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公开(公告)号：CN106520832B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR‑启动子‑目的基因‑IRES序列‑筛选标记‑PolyA‑MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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公开(公告)号：CN109097357A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811050422.4
申请日：2018-09-10
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种人工合成的MAR共有序列、表达载体、表达系统及其应用，属于生物技术领域。本发明的人工合成的MAR共有序列，由Humanβ-globin MAR、Human MAR X-29、Human MAR 1-68、Human TOP1 MAR、Human HPRT MAR、Human MAR-7、CHO MAR-6、Human CSP-B MAR、CHO DHFR intron MAR、Chicken lysozyme MAR、Human MAR-2、Humanβ-interferon MAR、Human MAR-3中的至少两种的基序连接而成。本发明提供的人工合成的MAR共有序列的串联MAR序列可以提高CHO细胞中外源蛋白的表达量，能实现重组蛋白在宿主细胞中的高效表达。
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公开(公告)号：CN107868781A
公开(公告)日：2018-04-03
申请号：CN201711132142.3
申请日：2017-11-15
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/11 , C12N15/85 , C12N2830/46
Abstract: 本发明涉及人工合成MAR片段、表达载体、表达系统及其应用，属于生物技术领域。新型人工合成MAR片段，分别为MAR-1、MAR-2、MAR-3，本发明的MAR片段是在分析β-珠蛋白MAR序列、X-29序列、β-干扰素MAR序列、MAR 1-68序列的基础上，根据其共有的序列特征设计合成了的新型MAR片段，研究发现MAR-1、MAR-2、MAR-3同时用于CHO细胞中外源蛋白的表达时，MAR-1的效果最好，外源蛋白的表达量与不含有MAR片段的系统相比可提高稳定细胞池5.04-5.47倍，更优选的为MAR-1片段所构成的8个拷贝的串联重复子DNA片段，具有更好的提高表达量的能力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106544361B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A、启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR或者TOP1 MAR‑启动子‑外源基因‑Poly A‑TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1‑68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106544361A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201611109050.9
申请日：2016-12-02
Applicant: 新乡医学院
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含TOP1 MAR序列(GenBank：L23999.1)，通过将外源目的基因插入载体的多克隆位点，能够构建TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A、启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR或者TOP1 MAR-启动子-外源基因-Poly A-TOP1 MAR载体结构，一方面克服转基因沉默，另一方面介导外源基因在宿主细胞中稳定、高效、持久表达。同等条件下，与不含MAR以及含1-68 MAR的载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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公开(公告)号：CN106520832A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因-IRES序列-筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR-启动子-目的基因-IRES序列-筛选标记-PolyA-MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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公开(公告)号：CN109097357B
公开(公告)日：2021-12-21
申请号：CN201811050422.4
申请日：2018-09-10
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种人工合成的MAR共有序列、表达载体、表达系统及其应用，属于生物技术领域。本发明的人工合成的MAR共有序列，由Humanβ‑globin MAR、Human MAR X‑29、Human MAR 1‑68、Human TOP1 MAR、Human HPRT MAR、Human MAR‑7、CHO MAR‑6、Human CSP‑B MAR、CHO DHFR intron MAR、Chicken lysozyme MAR、Human MAR‑2、Humanβ‑interferon MAR、Human MAR‑3中的至少两种的基序连接而成。本发明提供的人工合成的MAR共有序列的串联MAR序列可以提高CHO细胞中外源蛋白的表达量，能实现重组蛋白在宿主细胞中的高效表达。
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公开(公告)号：CN110343718A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810291628.X
申请日：2018-04-03
Applicant: 新乡医学院 , 华兰生物疫苗有限公司
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明涉及一种高效稳定的细胞表达载体、表达系统及其制备方法、应用，属于基因工程技术领域。本发明中的细胞表达载体包含MAR from the DHFR intron序列，该段序列具有普通MAR序列和内含子的双重功能，能更好的提高CHO细胞中外源蛋白表达水平，由其构建得到的表达载体能驱动目的基因高效、持续、稳定表达，同等条件下，与不含MAR from the DHFR intron序列及包含来自CHO细胞的MAR-6序列的表达载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。
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