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公开(公告)号：CN105420263B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201510947022.3
申请日：2015-12-16
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑17蛋白的生产方法，至少包括以下步骤：步骤一、将天然序列的人成纤维细胞生长因子‑17蛋白FGF‑17按照大肠杆菌偏好进行重组和扩增；步骤二、将重组后的rhFGF‑17基因连接至大肠杆菌表达质粒，构成重组表达载体，然后将重组表达载体转化进入大肠杆菌宿主菌，得到FGF‑17蛋白表达工程菌；以及步骤三、对表达工程菌进行培养，之后进行纯化；其中，在纯化过程中，采用如下浓度组分的细胞裂解缓冲液：45‑55mM的三羟甲基氨基甲烷Tris，280～320mM的氯化钠NaCl，1.5～2.5mM的乙二胺四乙酸DTA，0.1～0.3M的蔗糖，以及体积百分比为0.8～1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚TritonX‑100，为0.1～0.3％的去氧胆酸钠，为5％‑10％甘油，为0.8～1.2％的苯甲基磺酰氟PMSF。本生产方法生产的FGF‑17蛋白的浓度和纯度高。
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公开(公告)号：CN107383182A
公开(公告)日：2017-11-24
申请号：CN201710233150.0
申请日：2017-04-11
Abstract: 大肠杆菌表达的rhFGF7蛋白及应用。本发明公开了一种重组的成纤维细胞生长因子Halo-rhFGF7基因，在于插入表达载体pET14b中，构建表达载体pET14b-Halo-rhFGF7，转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态中；进行培养；收集的菌体重悬于裂解缓冲液，收集上清；洗脱、纯化得Halo-rhFGF7；用rTEV蛋白酶酶解、纯化，得rhFGF7；实验证明重组的成纤维细胞生长因子Halo-rhFGF7和重组的成纤维细胞生长因子rhFGF7，对BaF3细胞和L-O2细胞的促增殖作用，缓解CCL4损伤L-O2细胞的作用，保护肝细胞急性损伤的信号通路方面均高于rhFGF7标准品；细胞毒性也有所降低。
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公开(公告)号：CN105176908B
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201510702841.1
申请日：2015-10-23
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K1/22 , C07K1/18 , G01N21/31 , A61K38/19 , A61P17/02 , A61P17/00 , A61P17/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种表达和生产rhFGF‑18的方法。通过生物信息学手段优化设计合成FGF‑18核苷酸序列全长，筛选pET系列载体与大肠杆菌宿主细胞，获得可溶性表达且稳定遗传的工程菌株，并建立了高密度发酵方法和二步柱层析纯化方法及建立相应活性检测方法，使大规模生产rhFGF‑18成为可能。在此基础上，进一步探讨rhFGF‑18在皮肤烧烫伤、难愈性溃疡治疗或黏膜损伤的组织修复、生物美容及在雄激素性脱发、脂溢性脱发、斑秃及放化疗后的脱发修复治疗领域的应用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105200085A
公开(公告)日：2015-12-30
申请号：CN201510697155.X
申请日：2015-10-23
IPC: C12N15/866 , C07K14/50 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C07K1/18 , A61K38/18 , A61P17/14 , A61P19/08
Abstract: 本发明一种重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白的生产方法，包括以下步骤：步骤一、利用昆虫杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中表达成纤维细胞生长因子-18蛋白，具体包括：1)获得重组杆状病毒Bacmid-FGF18，FGF18基因为成纤维细胞生长因子-18基因，碱基序列如SEQ ID NO:1所示，2)用步骤1)得到的MOI为1～32的Bacmid-FGF18重组杆状病毒侵染昆虫细胞，之后于温度25～29℃下培养12h～96h后收获细胞液；以及，步骤二、从步骤一收获的细胞液中纯化得到人成纤维细胞生长因子-18蛋白。本发明还公开了重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白用于治疗骨骼性疾病和脱发症的用途。
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公开(公告)号：CN105176908A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510702841.1
申请日：2015-10-23
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K1/22 , C07K1/18 , G01N21/31 , A61K38/19 , A61P17/02 , A61P17/00 , A61P17/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种表达和生产rhFGF-18的方法。通过生物信息学手段优化设计合成FGF-18核苷酸序列全长，筛选pET系列载体与大肠杆菌宿主细胞，获得可溶性表达且稳定遗传的工程菌株，并建立了高密度发酵方法和二步柱层析纯化方法及建立相应活性检测方法，使大规模生产rhFGF-18成为可能。在此基础上，进一步探讨rhFGF-18在皮肤烧烫伤、难愈性溃疡治疗或黏膜损伤的组织修复、生物美容及在雄激素性脱发、脂溢性脱发、斑秃及放化疗后的脱发修复治疗领域的应用。
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公开(公告)号：CN105368872A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510702796.X
申请日：2015-10-23
IPC: C12N15/866 , C07K14/50 , A61P25/16
Abstract: 本发明公开了重组成纤维细胞生长因子-8b蛋白的生产方法，包括以下步骤：步骤一、利用昆虫杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中表达成纤维细胞生长因子-8b蛋白，具体包括：1)获得重组杆状病毒Bacmid-FGF8b，其中FGF8b基因为成纤维细胞生长因子-8b基因，其碱基序列如SEQ ID NO:1所示，2)用步骤1)得到的一定MOI的Bacmid-FGF8b重组杆状病毒侵染昆虫细胞，侵染后于温度25～29℃下震荡悬浮培养36h～120h后收获细胞液；以及，步骤二、从步骤一收获的细胞液中纯化得到成纤维细胞生长因子-8b蛋白。本发明还公开了重组成纤维细胞生长因子-8b蛋白用于治疗帕金森疾病的用途。
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公开(公告)号：CN105420263A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510947022.3
申请日：2015-12-16
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子-17蛋白的生产方法，至少包括以下步骤：步骤一、将天然序列的人成纤维细胞生长因子-17蛋白FGF-17按照大肠杆菌偏好进行重组和扩增；步骤二、将重组后的rhFGF-17基因连接至大肠杆菌表达质粒，构成重组表达载体，然后将重组表达载体转化进入大肠杆菌宿主菌，得到FGF-17蛋白表达工程菌；以及步骤三、对表达工程菌进行培养，之后进行纯化；其中，在纯化过程中，采用如下浓度组分的细胞裂解缓冲液：45-55mM的三羟甲基氨基甲烷Tris，280～320mM的氯化钠NaCl，1.5～2.5mM的乙二胺四乙酸DTA，0.1～0.3M的蔗糖，以及体积百分比为0.8～1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚TritonX-100，为0.1～0.3％的去氧胆酸钠，为5％-10％甘油，为0.8～1.2％的苯甲基磺酰氟PMSF。本生产方法生产的FGF-17蛋白的浓度和纯度高。
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公开(公告)号：CN104829732A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510134312.6
申请日：2015-03-25
Applicant: 温州医科大学
Abstract: 本发明公开了一种HBV pre-c-Fc重组蛋白及其编码核苷酸序列，并公开了含有该蛋白的编码序列的重组载体和宿主细胞，本发明还公开了一种重组杆状病毒和获得重组杆状病毒的方法及在昆虫杆状病毒表达系统中表达该HBV pre-c-Fc重组蛋白的方法，还公开了含有HBV pre-c-Fc编码基因的重组杆状病毒及HBV pre-c-Fc重组蛋白在制备预防或治疗乙型肝炎的疫苗或药物中的应用。通过本发明的方法得到的HBV pre-c-Fc重组蛋白注射免疫BALB/c小鼠，检测发现小鼠血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗体产生量远高于传统方法上用于制备乙肝疫苗的抗原。
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