Abstract:
본 발명은 지질 계통의 신호전달물질인 류코트리엔 B4 (Leukotriene B4, LTB4) 수용체인 BLT2의 신호전달 조절물질의 검색방법 및 검색키트에 관한 것으로, 구체적으로 BLT2의 세포 내 3번째 루프인 iL3(intercellular loop 3)을 포함하는 융합 단백질의 수용체와 상호작용하는 Gi 단백질의 α 소단위체(Gαi3)를 포함하는 융합 단백질 및 상기 두 단백질 간의 상호작용 측정을 통하여 BLT2의 신호전달 조절물질을 검색하는 방법 및 이를 이용한 검색키트에 관한 것으로 이는 염증성 질환에 대한 신약 후보물질을 저비용으로 쉽고 빠르게 검색하는데 이용될 수 있다. GPCR, BLT2, G-단백질, Gαi3, 검색방법, 검색키트
Abstract:
본 발명은 CK2α와 Nopp140의 상호작용 측정방법, 상기 측정방법을 이용한 CK2와 Nopp140의 상호작용 조절물질의 스크리닝 방법 및 CK2 활성의 억제방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 GST-CK2α 단백질을 multi-well plate에 고정하는 단계; 상기 물질에 인산화된 Nopp140 단백질을 처리하는 단계; 및 상기 GST-CK2α에 결합된 상기 Nopp140의 양을 측정하는 단계;를 포함하는 CK2α와 Nopp140의 상호작용 측정방법, CK2α, CK2α와 Nopp140(human nucleolar phosphoprotein)의 상호작용 조절 후보 물질, 및 InsP 6 (inositolhexakisphosphate)을 반응시키는 단계; 및 상기 반응물질에 Nopp140을 처리하는 단계를 포함하는 CK2α와 Nopp140의 상호작용 조절물질의 스크리닝 방법, 및 상기 방법으로 스크리닝된 마이토잔트론(mitoxantrone)을 이용한 CK2 활성의 억제방법에 관한 것이다. 본 발명은 CK2α와 Nopp140의 상호작용을 효과적으로 측정할 수 있으며, 상기 측정방법을 활용하여 항암제 개발의 표적 단백질인 CK2에 대한 활성을 억제하는 기능을 가져 항암제로 이용가능한 물질을 스크리닝할 수 있으며, 이러한 스크리닝을 통해 확인된 마이토잔트론은 CK2의 활성을 억제시킬 수 있는 물질임을 입증하고, 또 다른 항암제 용도로의 개발에 이용될 수 있다. 인산화효소 CK2, 인간 핵인 인산단백질(Nopp140), 펩타이드, Nopp140 발현, 단백질 상호작용
Abstract:
PURPOSE: A method for measuring interaction between CK2α and Nopp140 and a method for suppressing CK2 activation are provided to massively detect a compound without expensive cell culture stage. CONSTITUTION: A method for measuring interaction of CK2α and Nopp140 comprises: a step of fixing GST-CK2α protein on a multi-well plate; a step of treting Nopp140 protein; and a step of measuring the amount of Nopp140 bound to GST-CK2α. A method for screening an interaction regulating material of CK2 and Nopp140 comprises: a step of reacting CK2 subunit and a candidate of interaction regulation of CK2 and Nopp140 and InsP6(inositolhexakisphosphate); and a step of treating Nopp140 to a reacted material.
Abstract:
A screening method of a regulating agent for the signal transduction in BLT2 as a receptor of leukotriene B4 is provided to reduce the screening costs by eliminating a cell culture step by using purified protein and screening devices, so that candidate new drug substances for treating inflammatory disease are screened rapidly and inexpensively. A screening method of a regulating agent for the signal transduction in BLT2 comprises the steps of: (1) preparing BLT2 protein or protein containing an intracellular loop 3(iL3) region of BLT2; (2) preparing alpha subunit protein of G protein(Galpha); (3) reacting the prepared protein of step (1) with the protein of step (2) in the presence of a testing compound, and measuring the interaction between proteins; and (4) comparing the measured interaction with that of a contrast which is measured in the absence of the testing compound, wherein the BLT2 protein is a fusion protein of protein purification-facilitating regions including N-terminal T7 tag and C-terminal His-tag and a BLT2 region; and the protein containing an intracellular loop 3(iL3) region of BLT2 is a fusion protein of a protein purification-facilitating region such as GST(glutathione-S-transferase) and a BLT2 iL3 region. Further, the alpha subunit protein of G protein(Galpha) is alpha subunit protein of Gi3 protein.