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公开(公告)号：CN114958790A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202110192424.2
申请日：2021-02-20
Applicant: 山东大学 , 华熙生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明涉及一种肝素骨架合酶及其突变体与应用。本发明中的肝素骨架合酶来源于动物奈瑟菌，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，重组表达水平是现有大肠杆菌K5肝素骨架合酶KfiA重组表达水平的6.8倍，每升发酵液的总酶活是肝素骨架合酶KfiA的5.22倍。对上述肝素骨架合酶氨基酸序列的第16位、25位、30位、111位、165位、172位进行定点突变，所得肝素骨架合酶突变体均具有较高的表达水平。本发明中的肝素骨架合酶及其突变体提高了肝素骨架合成中GlcNAc转移合成效率，极大地促进了肝素仿生合成应用化发展，为糖胺聚糖的研究发展开启了全新的一页。
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公开(公告)号：CN104830881A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510289566.5
申请日：2015-05-29
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种糖胺聚糖裂解酶及其编码基因与应用。糖胺聚糖裂解酶的编码基因ssgaglyase，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；糖胺聚糖裂解酶SSGAGlyase，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的糖胺聚糖裂解酶SSGAGlyase能够选择性降解CS、HA、DS，且有较高的酶解活性，最终降解产物均为二糖，不能降解HP和HS。为系统的研究新型糖胺聚糖裂解酶提供参考，为糖胺聚糖的后续研究开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114790435B
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202110096718.5
申请日：2021-01-25
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及合成可点击反应糖胺聚糖骨架的枯草芽孢杆菌工程菌株及其构建方法与应用。本发明的枯草芽孢杆菌工程菌株不具备内源合成UDP‑单糖和糖胺聚糖的能力，引入异源组成型UDP‑叠氮单糖合成途径及诱导型叠氮修饰糖胺聚糖骨架合成途径，在培养基中添加叠氮单糖和诱导剂时，合成可点击反应的叠氮修饰的糖胺聚糖骨架。本发明基于对糖胺聚糖合成相关酶分子的研究基础和巧妙设计，利用代谢工程手段，分别构建了具备叠氮基团修饰的肝素骨架多糖、硫酸软骨素骨架多糖、以及透明质酸骨架多糖合成能力的工程菌株。通过点击化学等生物正交反应的手段，可以实现工程菌株本身及这些多糖骨架的可视化标记。
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公开(公告)号：CN114790434A
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN202110096075.4
申请日：2021-01-25
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及合成可点击反应肝素骨架的大肠埃希菌工程菌株及其构建方法与应用。本发明的大肠埃希菌工程菌株不具备内源合成UDP‑单糖和肝素骨架的能力，引入异源组成型UDP‑叠氮单糖合成途径及诱导型叠氮修饰肝素骨架合成途径，在培养基中添加叠氮单糖和诱导剂时，合成可点击反应的叠氮修饰的肝素骨架。本发明基于对糖胺聚糖合成相关酶分子的研究基础和巧妙设计，利用代谢工程手段，构建了具备叠氮基团修饰的肝素骨架多糖合成能力的大肠埃希菌工程菌株。这些肝素骨架多糖以游离的形式进入发酵培养基，或者以荚膜多糖的形式锚定在工程菌株细胞表面。通过点击化学等生物正交反应的手段，可以实现工程菌株本身及这些多糖骨架的可视化标记。
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公开(公告)号：CN110643586A
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201910979457.4
申请日：2019-10-15
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种肝素骨架合酶及其编码基因与应用。本发明中的肝素骨架合酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，来源于卡氏杆菌，是一种催化糖基转移的功能酶。本发明中的肝素骨架合酶突变体，是将上述肝素骨架合酶的氨基酸序列中第56位的天冬酰胺突变为天冬氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中的肝素骨架合酶是一种全新来源的肝素骨架合酶，具备乙酰氨基葡萄糖的转移酶活性，并且可以利用底物GlcA-pNP和UDP-GlcNA有效的合成肝素二糖骨架，为进一步合成肝素糖链奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104946674B
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201510338239.4
申请日：2015-06-17
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及突变获得的一种腺苷三磷酸/双磷酸酶及其编码基因与应用。腺苷三磷酸/双磷酸酶的编码基因YND1‑502F‑518H/GSGSGS‑gene，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。腺苷三磷酸/双磷酸酶YND1‑502F‑518H/GSGSGS，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次通过将Genebank中GeneID:856722的突变体第1504‑1554位的疏水性跨膜区进行替换的方法，在大肠杆菌表达系统可溶性表达了YND1‑502F‑518H/GSGSGS。
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公开(公告)号：CN101314762B
公开(公告)日：2011-02-02
申请号：CN200810138204.6
申请日：2008-07-03
Applicant: 山东大学
IPC: C12N1/19 , C12N15/12 , C12N15/81 , A23K1/16 , A23L3/3571 , A61K8/99 , A61K36/064 , A61P31/04 , C12R1/865
CPC classification number: Y02A50/473
Abstract: 本发明公开了一种表达重组虹鳟鱼抗菌肽OncorhyncinII的酿酒酵母工程菌及其制备方法，是将虹鳟鱼抗菌肽OncorhyncinII成熟肽的编码基因导入酿酒酵母中，得到能够分泌表达虹鳟鱼抗菌肽OncorhyncinII的菌株；所述酿酒酵母工程菌株已于2008年6月19日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCCNo.2554。本发明的酿酒酵母工程菌株能稳定表达重组虹鳟鱼抗菌肽OncorhyncinII，所述抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性，可用于制作饲料添加剂、保鲜剂、化妆品和医药产品。
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公开(公告)号：CN114790435A
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN202110096718.5
申请日：2021-01-25
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及合成可点击反应糖胺聚糖骨架的枯草芽孢杆菌工程菌株及其构建方法与应用。本发明的枯草芽孢杆菌工程菌株不具备内源合成UDP‑单糖和糖胺聚糖的能力，引入异源组成型UDP‑叠氮单糖合成途径及诱导型叠氮修饰糖胺聚糖骨架合成途径，在培养基中添加叠氮单糖和诱导剂时，合成可点击反应的叠氮修饰的糖胺聚糖骨架。本发明基于对糖胺聚糖合成相关酶分子的研究基础和巧妙设计，利用代谢工程手段，分别构建了具备叠氮基团修饰的肝素骨架多糖、硫酸软骨素骨架多糖、以及透明质酸骨架多糖合成能力的工程菌株。通过点击化学等生物正交反应的手段，可以实现工程菌株本身及这些多糖骨架的可视化标记。
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公开(公告)号：CN114774495A
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202210426569.9
申请日：2022-04-21
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种尿苷二磷酸‑N‑乙酰氨基葡萄糖的双酶共固定化合成方法。包括步骤：以胶体几丁质为底物，以几丁质酶为催化剂，生物合成得到N,N‑二乙酰化壳二糖；向N,N‑二乙酰化壳二糖中加入尿苷三磷酸、磷酸根离子、无机离子、Tris‑HCl缓冲液、无机焦磷酸酶，以磷酸化酶和UDP‑GalNAc焦磷酸化酶共固定化酶制剂为催化剂，生物合成得到尿苷二磷酸‑N‑乙酰氨基葡萄糖。本发明中的生物合成方法是以几丁质为原料，再以几丁质酶PbChi70、磷酸化酶和UDP‑GalNAc焦磷酸化酶进行两步催化，实现了尿苷二磷酸‑N‑乙酰氨基葡萄糖的量产。且不需要昂贵辅料ATP的加入，极大地降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN110643586B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN201910979457.4
申请日：2019-10-15
Applicant: 山东大学
Abstract: 本发明涉及一种肝素骨架合酶及其编码基因与应用。本发明中的肝素骨架合酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，来源于卡氏杆菌，是一种催化糖基转移的功能酶。本发明中的肝素骨架合酶突变体，是将上述肝素骨架合酶的氨基酸序列中第56位的天冬酰胺突变为天冬氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明中的肝素骨架合酶是一种全新来源的肝素骨架合酶，具备乙酰氨基葡萄糖的转移酶活性，并且可以利用底物GlcA‑pNP和UDP‑GlcNA有效的合成肝素二糖骨架，为进一步合成肝素糖链奠定了基础。
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