公开(公告)号：KR101230362B1

公开(公告)日：2013-02-15

申请号：KR1020100119895

申请日：2010-11-29

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  조성숙 ,  송재근 ,  김인혜 ,  이강근 ,  윤만희

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Q1/6848 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2527/101 ,  C12Q2539/105 ,  C12Q2549/101

Abstract: 본 발명은, 인테인이 포함된
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱을 기반으로 한 핫-스타트 PCR 수행방법에 대한 것이다. 구체적으로 본 발명은, 샘플 DNA 및 프라이머를 포함하는 PCR 반응 용액을 준비하고; 579번에서 676번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 대단편과, 1번에서 30번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 소단편을 상기 PCR 반응 용액에 함께 첨가하고; 상기 PCR 반응 용액 내의 상기
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱 과정을 통해
Neq DNA 중합효소 활성을 가지는 폴리펩타이드를 형성하고; 그리고 일련의 DNA 변성, 프라이머 어닐링 및 신장 단계를 포함하는 핫-스타트 PCR 수행방법에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1020120058214A

公开(公告)日：2012-06-07

申请号：KR1020100119895

申请日：2010-11-29

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  조성숙 ,  송재근 ,  김인혜 ,  이강근 ,  윤만희

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Q1/6848 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2527/101 ,  C12Q2539/105 ,  C12Q2549/101 ,  C12Q1/6851

Abstract: PURPOSE: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of Neq L fragment and Neq S fragment is provided to be used in a technique of preventing carryover contamination. CONSTITUTION: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of NeqL fragment and NeqS fragment containing intein comprises: a step of preparing a PCR reaction solution; a step of adding the NeqL fragment and NeqS fragment; a step of performing trans-splicing to form a polypeptide with NeqDNA polymerase activity; and a step of performing DNA denaturation, primer annealing, and elongation.

Abstract translation: 目的：提供一种基于Neq L片段和Neq S片段的蛋白质转录的热启动PCR方法，用于防止携带污染的技术。 构成：基于NeqL片段的蛋白质翻译和含有内含肽的NeqS片段的热启动PCR方法包括：制备PCR反应溶液的步骤; 添加NeqL片段和NeqS片段的步骤; 进行转拼以形成具有NeqDNA聚合酶活性的多肽的步骤; 以及进行DNA变性，引物退火和伸长的步骤。

公开(公告)号：KR1020090126538A

公开(公告)日：2009-12-09

申请号：KR1020080052676

申请日：2008-06-04

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  최정진 ,  송재근

IPC: C12N9/12 ,  C12N9/00 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/686 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q2521/101

Abstract: PURPOSE: A method for performing PCR using Neq plus DNA polymerase is provided to use in prevention technique of carry-over contamination using dUTP. CONSTITUTION: A Neq plus DNA polymerase is obtained by mixing Neq DNA polymerase and Taq DNA polymerase in a concentration ratio of 1:10. The Neq plus DNA polymerase is used for PCR under the presence of dUTP(2'-deoxyuridine 5'-triphosphate). The method further comprises uracill-DNA glycosylase.

Abstract translation: 目的：提供使用Neq plus DNA聚合酶进行PCR的方法，用于使用dUTP的携带污染的预防技术。 构成：通过以1:10的浓度比混合Neq DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶，得到Neq plus DNA聚合酶。 在dUTP（2'-脱氧尿苷5'-三磷酸）存在下，使用Neq plus DNA聚合酶进行PCR。 该方法还包括尿嘧啶-DNA糖基化酶。

公开(公告)号：KR101155368B1

公开(公告)日：2012-06-19

申请号：KR1020080052676

申请日：2008-06-04

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  최정진 ,  송재근

IPC: C12N9/12 ,  C12N9/00 ,  C12Q1/68

Abstract: 본 발명은 나노아케움 이퀴탄스 DNA 중합효소 (
Nanoarchaeum

equitans DNA polymerase, 이하 '
Neq DNA 중합효소'라고 함)의 신규한 PCR 반응 완충용액의 제조 및
Neq DNA 중합효소를 이용한 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라고 함)의 응용에 관한 것이다.
Neq DNA 중합효소는 본 발명의 신규한 완충용액 하에서 10 kb까지 λ-DNA를 증폭할 수 있으며, 데옥시유티피 (dUTP)와 데옥시아이티피 (dITP)를 이용하여 PCR을 수행할 수 있다. 또한 본 발명은
Neq 플러스 (plus) DNA 중합효소의 제조에 관한 것이다.
Neq plus DNA 중합효소는
Neq DNA 중합효소에
Taq
DNA 중합효소를 혼합하여 제조한 것으로 20 kb 이상의 λ-DNA 단편을 PCR로 증폭할 수 있으며, 데옥시유티피 (dUTP) 존재 하에서도
Taq DNA 중합효소를 이용하는 것보다 2~3배 더 효과적으로 PCR을 수행할 수 있다. 또한
Taq
DNA 중합효소보다 더 높은 피델리티 (fidelity)를 가지고 있다. 또한, 본 발명은 우라실 DNA 글리코실라제 (uracil-DNA glycosylase: UDG)와 함께 데옥시유티피 (dUTP)를 이용한 핵산 시료의 교차 오염 (carry-over contamination) 방지 기술에
Taq DNA 중합효소보다 더 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
DNA 중합효소, Neq plus DNA 중합효소, 중합효소 연쇄 반응, 교차오염, dUTP, dITP, UDG.

公开(公告)号：KR101105271B1

公开(公告)日：2012-01-17

申请号：KR1020090097261

申请日：2009-10-13

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  송재근 ,  조성숙

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12N9/1252

Abstract: 본 발명은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 나노아케움 이퀴탄스(
Nanoarchaeum equitans ) 유래 DNA 중합효소 (
Neq DNA 중합효소)에서, 점 돌연변이에 의하여 523번째 아미노산인 알라닌이 알기닌으로 치환된, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 코딩하는 핵산 서열로 이루어지는 유전자, 이 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 형질전환체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 돌연변이
Neq A523R DNA 중합효소를 포함하는 PCR 키트 및
Neq A523R DNA 중합효소의 제조방법에 대한 것이다.
DNA 중합효소(DNA polymerase), 나노아케움 이퀴탄스(Nanoarchaeum equitans), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 효소 진행성(Processivity)

公开(公告)号：KR1020110040116A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：KR1020090097261

申请日：2009-10-13

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  송재근 ,  조성숙

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/63 ,  C12N15/70 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12N9/1252

Abstract: PURPOSE: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase is provided to improve processivity and extension rate and to enhance specificity and amplification efficiency under the presence of dUTP. CONSTITUTION: A mutant Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA polymerase has an amino acid sequence of sequence number 2 in which 523th amino acid, alanine is substituted with arginine. A gene having a nucleic acid sequence encoding the polymerase has a sequence of sequence number 3. A recombinant vector contains the gene. The recombinant vector is Penpa523r. An E.coli transformed by the recombinant vector is Escherichia coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL/pENPA523R(deposit number: KCCM11031P). A method for preparing the polymerase comprises: a step of preparing the recombinant vector; a step of inserting the recombinant vector into a host cell for transformation; a step of culturing the transformant; and a step of collecting the polymerase from the transformant.

Abstract translation: 目的：提供突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶，以提高持续性和延伸率，并在dUTP存在下提高特异性和扩增效率。 构成：突变体Nanoarchaeum equitans Neq A523R DNA聚合酶具有序列号2的氨基酸序列，其中第523个氨基酸，丙氨酸被精氨酸取代。 具有编码聚合酶的核酸序列的基因具有序列号3的序列。重组载体包含该基因。 重组载体为Penpa523r。 由重组载体转化的大肠杆菌是大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIL / pENPA523R（保藏号：KCCM11031P）。 制备聚合酶的方法包括：制备重组载体的步骤; 将重组载体插入宿主细胞进行转化的步骤; 培养转化体的一个步骤; 以及从转化体收集聚合酶的步骤。