公开(公告)号：CN115029374B

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202210729325.8

申请日：2022-06-24

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所 ,  合肥戬谷生物科技有限公司

Inventor： 李娟 ,  许蓉芳 ,  秦瑞英 ,  魏鹏程 ,  金珊 ,  刘小双 ,  陈俐克 ,  丁健 ,  李亦臻

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的pegRNA表达框及相应骨干载体和应用。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中，pegRNA表达框和融合蛋白表达框位于同一双元载体中，pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成。本发明的enpPE2引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率，并能获得纯合突变植株，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN115029374A

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN202210729325.8

申请日：2022-06-24

Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所

Inventor： 李娟 ,  许蓉芳 ,  秦瑞英 ,  魏鹏程 ,  金珊 ,  刘小双 ,  陈俐克 ,  丁健 ,  李亦臻

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的pegRNA表达框及相应骨干载体和应用。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中，pegRNA表达框和融合蛋白表达框位于同一双元载体中，pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成。本发明的enpPE2引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率，并能获得纯合突变植株，具有很好的应用前景。