重组人成纤维细胞生长因子-17的生产方法

    公开(公告)号:CN105420263B

    公开(公告)日:2019-07-26

    申请号:CN201510947022.3

    申请日:2015-12-16

    CPC classification number: C07K1/22 C07K1/30 C07K14/50 C12N15/70 C12R1/19

    Abstract: 本发明提供了一种重组人成纤维细胞生长因子‑17蛋白的生产方法,至少包括以下步骤:步骤一、将天然序列的人成纤维细胞生长因子‑17蛋白FGF‑17按照大肠杆菌偏好进行重组和扩增;步骤二、将重组后的rhFGF‑17基因连接至大肠杆菌表达质粒,构成重组表达载体,然后将重组表达载体转化进入大肠杆菌宿主菌,得到FGF‑17蛋白表达工程菌;以及步骤三、对表达工程菌进行培养,之后进行纯化;其中,在纯化过程中,采用如下浓度组分的细胞裂解缓冲液:45‑55mM的三羟甲基氨基甲烷Tris,280~320mM的氯化钠NaCl,1.5~2.5mM的乙二胺四乙酸DTA,0.1~0.3M的蔗糖,以及体积百分比为0.8~1.2%的聚乙二醇辛基苯基醚TritonX‑100,为0.1~0.3%的去氧胆酸钠,为5%‑10%甘油,为0.8~1.2%的苯甲基磺酰氟PMSF。本生产方法生产的FGF‑17蛋白的浓度和纯度高。

    亲和层析填料的筛选方法

    公开(公告)号:CN109206508A

    公开(公告)日:2019-01-15

    申请号:CN201810982583.0

    申请日:2018-08-27

    CPC classification number: C07K16/00 C07K1/22

    Abstract: 本发明涉及一种亲和层析的填料的筛选方法,包括以下步骤:在相同的流速、保留时间下,将含有单克隆抗体的上样液分别连续上样到多个亲和层析柱中,使每个亲和层析柱过载,每个亲和层析柱中含有一种亲和层析填料,且至少有两个亲和层析柱中的亲和层析填料不同;将各个亲和层析柱的流穿液按照穿透的先后顺序分装为多个待测液;检测各个待测液中单克隆抗体的浓度;根据各待测液中单克隆抗体的浓度,确定各种亲和层析填料对单克隆抗体的动态结合能力,并根据动态结合能力筛选亲和层析填料。按照上述亲和层析的填料的筛选方法,能够快速筛选得到适合该单克隆抗体的亲和层析填料。

Patent Agency Ranking