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公开(公告)号：CN117143944A
公开(公告)日：2023-12-01
申请号：CN202311088855.X
申请日：2023-08-25
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/40 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/54 , C12N15/55 , C12P19/32 , C12P11/00 , C12P19/26 , C12P17/06 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种基于聚磷酸激酶构建体内ATP和PAPS再生系统的方法，属于生物技术领域。本发明通过表达不同来源的聚磷酸激酶，提供体外添加磷酸供体polyPn，重新磷酸化ADP和AMP合成ATP，实现了体内ATP再生，并通过控制质粒的拷贝数，成功实现了体内不同强度ATP再生系统的构建。基于此，通过转入PAPS合成和再生模块，优化硫酸转运体系和弱化PAPS降解途径，成功构建出PAPS再生系统，并应用于大叶藻酸的合成，转化率达到91％。
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公开(公告)号：CN119320762A
公开(公告)日：2025-01-17
申请号：CN202411710325.9
申请日：2024-11-27
Abstract: 本发明涉及一种肝素水解酶突变体及其重组表达的方法，属于酶工程技术领域。本发明在大肠杆菌中异源表达来源于亚马逊铬菌(Chromobacterium amazonense)的肝素水解酶，并对该肝素水解酶进行修饰，添加TrxA促溶标签，并对部分氨基酸位点进行定点突变，突变体G37T/N145D/V281K催化效率比原始菌株提高了1.96倍，对肝素水解酶的应用和工业化生产起到重要作用。
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公开(公告)号：CN116536383A
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202310486408.3
申请日：2023-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种构建PAPS再生循环系统及应用的方法，属于生物技术领域。本发明通过设计PAPS再生路径，构建了基于包含ATP合成、PAPS合成和AMP再生三个模块的PAPS再生系统，在廉价底物聚磷酸和MgSO4的参与下，成功在肝素、硫酸软骨素和磺酸海藻糖等磺酸化修饰合成反应中应用，大大提高了磺酸化修饰效率并降低了PAPS合成应用成本。本发明构建的PAPS再生系统各个模块也可以单独使用，实现一步合成ATP、一步合成PAPS和提高提高磺基转移酶的催化效率。
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公开(公告)号：CN116790649A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310852392.3
申请日：2023-07-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的体外酶法制备，属于生物工程及生物合成技术领域。本发明将不同来源的葡萄糖醛酸激酶GlcAK、UDP‑葡萄糖醛酸焦磷酸化酶USP、N‑乙酰己胺1‑激酶NahK、N‑乙酰葡糖胺激酶AmgK、UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶GlmU、聚磷酸激酶PPK的基因在大肠杆菌BL21(DE3)异源表达，得到的重组酶组合成功催化合成UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖。偶联ATP循环体系后，将反应体系扩大并提高底物浓度，50mL体系中UDP‑葡萄糖醛酸产量可达12.9g·L‑1，UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖产量可达18.2g·L‑1。本发明实现了UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰氨基葡萄糖的高效催化合成，具有步骤简短，收率高，反应温和等优点，具有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN116536382A
公开(公告)日：2023-08-04
申请号：CN202310479710.6
申请日：2023-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于APS为活性磺酸供体的合成和再生系统的构建方法，属于生物技术领域。本发明提供了APS作为活性磺酸供体的新用途，并通过筛选不同的ATP的硫酸化酶，以及向反应体系中添加焦磷酸酶消除副产物焦磷酸，大大提高了APS的合成效率。进一步通过构建APS循环再生系统，实现了磺酸化修饰体系的构建，APS循环再生系统相比较PAPS再生系统有着路径更短、效率更高的优势，显著提高了磺酸化修饰效率并成功降低了合成成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113046403A
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN202011069179.8
申请日：2020-09-30
Applicant: 江南大学
IPC: C12P19/40
Abstract: 本发明公开了一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法，属于生物工程技术领域。通过微生物重组表达人工构建PAPS合成双功能酶，实现了PAPS的高效率生产。在此基础上，耦联了谷氨酸棒杆菌和结核分枝杆菌来源的聚磷酸激酶的ATP再生系统，可同时回收两种副产物焦磷酸和ADP，实现底物与产物的等量转化，催化体系中生成的PAPS具有较高的纯度，能实现大部分磺酸转移反应中磺酸基团的供给。
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公开(公告)号：CN119876104A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411091498.7
申请日：2024-08-09
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/88 , C12P19/26 , C12N15/60 , C12N11/02 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N15/62 , C07K19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种基于自组装策略构建固定化肝素裂解酶及其制备低分子量肝素的方法，属于生物技术领域。本发明提供的肝素III突变体相较于野生型有着更高的催化效率，突变体K85A/Q95F/S471T的催化效率是野生型的1.75倍；本发明还利用聚集蛋白自组装肝素裂解酶Ⅲ，实现酶的固定化，进一步对Linker进行筛选和优化，提高了转化效率。本发明构建的酶固定系统可实现肝素裂解酶III的固定化，通过对重组细胞破壁后离心收集沉淀，减少了蛋白纯化脱盐等复杂步骤。固定化肝素裂解酶在循环10次以后仍有50％的催化活性，实现了低分子量肝素的高效制备，增加了酶的利用效率，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN119220470A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411381169.6
申请日：2024-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法磺酸化合成缓解溃疡性结肠炎药物硫酸胆固醇的方法，属于生物技术领域。本发明用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌，对来自于B.thetaiotaomicron的羟基类固醇磺基转移酶2B1进行表达后纯化，再利用底物胆固醇在体外催化合成胆固醇硫酸盐，实现胆固醇硫酸盐的绿色、高效磺酸化修饰，从而用于缓解溃疡性结肠炎药物生产。
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公开(公告)号：CN117778337A
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202311854009.4
申请日：2023-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种酪氨酸酶突变体及其在生物染发中应用，属于生物技术领域。本发明筛选并构建了酪氨酸酶突变体，对巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和多刺疣微菌(Verrucomicrobium spinosum)来源的酪氨酸酶序列，对氨基酸定点突变，实现了酪氨酸酶突变体在大肠杆菌中的高活性表达，得到的酪氨酸酶突变体具有高效催化酪氨酸合成黑色素的能力，并在此基础上提高了酪氨酸酶的稳定性，在保存多日后依然能够保持较高的酶活。基于该酪氨酸酶突变体，建立了酶法催化的生物染发体系，实现了无毒、绿色安全、高效便捷的生物染发，提高了头发的机械强度，安全性优于传统化学染发，染发底物相比于其他生物染发剂所用黑色素前体也更廉价易得。
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公开(公告)号：CN115786320A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211651602.4
申请日：2022-12-21
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于自组装策略构建固定化酶合成磺酸基供体PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明提供一种利用聚集蛋白自组装PAPS合成双功能酶和ADP磷酸化酶，实现酶的固定化用以合成PAPS。通过进一步对linker进行理性设计和改造，大大提高了转化效率。本发明通过自组装肽同时实现PAPS合成双功能酶和ADP磷酸化酶的共固定化，直接破壁添加离心沉淀，实现一步法合成PAPS。固定化PAPS合成双功能酶在循环利用十次后仍具有45％的ATP转化率，约为第一次使用的50％。该方法简化了酶的分离纯化步骤，提高了酶的利用效率，大幅降低了工业化PAPS生产的成本。
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