公开(公告)号：CN116463297A

公开(公告)日：2023-07-21

申请号：CN202310238092.6

申请日：2023-03-09

Applicant: 扬州大学

Inventor： 徐贞琦 ,  叶建强 ,  张俊 ,  谢泉 ,  郭艺文 ,  秦爱建 ,  邵红霞 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/40 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法,属于基因工程技术领域。本发明的关键技术是在血清4型禽腺病毒中寻找到合适的位置插入外源基因；同时利用CRISPR‑Cas9技术在血清4型禽腺病毒中插入鸡传染性贫血病病毒VP1基因以及带有LoxP位点的RFP表达盒，利用RFP蛋白进行病毒的纯化，纯化完成后使用Cre重组酶敲除RFP表达盒，最后获得可以稳定表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒。本发明构建的表达鸡传染性贫血病病毒VP1蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为血清4型禽腺病毒和鸡传染性贫血病病毒的联防联控提供了二联候选疫苗。因此，本发明具有良好的市场应用价值。

公开(公告)号：CN113917139A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111207886.3

申请日：2021-10-18

Applicant: 扬州大学 ,  国药集团扬州威克生物工程有限公司

Inventor： 郭艺文 ,  叶建强 ,  谢松桦 ,  张建军 ,  徐贞琦 ,  张伟 ,  谢泉 ,  万志敏 ,  李拓凡

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种基于重组荧光病毒的血清4型禽腺病毒中和抗体的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将待检血清稀释后与10000～20000TCID50/50μL的荧光病毒FAdV‑4‑EGFP混合，恒温孵育1～2h；S2、将孵育好的病毒与血清的混合物接种于LMH细胞中并培养24～36h，然后在荧光显微镜下观察荧光病毒被中和情况。本发明以前期拯救的表达绿色荧光蛋白的重组病毒FAdV‑4‑EGFP为基础，该毒株为高度致弱疫苗候选株，高剂量肌注感染鸡也不发病，与亲本株生长特性相近、生物安全性高、不存在散播强毒的隐患；相比于传统的中和试验，本发明提供的方案最短仅需要感染重组病毒24h后即可观察结果，可实现中和试验结果提前2‑3天，大幅缩短了检测所需时间。