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公开(公告)号：CN103525778A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310493241.X
申请日：2013-10-18
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12Y101/03004
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体，属于遗传工程领域。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus niger BBE11721的葡萄糖氧化酶（GOD）基因进行定点突变并克隆连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k，转化Pichia pastoris GS115，经纯化验证得到一株可以产具有较好催化活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115-pPIC9k-GODTB，该菌株表达的葡萄糖氧化酶酶催化效率为41.52s-1mM-1，比野生型葡萄糖氧化酶提高了2.5倍。这为葡萄糖氧化酶的应用奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102021127B
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN201010238671.3
申请日：2010-07-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)BBE10-215，已于2010年7月7日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2010169。该菌株具有较高的藻毒素清除效率，将该菌株用于保健食品领域，具有提高人体免疫力、协助营养消化等诸多方面的功效。
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公开(公告)号：CN103525778B
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201310493241.X
申请日：2013-10-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体，属于遗传工程领域。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus niger BBE11721的葡萄糖氧化酶（GOD）基因进行定点突变并克隆连接到毕赤酵母表达载体pPIC9k，转化Pichia pastoris GS115，经纯化验证得到一株可以产具有较好催化活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115-pPIC9k-GODTB，该菌株表达的葡萄糖氧化酶酶催化效率为41.52s-1mM-1，比野生型葡萄糖氧化酶提高了2.5倍。这为葡萄糖氧化酶的应用奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN103614350B
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201310699636.5
申请日：2013-12-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的葡萄糖氧化酶，属于酶工程技术领域。本发明采用基因重组技术将葡萄糖氧化酶524位点的甲硫氨酸突变为亮氨酸，并转化入毕赤酵母Pichia pastoris GS115中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株催化效率提高的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在50mL摇瓶上酶活64.6U/mL，比野生型提高了近10%。催化效率Kcat/Km为76.98mM-1·s-1，比野生型（16.73mM-1·s-1）提高了近4.5倍。
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公开(公告)号：CN102994406B
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201210349289.9
申请日：2012-09-19
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产葡萄糖氧化酶的基因工程菌及其建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明采用重组DNA技术将黑曲霉葡萄糖氧化酶（GOD）基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPIC9K，并转化Pichia pastoris GS115，经筛选鉴定得到一株可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOD，保藏编号为CCTCC NO：M2012266。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在摇瓶中的酶活为52U/mL，比野生菌的酶活提高了近24倍，为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102965292A
公开(公告)日：2013-03-13
申请号：CN201210527908.9
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种过量表达Haclp基因增强分泌表达葡萄糖氧化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母的Haclp基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZα，并转化入Pichia pastoris GS115-pPIC9K-GOX保藏编号为CCTCC NO：M2012266的菌株中，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在摇瓶中的酶活为66.24U/mL，比使用该方法前的酶活55.31U/mL有明显提高，此外本方法能显著提高生产效率，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102936585A
公开(公告)日：2013-02-20
申请号：CN201210528312.0
申请日：2012-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产葡萄糖氧化酶酶活的方法，属于发酵工程领域。本发明采用本实验室在前期工作中构建的可以产较高活性葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母Pichia pastorisGS115-pPIC9K-GOX基因工程菌，保藏编号为CCTCC NO：M 2012266。在甲醇诱导阶段通过添加山梨醇来提高葡萄糖氧化酶的酶活:即控制发酵液中甲醇残留浓度1.8%(W/V)，且甲醇与山梨醇混合添加比例为10:1(W/W)时，葡萄糖氧化酶的酶活为645.3U/mL，比不添加山梨醇(427.6U/mL)提高了50.9%，而且有效缩短了发酵周期，这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN102382773B
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN201110329425.3
申请日：2011-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产葡萄糖氧化酶的黑曲霉及其应用，属于微生物技术领域。本发明筛选得到一株黑曲霉，发酵96小时葡萄糖氧化酶活可达2.2U mL-1，于2011年8月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M2011291，分类学命名：黑曲霉BBE11721(Aspergillus niger BBE11721)。本发明提供的黑曲霉具有葡萄糖氧化酶产量高的优点，经优化摇瓶产量可达4.6U mL-1；该菌株分泌的葡萄糖氧化酶可耐受较高温度，粗酶液40℃、45℃条件下，60分钟酶活没有损失，60℃条件下30分钟降到降到原有酶活的65％，60分钟降到50％。
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公开(公告)号：CN107746816B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710975230.3
申请日：2014-10-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母中KAR2、CNE1、ERO1、SSA4、SSO2、SEC53、BMH2、HRD1、UBC1、GCN4等基因分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pGAPZ等系列衍生质粒连接，并与GOD共表达转化入Pichia pastoris GS115菌株中，考察其效果，并通过模块化组合优化，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活1972.9U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN107746816A
公开(公告)日：2018-03-02
申请号：CN201710975230.3
申请日：2014-10-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造蛋白折叠分泌途径增强葡萄糖氧化酶分泌的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用基因重组技术将毕赤酵母中KAR2、CNE1、ERO1、SSA4、SSO2、SEC53、BMH2、HRD1、UBC1、GCN4等基因分别克隆连接到毕赤酵母表达载体pGAPZ等系列衍生质粒连接，并与GOD共表达转化入Pichia pastoris GS115菌株中，考察其效果，并通过模块化组合优化，经筛选鉴定得到一株较原有菌株增强分泌表达葡萄糖氧化酶的菌株。该菌株表达的葡萄糖氧化酶在3L发酵罐上酶活1972.9U/mL。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。
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