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1.发明授权나노아케움 이퀴탄스 유래의 Neq HS DNA 중합효소의 돌연변이체 제조 및 이를 이용한 hot-start PCR 응용 有权从NANOARCHAEUM EQUITAN的MUTANT NEQ HS DNA聚合物及其应用于热启动PCR
公开(公告)号：KR101488110B1
公开(公告)日：2015-01-29
申请号：KR1020130147812
申请日：2013-11-29
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12N9/1252 , C07K2319/00 , C07K2319/21 , C12Q1/686 , C12Q2521/101 , C12Q2549/101
Abstract: A DNA polymerase (Neq DNA polymerase) derived from Nanoarchaeum equitans is divided into a Neq DNA polymerase large fragment (NeqL) and a NeqDNA polymerase small fragment (NeqS), and the fragments have intein respectively. The present invention connects inteins of the NeqL fragment and the NeqS fragment into one and provides a Neq hot-start (HS) DNA polymerase in a form of a precursor of the Neq DNA polymerase. The Neq HS DNA polymerase has an advantage of reducing inconvenience of being used for hot-start PCR by an intein trans splicing by purifying the existing NeqL fragment and NeqS fragment respectively. Especially, six histidine (His-tag) sequence is inserted in the level of gene between the intein of the NeqL fragment and the intein of NeqS fragment to significantly improve the purifying method. Additionally, as a result of an effort for increasing PCR efficiency of Neq HS DNA polymerase, mutation is induced on a specific part of Neq HS DNA polymerase genes to select Neq HS mutant polymerases (M1, M2, and M3) having significantly improved PCR amplification rate and amplification amount.
Abstract translation: 将衍生自Nanoarchaeum equitans的DNA聚合酶（Neq DNA聚合酶）分为Neq DNA聚合酶大片段（NeqL）和NeqDNA聚合酶小片段（NeqS），分别具有内含肽。 本发明将NeqL片段和NeqS片段的内含肽连接在一起，并以Neq DNA聚合酶的前体形式提供Neq热启动（HS）DNA聚合酶。 Neq HS DNA聚合酶具有通过分别纯化现有的NeqL片段和NeqS片段，通过内含肽的剪接减少用于热启动PCR的不便的优点。 特别地，将六组氨酸（His-标签）序列插入NeqL片段的内含肽与NeqS片段的内含肽之间的基因水平，以显着提高纯化方法。 另外，作为提高Neq HS DNA聚合酶的PCR效率的努力的结果，在特定部分的Neq HS DNA聚合酶基因上诱导突变以选择具有显着改善的PCR扩增的Neq HS突变型聚合酶（M1，M2和M3） 速率和放大量。
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公开(公告)号：KR101142950B1
公开(公告)日：2012-05-08
申请号：KR1020080123299
申请日：2008-12-05
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: 본 발명은 DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity) 및 교정 활성 (proofreading activity)을 모두 가지는 써모코커스 마리너스 유래의 내열성 DNA 중합효소 (
Tma DNA polymerase) 및 상기
Tma DNA 중합효소에서 인테인 영역이 제거된 활성형의
Tma DNA 중합효소에 관한 것이다. 또한, 본 발명은
Tma DNA 중합효소 또는 활성형의
Tma DNA 중합효소를 코딩하는 핵산서열, 상기 핵산서열을 포함하는 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 미생물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기
Tma DNA 중합효소를 포함하는 키트 및 상기
Tma DNA 중합효소의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 유전공학연구, 바이러스 유전자와 암 유전자의 조기진단, 유전병 진단, GMO 및 법의학적 연구에 이르기까지 광범위한 분야에 이용되어지고 있는 PCR의 가장 핵심적 요소 중의 하나인 내열성 중합 효소로 제공된다는 것에 의의가 있다.
DNA 중합효소 (DNA polymerase), 써모코커스 마리너스 (Thermococcus marinus), DNA 중합 활성 (DNA polymerization activity), 인테인 (intein), 단백 질 스플라이싱 (protein splicing), 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction), 핵산 중합 반응-
3.发明公开나노아케움 이퀴탄스 플러스 ＤＮＡ 중합효소, 이의제조방법 및 데옥시유티피 (ｄＵＴＰ)와 우라실-ＤＮＡ글리코실라제 (ＵＤＧ)를 이용한 중합효소 연쇄 반응(ＰＣＲ) 방법 有权NANOARCHAEUM EQUITANS PLUS DNA聚合酶，其制备方法和使用DUTP和URACIL-DNA GLYCOSYLASE的PCR方法
公开(公告)号：KR1020090126538A
公开(公告)日：2009-12-09
申请号：KR1020080052676
申请日：2008-06-04
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q1/6806 , C12Q2521/101
Abstract: PURPOSE: A method for performing PCR using Neq plus DNA polymerase is provided to use in prevention technique of carry-over contamination using dUTP. CONSTITUTION: A Neq plus DNA polymerase is obtained by mixing Neq DNA polymerase and Taq DNA polymerase in a concentration ratio of 1:10. The Neq plus DNA polymerase is used for PCR under the presence of dUTP(2'-deoxyuridine 5'-triphosphate). The method further comprises uracill-DNA glycosylase.
Abstract translation: 目的：提供使用Neq plus DNA聚合酶进行PCR的方法，用于使用dUTP的携带污染的预防技术。 构成：通过以1:10的浓度比混合Neq DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶，得到Neq plus DNA聚合酶。 在dUTP（2'-脱氧尿苷5'-三磷酸）存在下，使用Neq plus DNA聚合酶进行PCR。 该方法还包括尿嘧啶-DNA糖基化酶。
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公开(公告)号：KR1020090106085A
公开(公告)日：2009-10-08
申请号：KR1020080031585
申请日：2008-04-04
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: A thermal resistant DNA polymerase which is derived froom Thermococcus guaymasensis is provided to massively produce and reduce product cost. CONSTITUTION: A thermal resistant DNA polymerase which is derived from Thermococcus guaymasensis (Thermococcus guaymasensis DNA polymerase, Tgu DNA polymerase) has amino acid sequence of the sequence number 10. The thermal resistant Tgu DNA polymerase gene is isolated from the Thermococcus guaymasensis which encodes an amino acid of the sequence number 10.
Abstract translation: 目的：提供一种热源DNA聚合酶，其是衍生的热阳性热球菌（Thermococcus guaymasensis），用于大量生产和降低产品成本。 构成：衍生自热球菌（Thermococcus guaymasensis）（Thermococcus guaymasensis DNA聚合酶，Tgu DNA聚合酶）的耐热DNA聚合酶具有序列号10的氨基酸序列。耐热Tgu DNA聚合酶基因从热球菌（Thermococcus guaymasensis）中分离，其编码氨基 酸序列号10。
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公开(公告)号：KR100673836B1
公开(公告)日：2007-01-24
申请号：KR1020050107202
申请日：2005-11-09
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: A novel Staphylothermus marinus DNA ligase is provided to be thermostable and be used for various reactions for catalyzing phosphodiester bond formation in a nucleic acid. The DNA ligase includes an amino acid sequence described as SEQ ID : NO. 2. The method for preparing the DNA ligase comprises the steps of: (a) preparing a vector expressing the DNA ligase; (b) transforming the vector into a host cell; (c) culturing the transformant; and (d) recovering protein from the transformant.
Abstract translation: 提供了一种新颖的葡萄球菌DNA连接酶，其是热稳定的，并用于催化核酸中磷酸二酯键形成的各种反应。 DNA连接酶包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。 制备DNA连接酶的方法包括以下步骤：（a）制备表达DNA连接酶的载体; （b）将载体转化为宿主细胞; （c）培养转化体; 和（d）从转化体中回收蛋白质。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：KR101303990B1
公开(公告)日：2013-10-15
申请号：KR1020120035330
申请日：2012-04-05
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: Thermococcus pacificus DNA polymerase variant is provided to be used in a various way such as gene diagnosis and PCR reaction thanks to being high in DNA amplification and amplification speed during PCR. CONSTITUTION: DNA polymerase comprises amino acid sequences chosen from a group comprised of sequence number 9, 10 and 11. A recombinant vector comprises amino acid sequence coding the amino acid sequences above. A host cell is transformed into the recombinant vector. The method of manufacturing DNA polymerase comprises the following steps. A recombinant vector which comprises base sequence s coding the amino acid is manufactured. The recombinant vector is transformed into a host cell. The transformed cell is cultivated. Protein from the transformed cell is collected.
Abstract translation: 目的：由于DNA扩增和PCR扩增速度高，提供了以多种方式进行基因诊断和PCR反应的太平洋热带球菌DNA聚合酶变体。 构成：DNA聚合酶包含选自序列号9,10和11的氨基酸序列。重组载体包含编码上述氨基酸序列的氨基酸序列。 将宿主细胞转化入重组载体。 制备DNA聚合酶的方法包括以下步骤。 制备包含编码氨基酸的碱基序列的重组载体。 将重组载体转化到宿主细胞中。 转化的细胞被培养。 收集来自转化细胞的蛋白质。
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公开(公告)号：KR101230362B1
公开(公告)日：2013-02-15
申请号：KR1020100119895
申请日：2010-11-29
Applicant: 성균관대학교산학협력단
CPC classification number: C12Q1/6848 , C12Q2521/101 , C12Q2527/101 , C12Q2539/105 , C12Q2549/101
Abstract: 본 발명은, 인테인이 포함된
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱을 기반으로 한 핫-스타트 PCR 수행방법에 대한 것이다. 구체적으로 본 발명은, 샘플 DNA 및 프라이머를 포함하는 PCR 반응 용액을 준비하고; 579번에서 676번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 대단편과, 1번에서 30번까지의 인테인 아미노산 서열을 포함하는 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어지는
Neq 소단편을 상기 PCR 반응 용액에 함께 첨가하고; 상기 PCR 반응 용액 내의 상기
Neq L 대단편과
Neq S 소단편의 단백질 트랜스 스플라이싱 과정을 통해
Neq DNA 중합효소 활성을 가지는 폴리펩타이드를 형성하고; 그리고 일련의 DNA 변성, 프라이머 어닐링 및 신장 단계를 포함하는 핫-스타트 PCR 수행방법에 관한 것이다.-
公开(公告)号：KR1020100064731A
公开(公告)日：2010-06-15
申请号：KR1020080123299
申请日：2008-12-05
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: PURPOSE: A DNA polymerase derived from Thermococcus marinus is provided to use in nucleic acid polymerization such as PCR. CONSTITUTION: A heat resistant Tma DNA polymerase isolated from Thermococcus marinus has an amion acid sequence of sequence number 12. The Tma DNA polymerase is optimally active at pH 7.0, 75°C, 0-20 mM of KCl, 0-15 mM of (NH_4)_2SO_4, and 12-16 mM of Mg^2+. A nucleic acid encoding the Tma DNA polymerase has nucleic acid sequence of sequence number 11. A method for manufacturing Tma DNA polymerase comprises: a step of preparing a vector expressing Tma DNA polymerase; a step of transforming the vector to microorganism; a step of culturing the transformant; and a step of collecting the proteins from the transformant.
Abstract translation: 目的：提供源自Thermococcus marinus的DNA聚合酶，用于核酸聚合如PCR。 构成：从Thermococcus marinus分离的耐热Tma DNA聚合酶具有序列号为12的氨基酸序列.Tma DNA聚合酶在pH 7.0,75℃，0-20mM KCl，0-15mM（ NH_4）_2SO_4和12-16mM Mg2 +。 编码Tma DNA聚合酶的核酸具有序列号11的核酸序列。制备Tma DNA聚合酶的方法包括：制备表达Tma DNA聚合酶的载体的步骤; 将载体转化为微生物的步骤; 培养转化体的一个步骤; 以及从转化体中收集蛋白质的步骤。
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公开(公告)号：KR100774102B1
公开(公告)日：2007-11-06
申请号：KR1020060125956
申请日：2006-12-12
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: A thermostable enzyme DNA ligase derived from Sulfophobococcus zilligii is provided to improve resistance against strong acid or alkali condition, and against low or high temperature condition, so that the enzyme is useful in various reactions for promoting formation of a phosphodiester linkage in nucleic acids. A thermostable DNA ligase derived from Sulfophobococcus zilligii, Szi DNA ligase, has the amino acid sequence of SEQ ID NO:2, employs ATP and ADP as cofactors and Mg^2+ and Mn^2+ as metal cofactors, and shows optimum activity at pH 6-7, more than 60% activity at 70-80 deg.C, and more than 50% activity at 100 deg.C for 2.2 hours. A gene encoding the thermostable DNA ligase derived from Sulfophobococcus zilligii has the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1. A recombinant vector pESZL(KACC 95099P) contains the thermostable DNA ligase gene. The thermostable DNA ligase is produced by transforming a host cell with the recombinant vector pESZL(KACC 95099P), culturing the transformed cell, and recovering the enzyme from the transformed cell.
Abstract translation: 提供源自磺化磷酸链球菌的热稳定酶DNA连接酶以提高对强酸或碱性条件的抗性，并且在低或高温条件下，使酶可用于促进在核酸中形成磷酸二酯键的各种反应。 源自Sulfophobococcus zilligii，Szi DNA连接酶的热稳定DNA连接酶具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列，使用ATP和ADP作为辅因子，Mg 2+和Mn 2+作为金属辅因子，并且在 pH6-7，70-80℃下超过60％活性，在100℃下活性超过50％，持续2.2小时。 编码源自磺化磷酸链球菌的热稳定DNA连接酶的基因具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列。 重组载体pESZL（KACC 95099P）含有热稳定DNA连接酶基因。 通过用重组载体pESZL（KACC 95099P）转化宿主细胞，培养转化的细胞并从转化的细胞中回收酶来产生热稳定DNA连接酶。
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10.发明授权나노아케움 이퀴탄스 플러스 ＤＮＡ 중합효소, 이의제조방법 및 데옥시유티피 (ｄＵＴＰ)와 우라실-ＤＮＡ글리코실라제 (ＵＤＧ)를 이용한 중합효소 연쇄 반응(ＰＣＲ) 방법 有权Nanoarchaeum equitans加DNA聚合酶，其制备方法及其使用dUTP和尿嘧啶-DNA糖基化酶的PCR方法
公开(公告)号：KR101155368B1
公开(公告)日：2012-06-19
申请号：KR1020080052676
申请日：2008-06-04
Applicant: 성균관대학교산학협력단
Abstract: 본 발명은 나노아케움 이퀴탄스 DNA 중합효소 (
Nanoarchaeum
equitans DNA polymerase, 이하 '
Neq DNA 중합효소'라고 함)의 신규한 PCR 반응 완충용액의 제조 및
Neq DNA 중합효소를 이용한 중합효소 연쇄 반응 (polymerase chain reaction, 이하 'PCR'이라고 함)의 응용에 관한 것이다.
Neq DNA 중합효소는 본 발명의 신규한 완충용액 하에서 10 kb까지 λ-DNA를 증폭할 수 있으며, 데옥시유티피 (dUTP)와 데옥시아이티피 (dITP)를 이용하여 PCR을 수행할 수 있다. 또한 본 발명은
Neq 플러스 (plus) DNA 중합효소의 제조에 관한 것이다.
Neq plus DNA 중합효소는
Neq DNA 중합효소에
Taq
DNA 중합효소를 혼합하여 제조한 것으로 20 kb 이상의 λ-DNA 단편을 PCR로 증폭할 수 있으며, 데옥시유티피 (dUTP) 존재 하에서도
Taq DNA 중합효소를 이용하는 것보다 2~3배 더 효과적으로 PCR을 수행할 수 있다. 또한
Taq
DNA 중합효소보다 더 높은 피델리티 (fidelity)를 가지고 있다. 또한, 본 발명은 우라실 DNA 글리코실라제 (uracil-DNA glycosylase: UDG)와 함께 데옥시유티피 (dUTP)를 이용한 핵산 시료의 교차 오염 (carry-over contamination) 방지 기술에
Taq DNA 중합효소보다 더 유용하게 이용될 수 있을 것이다.
DNA 중합효소, Neq plus DNA 중합효소, 중합효소 연쇄 반응, 교차오염, dUTP, dITP, UDG.
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