-
公开(公告)号：KR1020120058214A
公开(公告)日：2012-06-07
申请号：KR1020100119895
申请日：2010-11-29
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12Q1/6848 , C12Q2521/101 , C12Q2527/101 , C12Q2539/105 , C12Q2549/101 , C12Q1/6851
Abstract: PURPOSE: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of Neq L fragment and Neq S fragment is provided to be used in a technique of preventing carryover contamination. CONSTITUTION: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of NeqL fragment and NeqS fragment containing intein comprises: a step of preparing a PCR reaction solution; a step of adding the NeqL fragment and NeqS fragment; a step of performing trans-splicing to form a polypeptide with NeqDNA polymerase activity; and a step of performing DNA denaturation, primer annealing, and elongation.
Abstract translation: 目的：提供一种基于Neq L片段和Neq S片段的蛋白质转录的热启动PCR方法，用于防止携带污染的技术。 构成：基于NeqL片段的蛋白质翻译和含有内含肽的NeqS片段的热启动PCR方法包括：制备PCR反应溶液的步骤; 添加NeqL片段和NeqS片段的步骤; 进行转拼以形成具有NeqDNA聚合酶活性的多肽的步骤; 以及进行DNA变性，引物退火和伸长的步骤。
-
公开(公告)号：KR101296882B1
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：KR1020110117309
申请日：2011-11-11
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: 본 발명은 DNA 중합 활성(DNA polymerization activity) 및 교정 활성(proofreading activity)을 모두 갖고 있는 써모코커스 와이오타푸엔시스 유래의 DNA 중합효소(
Thermococcus
waiotapuensis -derived
DNA polymerase, 이하 '
Twa DNA 중합효소'라고 함)의 변이체들(variants)에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 점 돌연변이 방법으로
Twa DNA 중합효소의 501번째 아미노산인 아스파라진을 알지닌으로 치환시킨 돌연변이 써모코커스 와이오타푸엔시스 N501R DNA 중합효소(
Thermococcus
waiotapuensis
N501R DNA polymerase,
Twa
N501R DNA polymerase, 이하 '
Twa
N501R DNA 중합효소'라고 함) 및 501번째 아미노산인 아스파라진을 라이신으로 치환시킨 돌연변이 써모코커스 와이오타푸엔시스 N501K DNA 중합효소(
Thermococcus
waiotapuensis
N501K DNA polymerase,
Twa
N501K DNA polymerase, 이하 '
Twa
N501K DNA 중합효소'라고 함)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은
Twa DNA 중합효소를 코딩하는 핵산서열, 상기 핵산서열을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환 된 미생물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은
Twa N501R DNA 중합효소와
Twa N501K DNA 중합효소를 코딩하는 핵산서열, 상기 핵산서열을 포함하는 벡터, 및 상기 벡터로 형질전환 된 미생물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기
Twa DNA 중합효소,
Twa
N501R DNA 중합효소 및
Twa
N501K DNA 중합효소의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 DNA 중합효소들은 기존의 상업적 DNA 중합효소와 비교하였을 때 높은 충실도(fidelity)를 가지며, 특히
Twa
N501R DNA 중합효소와
Twa
N501K DNA 중합효소는 야생형
Twa DNA 중합효소보다 월등히 향상된 DNA 증폭속도 및 증폭량 등을 가진다.-
公开(公告)号：KR1020130054474A
公开(公告)日：2013-05-27
申请号：KR1020110117309
申请日：2011-11-11
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: A Thermococcus waiotapuensis DNA polymerase variant is provided to perform various nucleic acid polymerizations such as PCR, to improve PCR efficiency and amplification speed, and to be used for early diagnosis of genetic diseases, GMO and forensic medicine. CONSTITUTION: A Thermococcus waiotapuensis DNA polymerase variant is prepared by mutation of Thermococcus waiotapuensis-derived DNA polymerase at 501th amino acid from asparagines to arginine. The variant contains an amino acid of sequence number 23. A nucleic acid encodes the variant and has a base sequence of sequence number 22. pTWAN501R vector contains the nucleic acid. Rosetta(DE3) pLysS/pTWAN501R(deposit number KACC95108P) E.coli is transformed by the vector.
Abstract translation: 目的：提供Thermococcus waiotapuensis DNA聚合酶变体，以进行各种核酸聚合，如PCR，提高PCR效率和扩增速度，并用于遗传疾病，转基因生物和法医学的早期诊断。 构成：通过从天门冬酰胺到精氨酸的第501位氨基酸的Thermococcus waiotapuensis衍生的DNA聚合酶的突变，制备了热球菌（Waiotapuensis）DNA聚合酶变异体。 该变体含有序列号23的氨基酸。核酸编码该变体并具有序列号为22的碱基序列.pTWAN501R载体含有该核酸。 Rosetta（DE3）pLysS / pTWAN501R（保藏号KACC95108P）通过载体转化大肠杆菌。
-
4.发明授权돌연변이 나노아케움 이퀴탄스 Ａ５２３Ｒ ＤＮＡ 중합효소 및 이의 이용 失效MUTANT NANOARCHAEUM EQUITANS A523R DNA POLYMERASE AND ITS USE
公开(公告)号：KR101105271B1
公开(公告)日：2012-01-17
申请号：KR1020090097261
申请日：2009-10-13
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12N9/1252
Abstract: 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 나노아케움 이퀴탄스(
Nanoarchaeum equitans ) 유래 DNA 중합효소 (
Neq DNA 중합효소)에서, 점 돌연변이에 의하여 523번째 아미노산인 알라닌이 알기닌으로 치환된, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 코딩하는 핵산 서열로 이루어지는 유전자, 이 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 형질전환체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 포함하는 PCR 키트 및
Neq A523R DNA 중합효소의 제조방법에 대한 것이다.
DNA 중합효소(DNA polymerase), 나노아케움 이퀴탄스(Nanoarchaeum equitans), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 효소 진행성(Processivity)-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：KR1020110103750A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：KR1020100022965
申请日：2010-03-15
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12Q1/686 , C12N15/70 , C12Q2521/101
Abstract: 본 발명은 초고온성 고세균(hyperthermophilic archaea)인 써모코커스 래디오톨러런스(
Thermococcus
radiotolerans ) 균주 유래의 신규 내열성 DNA 중합효소 (이하 '
Tra DNA polymerase'라 칭함)와 이를 암호화하는 핵산 분자 및 그 아미노산 서열, 상기 핵산 서열을 포함하는 벡터, 상기 벡터로 형질 전환된 대장균(
Escherichia
coli )에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기
Tra DNA 중합효소의 제조 방법 및 상기
Tra DNA 중합효소를 포함하는 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라 칭함) 키트를 포함한다. 본 발명은 분자생물학 연구, 유전질환의 진단, 바이러스 유전자 및 암 유전자의 조기진단, 친자 확인, LMO 감별, 법의학적 연구 등 다양한 분야에 있어서 이용되어지고 있는 PCR 반응에서 가장 핵심적인 요소인 내열성 DNA 중합 효소로 제공될 수 있다는 점에서 의의가 있다. 특히, 본 발명의
Tra DNA 중합효소는 DNA 중합 활성(DNA polymerization activity) 및 교정 활성(proofreading activity)을 모두 가지고 있어 PCR 증폭시 에러율을 낮출 수 있으므로 정확성이 요구되는 PCR에 유용하게 사용될 수 있는 장점을 갖는다.-
6.发明公开돌연변이 나노아케움 이퀴탄스 Ａ５２３Ｒ ＤＮＡ 중합효소 및 이의 이용 失效MUTANT NANOARCHAEUM EQUITANS A523R DNA POLYMERASE AND ITS USE
公开(公告)号：KR1020110040116A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：KR1020090097261
申请日：2009-10-13
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12N9/1252
Abstract: PURPOSE: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase is provided to improve processivity and extension rate and to enhance specificity and amplification efficiency under the presence of dUTP. CONSTITUTION: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase has an amino acid sequence of sequence number 2 in which 523th amino acid, alanine is substituted with arginine. A gene having a nucleic acid sequence encoding the polymerase has a sequence of sequence number 3. A recombinant vector contains the gene. The recombinant vector is Penpa523r. An E.coli transformed by the recombinant vector is Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pENPA523R(deposit number: KCCM11031P). A method for preparing the polymerase comprises: a step of preparing the recombinant vector; a step of inserting the recombinant vector into a host cell for transformation; a step of culturing the transformant; and a step of collecting the polymerase from the transformant.
Abstract translation: 目的：提供突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶，以提高持续性和延伸率，并在dUTP存在下提高特异性和扩增效率。 构成：突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶具有序列号2的氨基酸序列，其中第523个氨基酸，丙氨酸被精氨酸取代。 具有编码聚合酶的核酸序列的基因具有序列号3的序列。重组载体包含该基因。 重组载体为Penpa523r。 由重组载体转化的大肠杆菌是大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIL / pENPA523R（保藏号：KCCM11031P）。 制备聚合酶的方法包括：制备重组载体的步骤; 将重组载体插入宿主细胞进行转化的步骤; 培养转化体的一个步骤; 以及从转化体收集聚合酶的步骤。
-
公开(公告)号：KR101303990B1
公开(公告)日：2013-10-15
申请号：KR1020120035330
申请日：2012-04-05
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: Thermococcus pacificus DNA polymerase variant is provided to be used in a various way such as gene diagnosis and PCR reaction thanks to being high in DNA amplification and amplification speed during PCR. CONSTITUTION: DNA polymerase comprises amino acid sequences chosen from a group comprised of sequence number 9, 10 and 11. A recombinant vector comprises amino acid sequence coding the amino acid sequences above. A host cell is transformed into the recombinant vector. The method of manufacturing DNA polymerase comprises the following steps. A recombinant vector which comprises base sequence s coding the amino acid is manufactured. The recombinant vector is transformed into a host cell. The transformed cell is cultivated. Protein from the transformed cell is collected.
Abstract translation: 目的：由于DNA扩增和PCR扩增速度高，提供了以多种方式进行基因诊断和PCR反应的太平洋热带球菌DNA聚合酶变体。 构成：DNA聚合酶包含选自序列号9,10和11的氨基酸序列。重组载体包含编码上述氨基酸序列的氨基酸序列。 将宿主细胞转化入重组载体。 制备DNA聚合酶的方法包括以下步骤。 制备包含编码氨基酸的碱基序列的重组载体。 将重组载体转化到宿主细胞中。 转化的细胞被培养。 收集来自转化细胞的蛋白质。
-
公开(公告)号：KR101230362B1
公开(公告)日：2013-02-15
申请号：KR1020100119895
申请日：2010-11-29
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12Q1/6848 , C12Q2521/101 , C12Q2527/101 , C12Q2539/105 , C12Q2549/101
Abstract: 본 발명은, 인테인이 포함된
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱을 기반으로 한 핫-스타트 PCR 수행방법에 대한 것이다. 구체적으로 본 발명은, 샘플 DNA 및 프라이머를 포함하는 PCR 반응 용액을 준비하고; 579번에서 676번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 대단편과, 1번에서 30번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 소단편을 상기 PCR 반응 용액에 함께 첨가하고; 상기 PCR 반응 용액 내의 상기
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱 과정을 통해
Neq DNA 중합효소 활성을 가지는 폴리펩타이드를 형성하고; 그리고 일련의 DNA 변성, 프라이머 어닐링 및 신장 단계를 포함하는 핫-스타트 PCR 수행방법에 관한 것이다.-
9.发明授权나노아케움 이퀴탄스 유래의 Neq HS DNA 중합효소의 돌연변이체 제조 및 이를 이용한 hot-start PCR 응용 有权从NANOARCHAEUM EQUITAN的MUTANT NEQ HS DNA聚合物及其应用于热启动PCR
公开(公告)号：KR101488110B1
公开(公告)日：2015-01-29
申请号：KR1020130147812
申请日：2013-11-29
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12N9/1252 , C07K2319/00 , C07K2319/21 , C12Q1/686 , C12Q2521/101 , C12Q2549/101
Abstract: A DNA polymerase (Neq DNA polymerase) derived from Nanoarchaeum equitans is divided into a Neq DNA polymerase large fragment (NeqL) and a NeqDNA polymerase small fragment (NeqS), and the fragments have intein respectively. The present invention connects inteins of the NeqL fragment and the NeqS fragment into one and provides a Neq hot-start (HS) DNA polymerase in a form of a precursor of the Neq DNA polymerase. The Neq HS DNA polymerase has an advantage of reducing inconvenience of being used for hot-start PCR by an intein trans splicing by purifying the existing NeqL fragment and NeqS fragment respectively. Especially, six histidine (His-tag) sequence is inserted in the level of gene between the intein of the NeqL fragment and the intein of NeqS fragment to significantly improve the purifying method. Additionally, as a result of an effort for increasing PCR efficiency of Neq HS DNA polymerase, mutation is induced on a specific part of Neq HS DNA polymerase genes to select Neq HS mutant polymerases (M1, M2, and M3) having significantly improved PCR amplification rate and amplification amount.
Abstract translation: 将衍生自Nanoarchaeum equitans的DNA聚合酶（Neq DNA聚合酶）分为Neq DNA聚合酶大片段（NeqL）和NeqDNA聚合酶小片段（NeqS），分别具有内含肽。 本发明将NeqL片段和NeqS片段的内含肽连接在一起，并以Neq DNA聚合酶的前体形式提供Neq热启动（HS）DNA聚合酶。 Neq HS DNA聚合酶具有通过分别纯化现有的NeqL片段和NeqS片段，通过内含肽的剪接减少用于热启动PCR的不便的优点。 特别地，将六组氨酸（His-标签）序列插入NeqL片段的内含肽与NeqS片段的内含肽之间的基因水平，以显着提高纯化方法。 另外，作为提高Neq HS DNA聚合酶的PCR效率的努力的结果，在特定部分的Neq HS DNA聚合酶基因上诱导突变以选择具有显着改善的PCR扩增的Neq HS突变型聚合酶（M1，M2和M3） 速率和放大量。
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
9
records
(took 0.018 seconds)
