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公开(公告)号：CN106801060A
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201710199557.6
申请日：2017-03-29
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P21/02 , C07K14/50 , C07K1/14 , C07K1/18 , C07K1/22 , A61K38/18 , A61P1/16 , A61P25/00 , A61P27/02 , A61P17/02 , A61P1/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑22的基因克隆、表达和应用，涉及分子生物学技术领域。本发明通过对人成纤维细胞生长因子‑22核苷酸序列进行优化及与适宜的表达载体和宿主细胞的组合，构建了重组人成纤维细胞生长因子‑22的高效表达菌株，建立规模化的高密度发酵培养技术及优化包涵体变复性方法，并通过合理串联色谱柱纯化，最终获得纯度超过95％并具有高生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子‑22蛋白，为进一步开展疾病相关作用机制研究和新药开发奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105368872A
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201510702796.X
申请日：2015-10-23
IPC: C12N15/866 , C07K14/50 , A61P25/16
Abstract: 本发明公开了重组成纤维细胞生长因子-8b蛋白的生产方法，包括以下步骤：步骤一、利用昆虫杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中表达成纤维细胞生长因子-8b蛋白，具体包括：1)获得重组杆状病毒Bacmid-FGF8b，其中FGF8b基因为成纤维细胞生长因子-8b基因，其碱基序列如SEQ ID NO:1所示，2)用步骤1)得到的一定MOI的Bacmid-FGF8b重组杆状病毒侵染昆虫细胞，侵染后于温度25～29℃下震荡悬浮培养36h～120h后收获细胞液；以及，步骤二、从步骤一收获的细胞液中纯化得到成纤维细胞生长因子-8b蛋白。本发明还公开了重组成纤维细胞生长因子-8b蛋白用于治疗帕金森疾病的用途。
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公开(公告)号：CN105176908B
公开(公告)日：2018-12-25
申请号：CN201510702841.1
申请日：2015-10-23
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K1/22 , C07K1/18 , G01N21/31 , A61K38/19 , A61P17/02 , A61P17/00 , A61P17/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种表达和生产rhFGF‑18的方法。通过生物信息学手段优化设计合成FGF‑18核苷酸序列全长，筛选pET系列载体与大肠杆菌宿主细胞，获得可溶性表达且稳定遗传的工程菌株，并建立了高密度发酵方法和二步柱层析纯化方法及建立相应活性检测方法，使大规模生产rhFGF‑18成为可能。在此基础上，进一步探讨rhFGF‑18在皮肤烧烫伤、难愈性溃疡治疗或黏膜损伤的组织修复、生物美容及在雄激素性脱发、脂溢性脱发、斑秃及放化疗后的脱发修复治疗领域的应用。
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公开(公告)号：CN105200085A
公开(公告)日：2015-12-30
申请号：CN201510697155.X
申请日：2015-10-23
IPC: C12N15/866 , C07K14/50 , C07K1/36 , C07K1/34 , C07K1/22 , C07K1/18 , A61K38/18 , A61P17/14 , A61P19/08
Abstract: 本发明一种重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白的生产方法，包括以下步骤：步骤一、利用昆虫杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中表达成纤维细胞生长因子-18蛋白，具体包括：1)获得重组杆状病毒Bacmid-FGF18，FGF18基因为成纤维细胞生长因子-18基因，碱基序列如SEQ ID NO:1所示，2)用步骤1)得到的MOI为1～32的Bacmid-FGF18重组杆状病毒侵染昆虫细胞，之后于温度25～29℃下培养12h～96h后收获细胞液；以及，步骤二、从步骤一收获的细胞液中纯化得到人成纤维细胞生长因子-18蛋白。本发明还公开了重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白用于治疗骨骼性疾病和脱发症的用途。
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公开(公告)号：CN106801060B
公开(公告)日：2020-06-09
申请号：CN201710199557.6
申请日：2017-03-29
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P21/02 , C07K14/50 , C07K1/14 , C07K1/18 , C07K1/22 , A61K38/18 , A61P1/16 , A61P25/00 , A61P27/02 , A61P17/02 , A61P1/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑22的基因克隆、表达和应用，涉及分子生物学技术领域。本发明通过对人成纤维细胞生长因子‑22核苷酸序列进行优化及与适宜的表达载体和宿主细胞的组合，构建了重组人成纤维细胞生长因子‑22的高效表达菌株，建立规模化的高密度发酵培养技术及优化包涵体变复性方法，并通过合理串联色谱柱纯化，最终获得纯度超过95％并具有高生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子‑22蛋白，为进一步开展疾病相关作用机制研究和新药开发奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105420263B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201510947022.3
申请日：2015-12-16
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑17蛋白的生产方法，至少包括以下步骤：步骤一、将天然序列的人成纤维细胞生长因子‑17蛋白FGF‑17按照大肠杆菌偏好进行重组和扩增；步骤二、将重组后的rhFGF‑17基因连接至大肠杆菌表达质粒，构成重组表达载体，然后将重组表达载体转化进入大肠杆菌宿主菌，得到FGF‑17蛋白表达工程菌；以及步骤三、对表达工程菌进行培养，之后进行纯化；其中，在纯化过程中，采用如下浓度组分的细胞裂解缓冲液：45‑55mM的三羟甲基氨基甲烷Tris，280～320mM的氯化钠NaCl，1.5～2.5mM的乙二胺四乙酸DTA，0.1～0.3M的蔗糖，以及体积百分比为0.8～1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚TritonX‑100，为0.1～0.3％的去氧胆酸钠，为5％‑10％甘油，为0.8～1.2％的苯甲基磺酰氟PMSF。本生产方法生产的FGF‑17蛋白的浓度和纯度高。
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公开(公告)号：CN107383182A
公开(公告)日：2017-11-24
申请号：CN201710233150.0
申请日：2017-04-11
Abstract: 大肠杆菌表达的rhFGF7蛋白及应用。本发明公开了一种重组的成纤维细胞生长因子Halo-rhFGF7基因，在于插入表达载体pET14b中，构建表达载体pET14b-Halo-rhFGF7，转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态中；进行培养；收集的菌体重悬于裂解缓冲液，收集上清；洗脱、纯化得Halo-rhFGF7；用rTEV蛋白酶酶解、纯化，得rhFGF7；实验证明重组的成纤维细胞生长因子Halo-rhFGF7和重组的成纤维细胞生长因子rhFGF7，对BaF3细胞和L-O2细胞的促增殖作用，缓解CCL4损伤L-O2细胞的作用，保护肝细胞急性损伤的信号通路方面均高于rhFGF7标准品；细胞毒性也有所降低。
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公开(公告)号：CN107012150A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710340788.4
申请日：2017-05-12
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C12N1/21 , C07K14/50 , C07K1/36 , C07K1/18 , C07K1/22 , C12Q1/02 , A61K38/18 , A61P9/00 , A61P17/02 , A61P17/00 , G01N33/574 , C12R1/19
CPC classification number: C07K14/50 , A61K38/00 , C12N15/70 , C12N2503/02 , G01N33/5008 , G01N33/57423 , G01N33/57449 , G01N33/57484 , G01N2333/50 , G01N2500/10
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑16的克隆、表达和应用及其生物学活性的测定方法，涉及生物医药的技术领域。本发明通过对hFGF16基因进行优化和重组菌株构建，获得高效稳定表达的工程菌株；通过建立高密度培养方法，使rhFGF16蛋白的表达水平达到菌体总蛋白的30％以上。通过温度、培养基、诱导剂及添加方式的优化，增加可溶性表达蛋白的含量，并建立了可溶性蛋白和包涵体形式表达蛋白的纯化方法。另外，本发明还建立了用NIH 3T3、H460及H9C2细胞株进行rhFGF16蛋白促增殖作用活性的测定方法。
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公开(公告)号：CN105420263A
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201510947022.3
申请日：2015-12-16
Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子-17蛋白的生产方法，至少包括以下步骤：步骤一、将天然序列的人成纤维细胞生长因子-17蛋白FGF-17按照大肠杆菌偏好进行重组和扩增；步骤二、将重组后的rhFGF-17基因连接至大肠杆菌表达质粒，构成重组表达载体，然后将重组表达载体转化进入大肠杆菌宿主菌，得到FGF-17蛋白表达工程菌；以及步骤三、对表达工程菌进行培养，之后进行纯化；其中，在纯化过程中，采用如下浓度组分的细胞裂解缓冲液：45-55mM的三羟甲基氨基甲烷Tris，280～320mM的氯化钠NaCl，1.5～2.5mM的乙二胺四乙酸DTA，0.1～0.3M的蔗糖，以及体积百分比为0.8～1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚TritonX-100，为0.1～0.3％的去氧胆酸钠，为5％-10％甘油，为0.8～1.2％的苯甲基磺酰氟PMSF。本生产方法生产的FGF-17蛋白的浓度和纯度高。
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公开(公告)号：CN105176908A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510702841.1
申请日：2015-10-23
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K1/22 , C07K1/18 , G01N21/31 , A61K38/19 , A61P17/02 , A61P17/00 , A61P17/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种表达和生产rhFGF-18的方法。通过生物信息学手段优化设计合成FGF-18核苷酸序列全长，筛选pET系列载体与大肠杆菌宿主细胞，获得可溶性表达且稳定遗传的工程菌株，并建立了高密度发酵方法和二步柱层析纯化方法及建立相应活性检测方法，使大规模生产rhFGF-18成为可能。在此基础上，进一步探讨rhFGF-18在皮肤烧烫伤、难愈性溃疡治疗或黏膜损伤的组织修复、生物美容及在雄激素性脱发、脂溢性脱发、斑秃及放化疗后的脱发修复治疗领域的应用。
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