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公开(公告)号:CN111153973B
公开(公告)日:2021-11-30
申请号:CN202010036135.9
申请日:2020-01-14
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/84 , A01H5/12 , A01H6/60
Abstract: 本发明涉及超表达GhCBL2基因在促进棉花叶片中可溶性糖积累的应用,属于植物基因工程技术领域。本发明提供了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的GhCBL2基因或氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的GhCBL2蛋白在促进棉花叶片中可溶性糖积累的应用。将棉花中克隆的GhCBL2基因构建到超表达载体pKGWFS7.0上,借助农杆菌介导的遗传转化,使棉花叶片可溶性糖含量显著提升,从而提高棉花对非生物逆境的抗性,可以为培育节水高产棉花新品种提供理想的途径。
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公开(公告)号:CN113688939A
公开(公告)日:2021-11-23
申请号:CN202111049215.9
申请日:2021-09-08
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及一种花粉活性识别模型训练方法及系统,先获取训练数据集,训练数据集包括多张训练用花粉染色图片。再建立待训练识别模型,待训练识别模型为目标检测模型。最后利用训练数据集对待训练识别模型进行训练,得到识别模型。本发明还提供一种花粉活性识别方法及系统,获取待识别花粉染色图片,再以待识别花粉染色图片作为输入,利用上述训练方法得到的识别模型对待识别花粉染色图片进行识别,得到花粉活性数据,进而能够利用训练好的识别模型对待识别花粉染色图片进行自动识别,提高识别速度和识别效率,避免人工计数带来的费时费力的问题。
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公开(公告)号:CN113278647A
公开(公告)日:2021-08-20
申请号:CN202110572919.8
申请日:2021-05-25
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一种陆地棉基因组的高效定向基因调控的编辑方法,本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的GhBE3‑Dcas9载体进行改造,以6TAL‑2VP64+2linker+dCas9融合蛋白取代原有的APOBEC1‑XTEN‑dCas9‑UGI蛋白,构建在棉花中具有定向上调单个基因表达量的载体Gh‑dCas9‑TV。选取GhEPSP和GhPAP1D为目标基因验证Gh‑dCas9‑TV在棉花中的应用。设计2个单靶标以及一个双靶标,利用农杆菌介导的遗传转化将转录激活编辑系统导入棉花基因组,对转基因植株进行表达量检测和转录组测序,检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率及全基因组和全转录组检测靶标基因,非靶标基因表达量效应。本发明具有良好的编辑效率和特异性。
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公开(公告)号:CN113215161A
公开(公告)日:2021-08-06
申请号:CN202110609717.6
申请日:2021-06-01
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H4/00 , A01H5/12 , A01H6/60
Abstract: 本发明涉及除草剂技术领域,且公开了利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法,包括以下步骤:1)GhEPSP基因的sgRNA设计:选择陆地棉5‑烯醇式丙酮酰莽草酸‑3‑磷酸合酶(5‑Enolpyruvylshikimate‑3‑phosphatesynthase,EPSP合酶)为验证基因,利用在线软件CRISPR‑P(http://cbi.hzau.edu.cn/cgi‑bin/CRISPR)(Lei et al 2014)在基因外显子区域设计sgRNA靶标序列,并且在编辑窗口内C‑T突变改变氨基酸功能的靶点,最终选择1个sgRNA用来构建单碱基系统植物表达载体。该利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法,在棉花中首次成功应用棉花基因组特性的单碱基编辑系统对棉花GhEPSP实现单碱基突变,突变位点未见其他作物报道,通过叶片草甘膦涂抹实验,表现出一定的草甘膦耐受性,提高了棉田除草效率,降低了人工除草成本,防范棉田超级杂草。
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公开(公告)号:CN109752226B
公开(公告)日:2021-06-22
申请号:CN201910010240.2
申请日:2019-01-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物生理生化技术应用领域。具体涉及一种常温或高温下花粉活性快速定量的方法及应用。确定了常温和高温下花粉TTC染色液的配方、染色浓度和最适染色时间和适用范围,制备了组合染色溶液配方:1mol/L磷酸二氢钾5.23g,磷酸氢二钾14.03g,pH为7的磷酸钾缓冲液;再将8g的2,3,5‑三苯基氯化四氮唑(TTC)溶于所得的磷酸钾缓冲液中,用蒸馏水定容至1L,使其终浓度为8g/L。本发明可用于对大批量材料进行花粉活性定量检测,省略了染色后的镜检操作,简化了大批量材料花粉活性鉴定的流程,适用于棉花,水稻等多种作物花粉活性鉴定。
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公开(公告)号:CN112980874A
公开(公告)日:2021-06-18
申请号:CN202110381553.6
申请日:2021-04-09
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/29 , C12N15/113 , A01H5/00 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了GhCIPK6D1基因在改变棉花抗旱性中的应用,属于棉花育种技术领域。本发明提供了一种用于敲除GhCIPK6D1基因的方法在提高棉花抗旱性中的应用,所述GhCIPK6D1基因包括核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的DNA序列或编码氨基酸序列如SEQIDNO:2所示蛋白质的DNA序列。实验表明分别构建超表达GhCIPK6D1基因的重组载体与敲除GhCIPK6D1基因的重组载体分别转入棉花植株中,经过干旱胁迫处理,超表达GhCIPK6D1基因的转基因棉花植株敏旱,敲除GhCIPK6D1基因的棉花植株更加抗旱。本发明所述应用为培育、筛选或鉴定棉花抗逆种质资源提供理想途经。
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公开(公告)号:CN112662684A
公开(公告)日:2021-04-16
申请号:CN202110014741.5
申请日:2021-01-07
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物分子育种技术领域,具体涉及一种改良高温下棉花雄性育性的方法。本发明发现高温抑制棉花花药中茉莉酸合成酶基因GhACO2的表达,导致花药内源茉莉酸含量降低。通过敲除一种GhACO2基因,得到一种棉花突变体,该突变体在常温下表现出雄性不育表型特征。对敲除GhACO2基因的棉花突变体在花蕾期喷施茉莉酸甲酯,可恢复突变体的雄性育性。对敏高温型棉花在花蕾期喷施相同浓度的茉莉酸甲酯,同样可提高高温下棉花的雄性育性,本发明可显著降低因高温导致的棉花雄性败育以及由此引起的棉花大幅减产问题。
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公开(公告)号:CN109593781B
公开(公告)日:2021-02-23
申请号:CN201811577717.7
申请日:2018-12-20
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及陆地棉基因组的精准高效编辑方法。本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行改造,以APOBEC1‑XTEN‑nCas9‑UGI融合蛋白取代原有的Cas9蛋白,构建在棉花中具有单个碱基编辑能力的载体GhBE3。选取GhCLA和GhPEBP为目标基因验证GhBE3在棉花中的应用。设计3个靶标,利用农杆菌介导的遗传转化将单碱基编辑系统导入棉花基因组,对转基因植株进行Sanger测序和高通量测序,检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率及全基因组检测脱靶效应。本发明具有良好的编辑效率和特异性。
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公开(公告)号:CN111944842A
公开(公告)日:2020-11-17
申请号:CN202010859131.0
申请日:2020-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法,涉及植物基因工程技术领域,通过一次性快速构建混合载体文库,经遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料,利用本发明构建的载体文库混合侵染陆地棉下胚轴,通过遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料,用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况,针对棉花抗虫性状结合抗虫鉴定结果筛选有表型的抗感虫陆地棉基因。该构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法,本发明一次性快速构建了包含968个sgRNA覆盖502个基因的混合载体文库用于棉花遗传转化,本发明创建了包含五千多份愈伤两千多份再生植株的棉花基因编辑突变体文库,突变体库覆盖度高达82.07%。
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公开(公告)号:CN111926034A
公开(公告)日:2020-11-13
申请号:CN202010859115.1
申请日:2020-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统,涉及基因工程技术领域。能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9,该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示,该载体通过下列步骤制备获得:获得目的序列TadA-TadA7.10-2linker,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示,利用Ale Ⅰ和Pac Ⅰ对SEQ ID NO:1所示的GhBE3载体进行酶切,与TadA-TadA7.10-2linker目的序列进行连接,通过测序验证,得到如SEQ ID NO:3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhABE7.10n。该陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统,本发明在棉花中的编辑效率达64.86%,本发明在棉花中有较高的特异性,该方法显示出较高的编辑效率和很高的实用性,它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段。
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