公开(公告)号：CN118006578A

公开(公告)日：2024-05-10

申请号：CN202410134070.X

申请日：2024-01-31

Applicant: 江南大学 ,  华熙生物科技股份有限公司

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  王浩 ,  张维娇 ,  王瑞妍 ,  堵国成 ,  张猛

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的软骨素4‑O‑硫酸转移酶突变体及其生产方法，属于生物技术领域。本发明首先通过对鼠源的软骨素4‑O‑硫酸转移酶进行N端截短、融合短肽、优化连接肽、5'UTR改造及过表达分子伴侣，胞外酶活达到了1346.2U/L，相比于出发菌提高了21.7倍，进一步通过定点突变将酶活提高到了38895.1U/L，是出发菌株的627.3倍，这是目前报道的最高水平，为工业化生产非动物源硫酸软骨素奠定了坚实的基础。

公开(公告)号：CN116640745A

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202310784916.X

申请日：2023-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  黄浩 ,  张维娇 ,  王阳 ,  刘平

IPC: C12N9/26 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及透明质酸酶突变体及其在水解硫酸软骨素中的应用，属于生物工程技术领域。本发明的透明质酸酶突变体是将位于水蛭来源透明质酸酶的底物结合口袋中的氨基酸残基进行突变后得到的蛋白质，具体是以氨基酸序列SEQ ID NO.1所示的透明质酸酶为出发序列，将第65位的苯丙氨酸突变为丝氨酸；和/或将第180位苏氨酸突变为精氨酸。本发明应用定向进化技术和方法对透明质酸酶进行了改造，其中，所得双突变体对于硫酸软骨素的催化效率提高了15.9倍，并将其应用于低分子量硫酸软骨素的水解催化，具有重要的应用前景。

公开(公告)号：CN117778337A

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202311854009.4

申请日：2023-12-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  郑依琳 ,  胥睿睿 ,  张维娇 ,  王阳 ,  堵国成 ,  陈坚

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P1/00 ,  A61K8/66 ,  A61Q5/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种酪氨酸酶突变体及其在生物染发中应用，属于生物技术领域。本发明筛选并构建了酪氨酸酶突变体，对巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和多刺疣微菌(Verrucomicrobium spinosum)来源的酪氨酸酶序列，对氨基酸定点突变，实现了酪氨酸酶突变体在大肠杆菌中的高活性表达，得到的酪氨酸酶突变体具有高效催化酪氨酸合成黑色素的能力，并在此基础上提高了酪氨酸酶的稳定性，在保存多日后依然能够保持较高的酶活。基于该酪氨酸酶突变体，建立了酶法催化的生物染发体系，实现了无毒、绿色安全、高效便捷的生物染发，提高了头发的机械强度，安全性优于传统化学染发，染发底物相比于其他生物染发剂所用黑色素前体也更廉价易得。

公开(公告)号：CN116640745B

公开(公告)日：2023-12-08

申请号：CN202310784916.X

申请日：2023-06-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  黄浩 ,  张维娇 ,  王阳 ,  刘平

IPC: C12N9/26 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12P19/14 ,  C12P19/26 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及透明质酸酶突变体及其在水解硫酸软骨素中的应用，属于生物工程技术领域。本发明的透明质酸酶突变体是将位于水蛭来源透明质酸酶的底物结合口袋中的氨基酸残基进行突变后得到的蛋白质，具体是以氨基酸序列SEQ ID NO.1所示的透明质酸酶为出发序列，将第65位的苯丙氨酸突变为丝氨酸；和/或将第180位苏氨酸突变为精氨酸。本发明应用定向进化技术和方法对透明质酸酶进行了改造，其中，所得双突变体对于硫酸软骨素的催化效率提高了

公开(公告)号：CN114317640A

公开(公告)日：2022-04-12

申请号：CN202111061093.5

申请日：2021-09-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  王阳 ,  张维娇 ,  金学荣 ,  盛靖雨 ,  堵国成 ,  陈坚

IPC: C12P19/26

Abstract: 本发明公开了一种基于添加PAPS制备不同分子量硫酸软骨素的方法，属于生物工程技术领域。本发明以不同分子量的软骨素和PAPS为底物，利用C4ST(软骨素4‑O‑磺基转移酶)催化磺酸化反应，得到不同分子量的硫酸软骨素，实现了不同磺酸化程度的硫酸软骨素及其寡糖的合成。