公开(公告)号：CN103772494B

公开(公告)日：2015-04-15

申请号：CN201410030648.3

申请日：2014-01-23

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  栾超 ,  王腾浩 ,  冯杰 ,  杜华华 ,  王新霞 ,  路则庆 ,  杨彩梅

IPC: C07K14/33 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12P21/02 ,  A23K1/17 ,  C12R1/145

Abstract: 本发明公开了一种丁酸梭菌分泌的抗菌肽及其氨基酸序列和应用。所述的抗菌肽氨基酸序列为序列表SEQ ID NO:1所示，分子量为2264.6道尔顿，等电点为8.64。其制备方法是：硫酸铵沉淀培养基中丁酸梭菌分泌的的抗菌肽，利用阳离子交换、分子筛层析和反向高效液相色谱法纯化抗菌肽。该抗菌肽具有显著的抗菌活性，且不会对猪的红细胞产生溶血作用，可用于开发制备饲用抗菌药物。

公开(公告)号：CN103772490A

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201410021906.1

申请日：2014-01-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  栾超

IPC: C07K7/08 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12P21/02 ,  A23K1/17 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种地衣芽孢杆菌分泌的抗菌肽及其制备方法和应用。所述的抗菌肽氨基酸序列为序列表SEQIDNO.1所示，分子量为1290.4道尔顿，等电点5.23。其制备方法是：硫酸铵沉淀培养基中地衣芽孢杆菌分泌的的抗菌肽，利用阴离子交换、分子筛层析和反向高效液相色谱法纯化抗菌肽。该抗菌肽具有显著的抗菌活性，且不会对猪的红细胞产生溶血作用，可用于开发制备饲用抗菌药物。？

公开(公告)号：CN103772490B

公开(公告)日：2015-03-18

申请号：CN201410021906.1

申请日：2014-01-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  王腾浩 ,  栾超 ,  冯杰 ,  刘金松 ,  王新霞 ,  杨彩梅

IPC: C07K7/08 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12P21/02 ,  A23K1/17 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种地衣芽孢杆菌分泌的抗菌肽及其制备方法和应用。所述的抗菌肽氨基酸序列为序列表SEQ ID NO.1所示，分子量为1290.4道尔顿，等电点5.23。其制备方法是：硫酸铵沉淀培养基中地衣芽孢杆菌分泌的的抗菌肽，利用阴离子交换、分子筛层析和反向高效液相色谱法纯化抗菌肽。该抗菌肽具有显著的抗菌活性，且不会对猪的红细胞产生溶血作用，可用于开发制备饲用抗菌药物。

公开(公告)号：CN103421834A

公开(公告)日：2013-12-04

申请号：CN201310308517.2

申请日：2013-07-23

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  栾超

IPC: C12N15/75 ,  C07K19/00 ,  C07K1/22 ,  C07K1/18

Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌表达外源蛋白的方法。通过构建融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1枯草芽孢杆菌分泌表达载体，实现表达并纯化融合蛋白SUMO-CBF和SUMOprotease1；用重组表达得到的SUMOprotease1切割重组表达得到的SUMO-CBF释放重组抗菌肽CBF；通过亲和层析和阳离子交换纯化得到不含内毒素的抗菌肽CBF。纯化产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等均有显著的抑制作用。本发明为使用SUMO技术在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达阳离子抗菌肽提供了可能；融合蛋白不易形成包涵体，直接分泌至胞外，并且重组阳离子抗菌肽不含内毒素，省去了大量下游的纯化工作；尤其是利用同一个系统纯化外源蛋白，相辅相成，减少了外来污染物或者不纯物质的引入。

公开(公告)号：CN103205435A

公开(公告)日：2013-07-17

申请号：CN201310126494.3

申请日：2013-04-11

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  张海文 ,  韩菲菲 ,  栾超

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/70 ,  C07K7/08 ,  C07K1/20 ,  C07K1/16

Abstract: 本发明公开了一种利用内含肽系统大肠杆菌表达乳铁蛋白改良肽LF-6的方法。步骤如下：a、PCR扩增具大肠杆菌密码子偏好性的改良肽LF-6目的基因；b、利用pTWIN1载体和改良肽LF-6目的基因构建改良抗菌肽LF-6的重组表达质粒及相应的克隆菌株；c、鉴定阳性转化子，亚克隆至大肠杆菌表达菌株；d、挑单克隆阳性大肠杆菌表达菌株接种至摇瓶，诱导表达后收集菌液，超声破碎离心获得含融合蛋白的上清；e、对含融合蛋白的上清进行在柱纯化与LF-6的切割释放及进一步通过RP-HPLC分析制备与质谱鉴定；f、对纯化所得抗菌肽LF-6进行抑菌活性验证。本发明利用内含肽融合表达系统在大肠杆菌中成功重组表达猪乳铁蛋白改良肽LF-6，实现了在柱纯化与无酶切割释放，简单易行成本低。

公开(公告)号：CN103772494A

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201410030648.3

申请日：2014-01-23

Applicant: 浙江大学

Inventor： 汪以真 ,  栾超

IPC: C07K14/33 ,  C07K1/36 ,  C07K1/30 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/16 ,  C12P21/02 ,  A23K1/17 ,  C12R1/145

CPC classification number: C07K14/33 ,  A23K20/147 ,  A23K20/195 ,  A23V2002/00 ,  A23V2250/55

Abstract: 本发明公开了一种丁酸梭菌分泌的抗菌肽及其氨基酸序列和应用。所述的抗菌肽氨基酸序列为序列表SEQIDNO:1所示，分子量为2264.6道尔顿，等电点为8.64。其制备方法是：硫酸铵沉淀培养基中丁酸梭菌分泌的抗菌肽，利用阳离子交换、分子筛层析和反向高效液相色谱法纯化抗菌肽。该抗菌肽具有显著的抗菌活性，且不会对猪的红细胞产生溶血作用，可用于开发制备饲用抗菌药物。