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公开(公告)号：CN100471864C
公开(公告)日：2009-03-25
申请号：CN200610160057.3
申请日：2006-12-27
Applicant: 新乡医学院
IPC: C07H21/04
Abstract: 本发明公开了一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，本发明的目的是提供一种制备步骤少、反应管少且成本低的定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法。本发明的技术方案是，一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，包括模板、引物和聚合酶链反应，模板为人工合成的含有重复的DNA片段，引物的碱基序列与重复序列的碱基序列相同或互补；将含有重复片段的模板和引物及反应体系置于一个反应管中进行一次聚合酶链反应，即制成所需的脱氧核糖核酸标准参照物。所述模板为人工合成的含有15-30bp重复的DNA片段，重复片段之间的碱基数为20bp以上的整倍数，重复次数不大于50。本发明用于制备DNA标准参照物。
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公开(公告)号：CN101003559A
公开(公告)日：2007-07-25
申请号：CN200610160057.3
申请日：2006-12-27
Applicant: 新乡医学院
IPC: C07H21/04
Abstract: 本发明公开了一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，本发明的目的是提供一种制备步骤少、反应管少且成本低的定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法。本发明的技术方案是，一种定性定量脱氧核糖核酸标准参照物的制备方法，包括模板、引物和聚合酶链反应，模板为人工合成的含有重复的DNA片段，引物的碱基序列与重复序列的碱基序列相同或互补；将含有重复片段的模板和引物及反应体系置于一个反应管中进行一次聚合酶链反应，即制成所需的脱氧核糖核酸标准参照物。所述模板为人工合成的含有15－30bp重复的DNA片段，重复片段之间的碱基数为20bp以上的整倍数，重复次数不大于50。本发明用于制备DNA标准参照物。
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公开(公告)号：CN106520832B
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因‑IRES序列‑筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR‑启动子‑目的基因‑IRES序列‑筛选标记‑PolyA‑MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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公开(公告)号：CN106497973A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201611019369.2
申请日：2016-11-18
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85
CPC classification number: C12N15/85 , C12N2800/107
Abstract: 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β-干扰素MAR序列(或者与该序列95％以上同源的核苷酸序列)，相较包含全长MAR序列或387bp MAR序列的表达载体，该载体能高效、持续、稳定地表达外源目的基因，尤其是包含E段MAR序列的载体表达最佳，可用于基因治疗。在该载体中，分段MAR序列插入载体的多克隆位点也即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面能提高目的蛋白的表达水平以及后续单克隆细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN102703503B
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201210180788.X
申请日：2012-06-01
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类和哺乳动物细胞附着表达载体，所述表达载体中含有核基质附着区序列，所述核基质附着区序列如Seq ID No.1所示，或与该序列95％以上同源的核苷酸序列。该载体能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性能好，可用于基因治疗，具有广阔的市场前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102703503A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210180788.X
申请日：2012-06-01
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类和哺乳动物细胞附着表达载体，所述表达载体中含有核基质附着区序列，所述核基质附着区序列如Seq ID No.1所示，或与该序列95％以上同源的核苷酸序列。该载体能够介导外源基因在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性能好，可用于基因治疗，具有广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN106497973B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201611019369.2
申请日：2016-11-18
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种人类和其他哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。该附着体表达载体上插入有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的分段β‑干扰素MAR序列(或者与该序列95％以上同源的核苷酸序列)，相较包含全长MAR序列或387bp MAR序列的表达载体，该载体能高效、持续、稳定地表达外源目的基因，尤其是包含E段MAR序列的载体表达最佳，可用于基因治疗。在该载体中，分段MAR序列插入载体的多克隆位点也即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面能提高目的蛋白的表达水平以及后续单克隆细胞株筛选的有效性。
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公开(公告)号：CN106520832A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611024593.0
申请日：2016-11-17
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种双顺反子表达载体、表达系统、制备方法及应用，属于基因工程技术领域。该表达载体包含核基质结合区序列、内核糖体进入位点序列和筛选标记，通过在启动子与IRES序列之间插入目的基因，可构成目的基因-IRES序列-筛选标记基因依次连接的双顺反子序列。表达载体的结构为：MAR-启动子-目的基因-IRES序列-筛选标记-PolyA-MAR。该载体利用一个启动子实现目的基因和筛选标记的同时表达，可减少由于不同表达框存在导致的假阳性细胞克隆，提高阳性细胞克隆筛选率，并克服传统载体目的基因与筛选标记表达不均衡的问题；载体上包含MAR序列能克服转基因沉默，实现转基因在宿主细胞中的高效、长期表达。
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公开(公告)号：CN103642838A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310642325.5
申请日：2013-11-29
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示，其是以pCAT3-control作为出发载体构建的一种表达载体，本发明的表达载体能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，比含MAR且不含EGFP的表达载体可显著提高目的基因的表达。
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公开(公告)号：CN103642838B
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201310642325.5
申请日：2013-11-29
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供了一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示，其是以pCAT3-control作为出发载体构建的一种表达载体，本发明的表达载体能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，比含MAR且不含EGFP的表达载体可显著提高目的基因的表达。
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