公开(公告)号：KR101241769B1

公开(公告)日：2013-03-25

申请号：KR1020110012680

申请日：2011-02-14

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  김기쁨

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/68

Abstract: 본 발명은 DNA 중합 활성(DNA polymerization activity) 및 교정 활성 (proofreading activity)을 모두 가지는 써모코커스 씰러리크레센스 유래의 DNA 중합효소(
Thermococcus

celericrescens
DNA polymerase,
Tcel DNA polymerase, 이하 '
Tcel DNA 중합효소'라고 함) 및 상기
Tcel DNA 중합효소에서 점 돌연변이에 의하여 752번째 아미노산인 알라닌이 라이신으로, 213번째 아미노산인 아스파라진이 아스팔틱산으로 이중 치환된 돌연변이 써모코커스 씰러리크레센스 A752K/N213D DNA 중합효소 (
Thermococcus

celericrescens
A752K/N213D DNA polymerase,
Tcel A752K/N213D DNA polymerase, 이하 '
Tcel A752K/N213D DNA 중합효소'라고 함)에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1020120092820A

公开(公告)日：2012-08-22

申请号：KR1020110012680

申请日：2011-02-14

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  김기쁨

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12N9/1252 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2521/101 ,  C12R1/01

Abstract: PURPOSE: A Thermococcus celericrescens-derived DNA polymerase having DNA polymerization activity and proofreading activity is provided to enable various nucleic acid polymerization reactions and to improved PCR efficiency and thermal resistance. CONSTITUTION: A Tcel DNA polymerase isolated from Thermococcus celericrescens has an amino acid sequence of sequence number 14. A nucleic acid molecule encoding the polymerase has a base of sequence number 13. A recombinant vector contains the nucleic acid molecule. TcelA752K/N213D DNA polymerase has an optimal activity at pH 8, 70 Deg. C. 100 mM of KCl, and 2 mM or Mg^2+. A recombinant vector, pTCELM vector, contains the nucleic acid molecule encoding the TcelA752K/N213D DNA polymerase. A microorganism transformed by the vector is E.coli Rosetta(DE3)pLysS / pTCELM (deposit number KACC91614P).

Abstract translation: 目的：提供具有DNA聚合活性和校正活性的Thermococcus celericrescens衍生的DNA聚合酶，以实现各种核酸聚合反应并提高PCR效率和耐热性。 构成：从Thermococcus celericrescens分离的Tcel DNA聚合酶具有序列号14的氨基酸序列。编码聚合酶的核酸分子具有序列号13的碱基。重组载体含有核酸分子。 TcelA752K / N213D DNA聚合酶在pH8,70度下具有最佳活性。 100mM KCl和2mM或Mg 2+。 重组载体pTCELM载体含有编码TcelA752K / N213D DNA聚合酶的核酸分子。 由载体转化的微生物是大肠杆菌Rosetta（DE3）pLysS / pTCELM（保藏号KACC91614P）。

公开(公告)号：KR100882711B1

公开(公告)日：2009-02-06

申请号：KR1020070023976

申请日：2007-03-12

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  이미선 ,  김건아 ,  이정현

IPC: C12N15/56 ,  C12N15/09 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Y302/02027 ,  C12N9/2497 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2521/531

Abstract: 본 발명은 사이크로박터 스피시스 HJ147 균주 유래의 우라실-DNA 글리코실라제(UDG) 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로 저온성 세균인 사이크로박터 스피시스 HJ147 (
Psychrobacter sp. HJ147) 유래의 우라실-DNA 글리코실라제 (uracil- DNA glycosylase)의 유전자 및 그로부터 유추되는 아미노산 서열,
Psp HJ147 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG) 유전자의 대장균 (
Escherichia coli ) 내에서 발현 및 정제, 이를 통해서 생산된 UDG의 특성 및 중합효소 연쇄반응 (PCR)에의 이용에 관한 것이다.
본 발명의 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG)는 우라실을 포함하고 있는 DNA 기질 내에서 우라실 염기를 특이적으로 분해하는 활성이 있고 저온에서 쉽게 변성하는 특징이 있어 dUTP를 이용한 중합효소 연쇄반응 (PCR) 과정 중에서 발생하는 교차 오염을 쉽게 제거 할 수 있다. 따라서 본 발명의
Psp HJ147 우라실-DNA 글리코실라제 (UDG)는 PCR 반응의 정확도, 순도 및 증폭 효율을 증가시키는데 효과적으로 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR1020120058214A

公开(公告)日：2012-06-07

申请号：KR1020100119895

申请日：2010-11-29

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  조성숙 ,  송재근 ,  김인혜 ,  이강근 ,  윤만희

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Q1/6848 ,  C12Q2521/101 ,  C12Q2527/101 ,  C12Q2539/105 ,  C12Q2549/101 ,  C12Q1/6851

Abstract: PURPOSE: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of Neq L fragment and Neq S fragment is provided to be used in a technique of preventing carryover contamination. CONSTITUTION: A hot-start PCR method based on protein trans-splicing of NeqL fragment and NeqS fragment containing intein comprises: a step of preparing a PCR reaction solution; a step of adding the NeqL fragment and NeqS fragment; a step of performing trans-splicing to form a polypeptide with NeqDNA polymerase activity; and a step of performing DNA denaturation, primer annealing, and elongation.

Abstract translation: 目的：提供一种基于Neq L片段和Neq S片段的蛋白质转录的热启动PCR方法，用于防止携带污染的技术。 构成：基于NeqL片段的蛋白质翻译和含有内含肽的NeqS片段的热启动PCR方法包括：制备PCR反应溶液的步骤; 添加NeqL片段和NeqS片段的步骤; 进行转拼以形成具有NeqDNA聚合酶活性的多肽的步骤; 以及进行DNA变性，引物退火和伸长的步骤。

公开(公告)号：KR1020090039531A

公开(公告)日：2009-04-22

申请号：KR1020070105238

申请日：2007-10-18

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  김건아 ,  이미선 ,  이정현

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/56 ,  C12N15/09

Abstract: An uracil-DNA glycosylase(UDG) derivated from Bacillus sp. HJ171 strain is provide to remove carry-over contamination caused by PCR process and improve accuracy of PCR when performing clinical diagnosis using PCR. An uracil-DNA glycosylase(UDG) derivated from Bacillus sp. HJ171 strain comprises amino acid sequence indicated as a sequence No. 2[SEQ ID NO:2]. The UDG polynucleotide comprises a sequence indicated with a sequence No. 1. The recombinant vector pTBSU(KACC 95065P) comprises the UDG polynucleotide. The composition for PCR comprises the uracil-DNA glycosylase(UDG) of Bacillus sp. HJ171 strain, polymerase, the different nucleotide triphosphate, primer which enables of bonding and amplifying with a specific nucleic acid site, and buffer. Carry-over contamination of PCR product is removed by performing PCR with the DNA substrate including uracil and the composition for PCR including UDG in 25-50°C for 0-5 minutes it does with 0-5 weight inside polymerase chain reaction and the cross contaminated of the PCR product is removed.

Abstract translation: 来自芽孢杆菌属的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG） 提供HJ171菌株，通过PCR进行临床诊断时，可以消除PCR过程造成的遗留污染，提高PCR的准确性。 来自芽孢杆菌属的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG） HJ171菌株包含表示为序列号2 [SEQ ID NO：2]的氨基酸序列。 UDG多核苷酸包含序列号1所示的序列。重组载体pTBSU（KACC 95065P）包含UDG多核苷酸。 用于PCR的组合物包含芽孢杆菌属的尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG） HJ171菌株，聚合酶，不同的三磷酸核苷酸，能够与特定核酸位点结合和扩增的引物和缓冲液。 通过使用含有尿嘧啶的DNA底物和包括UDG在内的UDG的组合物在25-50℃下进行0-5分钟来除去PCR产物的携带污染，其在聚合酶链反应和0 被污染的PCR产物被去除。

公开(公告)号：KR1020080083428A

公开(公告)日：2008-09-18

申请号：KR1020070023976

申请日：2007-03-12

Applicant: 성균관대학교산학협력단

Inventor： 권석태 ,  이미선 ,  김건아 ,  이정현

IPC: C12N15/56 ,  C12N15/09 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12Y302/02027 ,  C12N9/2497 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2521/531

Abstract: An uracil-DNA glycosylase(UDG) is provided to show the activity of decomposing uracil bases specifically in a DNA substrate including uracil and be easily denatured at low temperature, thereby easily eliminating cross-contamination occurred during PCR using dUTP. A UDG of Psychrobacter sp. HJ147 includes an amino acid sequence descried as SEQ ID : NO. 2. A polynucleotide encoding the UDG includes a sequence of SEQ ID : NO. 1. A recombinant vector pTPSUDG includes the polynucleotide. A bacteria transformed by the vector is cultured to produce the UDG. To eliminate cross-contamination of a PCR product, a DNA substrate including a uracil base and the PCR reaction composition including the UDG are reacted at a temperature of less than 50 deg.C for 0-5 minute(s).

Abstract translation: 提供尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），以显示尿嘧啶碱基分解在包括尿嘧啶的DNA底物中的活性，并且在低温下容易变性，从而容易地消除使用dUTP的PCR期间发生的交叉污染。 精油菌的UDG HJ147包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。 编码UDG的多核苷酸包括SEQ ID NO： 重组载体pTPSUDG包括多核苷酸。 培养由载体转化的细菌以产生UDG。 为了消除PCR产物的交叉污染，包含尿嘧啶碱基的DNA底物和包含UDG的PCR反应组合物在小于50℃的温度下反应0-5分钟。