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公开(公告)号：CN113774121B
公开(公告)日：2024-02-20
申请号：CN202111066944.5
申请日：2021-09-13
Applicant: 武汉大学
IPC: C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种基于RNA连接标签的低样本量m6A高通量测序方法，属于RNA的高通量测序领域。本发明方法包括以下步骤：将含有不同barcode标签序列的3’linker进行磷酸化处理、腺苷化处理；腺苷化处理后的3’‑linker分别连接到不同来源的打断后的RNA样品上，混合样品后留出input对照样品用于RNA‑seq，剩余混合样品进行m6A抗体免疫沉淀得到IP样品用于m6A‑seq，最终得到二代测序文库并测序；根据barcode序列对测序数据进行拆分和分析，得到初始单个样本的RNA‑seq及m6A‑seq信息。本发明可同时实现多个临床低样本量样品的m6A抗体免疫沉淀以及建库测序。
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公开(公告)号：CN106905399B
公开(公告)日：2019-07-09
申请号：CN201710189622.7
申请日：2017-03-27
Applicant: 武汉大学
Abstract: 本发明提供一种双链DNA B‑Z构象相互转换的光控方法，属于分子生物学和核酸化学领域。该方法首先通过DNA标准固相合成法，合成带有修饰鸟嘌呤短链DNA，然后通过365nm、254nm波长的光照，可逆的控制B型DNA和Z型DNA的相互转化。该方法利用光照可逆的控制DNA构象转化，应用中具有时空可控性。
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公开(公告)号：CN105463110B
公开(公告)日：2019-01-29
申请号：CN201610019896.7
申请日：2016-01-13
Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 , 武汉大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明涉及一种利用滚环扩增‑环介导等温扩增两步扩增法检测MicroRNA的方法。首先设计一个以目标microRNA为环化连接探针的线性滚环扩增模板，并以该线性滚环扩增模板为引物进行滚环扩增，实现信号的第一步放大；然后将滚环扩增产物用限制性内切酶切割成相同的短单链，以这些短单链为模板进行环介导扩增，实现信号的第二步放大。环介导等温扩增的扩增过程由实时荧光定量PCR监测，扩增的样品中加入DNA显色剂，当扩增的DNA产物增多时，DNA显色剂的荧光增强，其荧光信号被实时荧光定量PCR采集和输出。本发明采用两步扩增法放大microRNA的信号，是一种低背景高灵敏度的检microRNA的方法。
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公开(公告)号：CN108384832A
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201810129724.4
申请日：2018-02-08
Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 , 武汉大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明公开了一种结合光子晶体的分支滚环扩增检测miRNA的方法。该方法由四个部分组成：a.制备点状光子晶体；b.5’端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用T4RNA ligase 2连接成环；c.以成环的锁式探针作为模板，靶标miRNA作为引物，在phi29DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过加入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向扩增，达到信号进一步放大；d.往滚环扩增产物中加入SYBR GREENⅠ染料后加到点状光子晶体上进行检测。本发明通过利用光子晶体效应对发光的调控，增强荧光强度，从而增强检测的灵敏度，降低检测下限，在最优实验条件下，该方法的线性范围为0.1aM-1pM，miRNA的检测限低至1aM。本发明无需对循环miRNA进行分离提取，可直接用于实际样本中循环miRNA的检测。
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公开(公告)号：CN106868155A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710154441.0
申请日：2017-03-15
Applicant: 武汉大学
Abstract: 本发明公开了一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法。本发明方法包含三部分，第一部分引物的产生，发卡探针I被靶标miRNA打开后，被核酸外切酶I降解单链部分，而后核糖核酸酶 H降解DNA：RNA杂合链中的RNA，留下一段短链DNA；第二部分是树状滚环扩增，上一步产生的单链DNA连接长单链DNA探针成环作为模板，然后以该单链DNA为引物进行一级滚环扩增，在滚环扩增体系中引入的发卡茎环结构II，被一级滚环扩增产物打开，从而多级树枝状滚环扩增；第三部分是根据滚环扩增产物中含有的G‑四链体进行检测。本发明是一种灵敏、经济、方便、原位的可视化检测miRNA的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105506136A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610040179.2
申请日：2016-01-21
Applicant: 武汉顺可达生物科技有限公司 , 武汉大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种检测microRNA的方法和试剂盒：向含microRNA的体系中加入microRNA检测探针，探针末端区域与靶标microRNA以碱基配对的方式结合，再加入T4 DNA连接酶，使探针的3’端和5’端连接起来，形成环状结构；然后加入5’端修饰有生物素的DNA引物，并加入Phi 29 DNA聚合酶，进行滚环扩增；扩增结束后，将链霉亲和素磁珠加入到待测体系中，利用铁磁体钓取后洗脱；随后，将修饰有DNA的上转换材料加入到待测体系中，上转换材料上的单链DNA与磁珠上钓取出的引物DNA以碱基配对结合，孵育后，利用铁磁体将磁珠吸附，洗脱掉未配对结合的上转换材料，留下的磁珠吸附的上转换材料部分作为信号输出；最后，在荧光分光光度计上，使用980nm的激发光激发，得到上转换材料的荧光信号来检测microRNA含量。
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公开(公告)号：CN102628085B
公开(公告)日：2014-06-04
申请号：CN201210121847.6
申请日：2012-04-24
Applicant: 武汉大学
Abstract: 本发明公开了一种结核分枝杆菌利福平耐药突变可视化检测探针及其应用。本发明针对利福平耐药突变，根据结核分枝杆菌利福平耐药的rpoB基因突变核心区所包含的突变位点设计合成检测探针簇，包括：共有的锚定探针A、绝缘探针L和R、突变检测探针B和共有的竞争探针SIB，探针B与和探针SIB具有相同的靶DNA互补区，仅突变位点的碱基种类不同。具体探针簇包含9个探针组，每个探针组含一种特定的突变检测探针B，此法设计的各探针组和探针簇对合成的野生型和突变型检测片段有良好的区分性，并能准确检测利福平耐药结核分枝杆菌rpoB基因525-529位氨基酸具体的突变位点，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN103789429A
公开(公告)日：2014-05-14
申请号：CN201410033529.3
申请日：2014-01-24
Applicant: 武汉大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q2523/125 , C12Q2531/107 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明涉及一种检测DNA中5-甲基胞嘧啶方法，该方法以不对称PCR原理为基础运用含荧光基团的（脱氧鸟苷三磷酸）dGTP来检测DNA中的5甲基胞嘧啶。具体检测步骤如下：先用亚硫酸氢钠法处理含5甲基胞嘧啶的DNA，将DNA中的胞嘧啶转化为尿嘧啶，再通过不对称PCR可以得到大量目标DNA的互补链，这样与DNA中的胞嘧啶互补的是不带荧光的腺嘌呤，而与5甲基基胞嘧啶互补的是带荧光的dGTP。再通过DNA凝胶电泳（PAGE）可以检测DNA中的5-甲基胞嘧啶。此后在492nm处激发可以对DNA中的5-甲基胞嘧啶进行荧光检测。
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公开(公告)号：CN102618664B
公开(公告)日：2014-01-01
申请号：CN201210133660.8
申请日：2012-05-03
Applicant: 武汉大学
Abstract: 本发明涉及一种miRNA检测探针和可视化检测miRNA的方法。本发明的miRNA检测探针包括三个部分：靠近3'端为G-四链体形成序列，中间是待测靶标miRNA互补序列，5'端为干扰序列。探针在通常条件下为hairpin结构，加入靶标后，由于DNA-RNA杂合体的碱基对数与稳定性均高于干扰序列形成的DNA双链，hairpin结构将打开。打开的hairpin结构在双链特异内切酶的作用下可释放出G-四链体形成序列，再在钠钾离子作用下使之形成G-四链体，与Hemin组装从而产生有过氧化物酶活性的催化剂。本发明检测miRNA的方法只需一条探针，产生的信号可视化，而且不需昂贵仪器。
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