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公开(公告)号：CN103614350A
公开(公告)日：2014-03-05
申请号：CN201310699636.5
申请日：2013-12-18
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12Y101/03004
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的葡萄糖氧化酶，属于酶工程技术领域。本发明采用基因重组技术将葡萄糖氧化酶524位点的甲硫氨酸突变为亮氨酸，并转化入毕赤酵母Pichia pastoris GS115中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株催化效率提高的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在50mL摇瓶上酶活64.6U/mL，比野生型提高了近10%。催化效率Kcat/Km为76.98mM-1·s-1，比野生型（16.73mM-1·s-1）提高了近4.5倍。
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公开(公告)号：CN103525778A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310493241.X
申请日：2013-10-18
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12Y101/03004
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体，属于遗传工程领域。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus niger BBE11721的葡萄糖氧化酶（GOD）基因进行定点突变并克隆连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k，转化Pichia pastoris GS115，经纯化验证得到一株可以产具有较好催化活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115-pPIC9k-GODTB，该菌株表达的葡萄糖氧化酶酶催化效率为41.52s-1mM-1，比野生型葡萄糖氧化酶提高了2.5倍。这为葡萄糖氧化酶的应用奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102994541B
公开(公告)日：2015-04-15
申请号：CN201210552718.2
申请日：2012-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC NO：M 2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102994541A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210552718.2
申请日：2012-12-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达UPR关键基因和下游靶基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母UPR关键基因Haclp与下游靶基因Pdi1、Ero1、Lhs1、Kar2、Sil1分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα与pPIC3.5K，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD保藏编号为CCTCC NO：M 2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活585U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN104312989A
公开(公告)日：2015-01-28
申请号：CN201410589628.X
申请日：2014-10-28
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/815 , C12Q1/26 , C12Y101/03004
Abstract: 本发明公开了一种耐氧化性提高的葡萄糖氧化酶，属于酶工程技术领域。本发明采用基因重组技术将葡萄糖氧化酶556位点的甲硫氨酸分别突变为亮氨酸，并转化入毕赤酵母Pichia pastoris GS115中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株耐氧化性提高的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶相比于对照酶，耐氧化性在不同浓度的H2O2处理后剩余酶活均有不同程度的提高，在100mmol·L-1和500mmol·L-1 H2O2存在下是对照酶的2倍。
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公开(公告)号：CN103525778B
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201310493241.X
申请日：2013-10-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体，属于遗传工程领域。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus niger BBE11721的葡萄糖氧化酶（GOD）基因进行定点突变并克隆连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k，转化Pichia pastoris GS115，经纯化验证得到一株可以产具有较好催化活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115-pPIC9k-GODTB，该菌株表达的葡萄糖氧化酶酶催化效率为41.52s-1mM-1，比野生型葡萄糖氧化酶提高了2.5倍。这为葡萄糖氧化酶的应用奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN103614350B
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201310699636.5
申请日：2013-12-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的葡萄糖氧化酶，属于酶工程技术领域。本发明采用基因重组技术将葡萄糖氧化酶524位点的甲硫氨酸突变为亮氨酸，并转化入毕赤酵母Pichia pastoris GS115中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株催化效率提高的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在50mL摇瓶上酶活64.6U/mL，比野生型提高了近10%。催化效率Kcat/Km为76.98mM-1·s-1，比野生型（16.73mM-1·s-1）提高了近4.5倍。
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公开(公告)号：CN102965292A
公开(公告)日：2013-03-13
申请号：CN201210527908.9
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种过量表达Haclp基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母的Haclp基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOX保藏编号为CCTCC NO：M2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在摇瓶中的酶活为66.24U/mL，比使用该方法前的酶活55.31U/mL有明显提高，此外本方法能显著提高生产效率，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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