术优化具有重大意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109280637A
公开(公告)日：2019-01-29
申请号：CN201811259177.8
申请日：2018-10-26
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明公开了一种高效去除猪未成熟卵母细胞周围卵丘细胞的方法，包括以下步骤：配制以氯化钠作为溶质，TCM199作为溶剂配制成含有1wt％Nacl的液体，测量液体的渗透压，过滤，分装，加热至38.5℃备用；将卵泡液中的卵丘卵母细胞挑到盛有洗卵液的培养皿中，移入盛有400μL 1wt％Nacl液体的1.5mL离心管中，将离心管置涡旋振荡5分钟，再瞬时离心，转移到培养皿中；借助口吸管针将除去卵丘颗粒细胞的卵母细胞转移至TCM199操作液中，且快速清洗3遍，并置于盛有TCM199液滴中恢复5分钟，本发明通过1wt％Nacl处理去除猪未成熟卵母细胞外围卵丘细胞，具有省时、成本低、安全高效等优势。
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公开(公告)号：CN110214776A
公开(公告)日：2019-09-10
申请号：CN201910585668.X
申请日：2019-07-01
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基于麦管冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存和解冻方法，通过S1基于麦管制作的胚胎玻璃化冷冻Tip载体的制备、S2冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存、S3冷冻Tip载体的猪囊胚的解冻等步骤，从而实现猪囊胚的高效冻存和解冻。本发明一种基于麦管冷冻Tip载体的猪囊胚的冻存和解冻方法，技术简单，操作便捷，不需要操作人员多大的熟练度，成本低、效率高，显著降低胚胎玻璃化冷冻与解冻过程中的胚胎损伤和丢失的发生率，可以很好地应用于人类生殖医学和畜牧业的推广发展。
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公开(公告)号：CN109402220A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811470251.0
申请日：2018-11-28
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/24
Abstract: 本发明公开了一种收集囊胚腔液体的方法，包括如下步骤：显微操作针的准备，用拉针仪，断针仪和磨针仪制作内径为10μm的注射针以及针口为40μm的固定针，注射针要将针尖拔尖；囊胚腔液体的收集，在显微操作仪下，用固定针固定住内细胞团一侧，用注射针刺入囊胚腔中吸取囊胚腔中的液体至于1μLDPBS液滴中，收集完成后用较细的口吸针将囊胚腔中的液体转移到进口200μL的离心管中；囊胚腔液体中DNA含量的检测。这种收集方法采用自制的较细的注射针易刺破囊胚腔，对囊胚后续发育所产生的影响较小，且较为精准，可以收集单个囊胚腔中的液体，为胚胎植入前遗传学筛查提供新的方法。
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公开(公告)号：CN109609445A
公开(公告)日：2019-04-12
申请号：CN201910014453.2
申请日：2019-01-07
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了一种囊胚中单个卵裂球的分离方法，包括如下步骤：口吸针的制备；分离针的制备；链霉蛋白酶和胰蛋白酶的准备；囊胚透明带的去除；囊胚单个卵裂球的分离收缩后的囊胚置于50μL的胰蛋白酶液滴中温育40min，温育后，先用细口口吸针将囊胚移入1g/L的BSA液滴中洗净后，用细口口吸针快速吹吸将囊胚吹散开，直到有一些细胞团无法通过吹吸进行分离，再用分离针的细段部分将细胞团中的单个细胞分开即可，本发明采用胰蛋白酶分离囊胚单卵裂球，细胞形态完整，细胞之间间隔分明，发明所需试剂耗材容易获得，经济，发明步骤简单易行，是一种可广泛推广的简单经济有效的实用方法。
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公开(公告)号：CN210301174U
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201920736237.4
申请日：2019-05-21
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A61B17/435
Abstract: 本实用新型公开了一种能够维持囊胚立体结构的移胚针及移胚器。其中移胚针包括细开口端和粗开口端，且粗开口端的开口直径大于细开口端的开口直径；细开口端的内圆直径为0.20mm～0.28mm，壁厚为0.01mm～0.05mm，且细开口端的端口平齐光滑。将移胚针的粗开口端与口吸管的一端连接，口吸管的另一端与移液吸头连接，由此组装构成一种口吸式移胚器。将移胚针的粗开口端与注射器的管嘴通过连接管连接，则构成一种手持式移胚器。本实用新型提供了一种用于收集囊胚且能维持囊胚立体结构的专用工具——移胚针。该移胚针系采用常见易得的试验材料制成，且制作方法简单便捷，易操作易掌握。使用该移胚针能够大大提高囊胚收集的工作效率。(ESM)同样的发明创造已同日申请发明专利
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