公开(公告)号：KR101105271B1

公开(公告)日：2012-01-17

申请号：KR1020090097261

申请日：2009-10-13

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  송재근 ,  조성숙

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12N9/1252

Abstract: 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 나노아케움 이퀴탄스(
Nanoarchaeum equitans ) 유래 DNA 중합효소 (
Neq DNA 중합효소)에서, 점 돌연변이에 의하여 523번째 아미노산인 알라닌이 알기닌으로 치환된, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 코딩하는 핵산 서열로 이루어지는 유전자, 이 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 형질전환체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 포함하는 PCR 키트 및
Neq A523R DNA 중합효소의 제조방법에 대한 것이다.
DNA 중합효소(DNA polymerase), 나노아케움 이퀴탄스(Nanoarchaeum equitans), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 효소 진행성(Processivity)

公开(公告)号：KR1020110103750A

公开(公告)日：2011-09-21

申请号：KR1020100022965

申请日：2010-03-15

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  길의준 ,  조성숙

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12N15/70 ,  C12Q2521/101

Abstract: 본 발명은 초고온성 고세균(hyperthermophilic archaea)인 써모코커스 래디오톨러런스(
Thermococcus

radiotolerans ) 균주 유래의 신규 내열성 DNA 중합효소 (이하 '
Tra DNA polymerase'라 칭함)와 이를 암호화하는 핵산 분자 및 그 아미노산 서열, 상기 핵산 서열을 포함하는 벡터, 상기 벡터로 형질 전환된 대장균(
Escherichia

coli )에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기
Tra DNA 중합효소의 제조 방법 및 상기
Tra DNA 중합효소를 포함하는 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라 칭함) 키트를 포함한다. 본 발명은 분자생물학 연구, 유전질환의 진단, 바이러스 유전자 및 암 유전자의 조기진단, 친자 확인, LMO 감별, 법의학적 연구 등 다양한 분야에 있어서 이용되어지고 있는 PCR 반응에서 가장 핵심적인 요소인 내열성 DNA 중합 효소로 제공될 수 있다는 점에서 의의가 있다. 특히, 본 발명의
Tra DNA 중합효소는 DNA 중합 활성(DNA polymerization activity) 및 교정 활성(proofreading activity)을 모두 가지고 있어 PCR 증폭시 에러율을 낮출 수 있으므로 정확성이 요구되는 PCR에 유용하게 사용될 수 있는 장점을 갖는다.

公开(公告)号：KR1020110040116A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：KR1020090097261

申请日：2009-10-13

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  송재근 ,  조성숙

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12N9/1252

Abstract: PURPOSE: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase is provided to improve processivity and extension rate and to enhance specificity and amplification efficiency under the presence of dUTP. CONSTITUTION: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase has an amino acid sequence of sequence number 2 in which 523th amino acid, alanine is substituted with arginine. A gene having a nucleic acid sequence encoding the polymerase has a sequence of sequence number 3. A recombinant vector contains the gene. The recombinant vector is Penpa523r. An E.coli transformed by the recombinant vector is Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pENPA523R(deposit number: KCCM11031P). A method for preparing the polymerase comprises: a step of preparing the recombinant vector; a step of inserting the recombinant vector into a host cell for transformation; a step of culturing the transformant; and a step of collecting the polymerase from the transformant.

Abstract translation: 目的：提供突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶，以提高持续性和延伸率，并在dUTP存在下提高特异性和扩增效率。 构成：突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶具有序列号2的氨基酸序列，其中第523个氨基酸，丙氨酸被精氨酸取代。 具有编码聚合酶的核酸序列的基因具有序列号3的序列。重组载体包含该基因。 重组载体为Penpa523r。 由重组载体转化的大肠杆菌是大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIL / pENPA523R（保藏号：KCCM11031P）。 制备聚合酶的方法包括：制备重组载体的步骤; 将重组载体插入宿主细胞进行转化的步骤; 培养转化体的一个步骤; 以及从转化体收集聚合酶的步骤。

公开(公告)号：KR1020100107873A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：KR1020090026203

申请日：2009-03-27

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  배희진 ,  김기쁨

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/63

Abstract: PURPOSE: A thermal resistant DNA polymerase which is derived from Thermococcus celer with DNA polymerization activity and proofreading activity is provided to widely use in various nucleic acid polymerization. CONSTITUTION: A thermal resistant Tce DNA polymerase isolated from Thermococcus celer contains an amino acid of seuqnce number 10. The Tce DNA polymerase has an optimal activity in 20-35 mM of (NH_4)_2SO_4 and 4-16 mM of Mg^2+ at pH 6.5 and 75°C. A nucleic acid molecule encoding the Tce DNA polymerase contains a nucleic acid sequence of sequence number 9. A pTCE vector contains a nucleic acid molecule encoding the Tce DNA polymerase. A method for preparing the Tce DNA polymerase comprises: a step of preparing a vector expressing the Tce DNA polymerase; a step of transforming the vector to the microorganism; a step of culturing the transformant; and a step of collecting protein from the transformant.

Abstract translation: 目的：提供具有DNA聚合活性和校正活性的源自Thermococcus celer的耐热DNA聚合酶，广泛用于各种核酸聚合。 构成：从Thermococcus celer分离的耐热Tce DNA聚合酶含有第10号氨基酸.Tce DNA聚合酶在20-35mM（NH_4）_2SO_4和4-16mM Mg2 +中具有最佳活性 pH 6.5和75℃。 编码Tce DNA聚合酶的核酸分子含有序列号9的核酸序列.PTCE载体含有编码Tce DNA聚合酶的核酸分子。 制备Tce DNA聚合酶的方法包括：制备表达Tce DNA聚合酶的载体的步骤; 将载体转化到微生物的步骤; 培养转化体的一个步骤; 以及从转化体中收集蛋白质的步骤。

公开(公告)号：KR100969477B1

公开(公告)日：2010-07-14

申请号：KR1020080031585

申请日：2008-04-04

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  이종일

IPC: C12N9/12 ,  C12N9/00 ,  C12N15/52

Abstract: 본 발명은 초고온성 고세균 (hyperthermophilic archaebacteria) 써모코커스 구아이마센시스 (
Thermococcus

guaymasensis ) 균주 유래 내열성 DNA 중합효소 (이하 '
Tgu DNA 중합효소'라고 함) 및 그것을 암호화하는 유전자, 그리고
Tgu DNA 중합효소 유전자의 대장균 (
Escherichia
coli ) 내에서의 발현 및 정제 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 발현 및 정제방법에 의하여 생산된
Tgu DNA 중합효소를 이용한 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction; PCR) 방법을 제공한다. 본 발명의
Tgu DNA 중합효소는 우수한 DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity) 및 높은 교정 활성 (proofreading activity)을 가지고 있어 PCR에 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명에서 내열성
Tgu DNA 중합효소의 발현 시스템의 구축 및 정제 과정의 확립은 산업적으로 중요한 기술인 PCR에 절대적으로 필요한 내열성 DNA 중합효소의 대량생산을 용이하게 할 뿐만 아니라 생산비용 절감 효과가 있다.
써모코커스 구아이마센시스, 내열성, 중합효소, PCR

公开(公告)号：KR100963014B1

公开(公告)日：2010-06-09

申请号：KR1020070105238

申请日：2007-10-18

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  김건아 ,  이미선 ,  이정현

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/56 ,  C12N15/09

Abstract: 본 발명은 바실러스 스피시스 HJ171 균주 유래의 우라실-DNA 글리코실라제(UDG) 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로 저온성 세균인 바실러스 스피시스 HJ171 (
Bacillus sp. HJ171)로부터 분리된 저온성 우라실-DNA 글리코실라제 (uracil- DNA glycosylase)의 유전자 및 그로부터 유추되는 아미노산 서열,
Bsp HJ171 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG) 유전자의 대장균 (
Escherichia coli ) 내에서 발현 및 정제, 이를 통해서 생산된 UDG의 생화학적 특성 및 중합효소 연쇄반응 (PCR)에의 이용에 관한 것이다.
본 발명의 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG)는 우라실을 포함하고 있는 DNA 기질 내의 우라실 염기를 저온에서 특이적으로 분해하는 활성이 있고 고온에서 쉽게 변성하는 특징이 있어 dUTP를 이용한 PCR 과정 중에서 발생하는 교차 오염 (carry-over contamination)을 쉽게 제거 할 수 있다. 따라서 본 발명의 신규한
Bsp HJ171 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG)는 PCR를 이용한 임상진단 시에 PCR의 정확도, 가성양성의 제거(elimination of false positives) 즉 순도 및 증폭 효율을 증가시키는데 효과적으로 사용될 수 있다.
바실러스 스피시스 HJ171, 우라실-DNA 글리코실라제(UDG), 중합효소 연쇄반 응(PCR)

公开(公告)号：KR100793007B1

公开(公告)日：2008-01-08

申请号：KR1020050109371

申请日：2005-11-15

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  최정진 ,  남기훈

IPC: C12N15/64

CPC classification number: C12N9/1252 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2521/101

Abstract: 본 발명은 활성형 나노아케움 이퀴탄스 B-type DNA 중합효소 (
Nanoarchaeum

equitans B-type DNA polymerase,
Neq DNA polymerase, 이하 '
Neq DNA 중합효소'라고 함)를 제조하는 방법, 이의 방법으로 제조된 활성형
Neq DNA 중합효소 및 활성형
Neq DNA 중합효소를 이용한 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라고 함)에 관한 것으로, 본 발명의 활성형
Neq DNA 중합효소는 PCR 등의 다양한 핵산 중합 반응에 이용되어질 수 있을 것이다.
DNA 중합효소 (DNA polymerase), 나노아케움 이퀴탄스 (Nanoarchaeum equitans), DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity), 분할된 미니 인테인 (split mini-intein), 단백질 트랜스 스플라이싱 (protein trans-splicing), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 핵산 중합 반응

公开(公告)号：KR1020070051596A

公开(公告)日：2007-05-18

申请号：KR1020050109371

申请日：2005-11-15

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  최정진 ,  남기훈

IPC: C12N15/64

CPC classification number: C12N9/1252 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2521/101

Abstract: 본 발명은 활성형 나노아케움 이퀴탄스 B-type DNA 중합효소 (
Nanoarchaeum

equitans B-type DNA polymerase,
Neq DNA polymerase, 이하 '
Neq DNA 중합효소'라고 함)를 제조하는 방법, 이의 방법으로 제조된 활성형
Neq DNA 중합효소 및 활성형
Neq DNA 중합효소를 이용한 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라고 함)에 관한 것으로, 본 발명의 활성형
Neq DNA 중합효소는 PCR 등의 다양한 핵산 중합 반응에 이용되어질 수 있을 것이다.
DNA 중합효소 (DNA polymerase), 나노아케움 이퀴탄스 (Nanoarchaeum equitans), DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity), 분할된 미니 인테인 (split mini-intein), 단백질 트랜스 스플라이싱 (protein trans-splicing), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 핵산 중합 반응

公开(公告)号：KR101296882B1

公开(公告)日：2013-08-14

申请号：KR1020110117309

申请日：2011-11-11

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  조성숙

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/31 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70

Abstract: 본 발명은 DNA 중합 활성(DNA polymerization activity) 및 교정 활성(proofreading activity)을 모두 갖고 있는 써모코커스 와이오타푸엔시스 유래의 DNA 중합효소(
Thermococcus

waiotapuensis -derived
DNA polymerase, 이하 '
Twa DNA 중합효소'라고 함)의 변이체들(variants)에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 점 돌연변이 방법으로
Twa DNA 중합효소의 501번째 아미노산인 아스파라진을 알지닌으로 치환시킨 돌연변이 써모코커스 와이오타푸엔시스 N501R DNA 중합효소(
Thermococcus

waiotapuensis
N501R DNA polymerase,
Twa
N501R DNA polymerase, 이하 '
Twa
N501R DNA 중합효소'라고 함) 및 501번째 아미노산인 아스파라진을 라이신으로 치환시킨 돌연변이 써모코커스 와이오타푸엔시스 N501K DNA 중합효소(
Thermococcus

waiotapuensis
N501K DNA polymerase,
Twa
N501K DNA polymerase, 이하 '
Twa
N501K DNA 중합효소'라고 함)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은
Twa DNA 중합효소를 코딩하는 핵산서열, 상기 핵산서열을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환 된 미생물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은
Twa N501R DNA 중합효소와
Twa N501K DNA 중합효소를 코딩하는 핵산서열, 상기 핵산서열을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환 된 미생물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기
Twa DNA 중합효소,
Twa
N501R DNA 중합효소 및
Twa
N501K DNA 중합효소의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 DNA 중합효소들은 기존의 상업적 DNA 중합효소와 비교하였을 때 높은 충실도(fidelity)를 가지며, 특히
Twa
N501R DNA 중합효소와
Twa
N501K DNA 중합효소는 야생형
Twa DNA 중합효소보다 월등히 향상된 DNA 증폭속도 및 증폭량 등을 가진다.

公开(公告)号：KR1020130054474A

公开(公告)日：2013-05-27

申请号：KR1020110117309

申请日：2011-11-11

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  조성숙

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/31 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A Thermococcus waiotapuensis DNA polymerase variant is provided to perform various nucleic acid polymerizations such as PCR, to improve PCR efficiency and amplification speed, and to be used for early diagnosis of genetic diseases, GMO and forensic medicine. CONSTITUTION: A Thermococcus waiotapuensis DNA polymerase variant is prepared by mutation of Thermococcus waiotapuensis-derived DNA polymerase at 501th amino acid from asparagines to arginine. The variant contains an amino acid of sequence number 23. A nucleic acid encodes the variant and has a base sequence of sequence number 22. pTWAN501R vector contains the nucleic acid. Rosetta(DE3) pLysS/pTWAN501R(deposit number KACC95108P) E.coli is transformed by the vector.

Abstract translation: 目的：提供Thermococcus waiotapuensis DNA聚合酶变体，以进行各种核酸聚合，如PCR，提高PCR效率和扩增速度，并用于遗传疾病，转基因生物和法医学的早期诊断。 构成：通过从天门冬酰胺到精氨酸的第501位氨基酸的Thermococcus waiotapuensis衍生的DNA聚合酶的突变，制备了热球菌（Waiotapuensis）DNA聚合酶变异体。 该变体含有序列号23的氨基酸。核酸编码该变体并具有序列号为22的碱基序列.pTWAN501R载体含有该核酸。 Rosetta（DE3）pLysS / pTWAN501R（保藏号KACC95108P）通过载体转化大肠杆菌。