公开(公告)号：KR1020070034362A

公开(公告)日：2007-03-28

申请号：KR1020050088971

申请日：2005-09-23

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 정진하 ,  방옥선 ,  강성환

IPC: C12Q1/37

CPC classification number: C12Q1/37 ,  C07K14/47 ,  C07K14/81 ,  C07K2319/00 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법에 관한 것이다.
본 발명은 (1) 특정 기질단백질의 특이적 분해효소에 의해 절단되는 부위를 포함하는 폴리펩티드의 카르복시 말단에는 에코틴을 융합시키고 아미노 말단에는 GST,GFP,MBP로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 융합시켜서 융합 단백질을 얻는 단계; (2) 상기 융합 단백질을 기질로 상기 특정 기질단백질 분해효소와 기질-효소 반응을 수행하는 단계; 및 (3) 상기 기질-효소 반응의 반응물을 가열한 후 원심분리하여 상층액을 분리하고, 상기 상층액의 트립신 활성 억제도를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법을 사용할 경우 트립신 활성의 억제 정도를 통해 형광 측정기상에서 빠르게 그리고 간단하고 효율적으로 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성을 측정할 수 있다.
유비퀴틴, 유비퀴틴 유사 단백질, 단백질 분해효소, 에코틴, 트립신

Abstract translation: 本发明涉及测定特定底物蛋白质的特定降解酶活性的方法。

公开(公告)号：KR1020040087353A

公开(公告)日：2004-10-14

申请号：KR1020030021533

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이문희 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C12N9/64

CPC classification number: C12N9/6405 ,  C12N15/74

Abstract: PURPOSE: Ubiquitin-specific proteases from chick muscle and gene thereof are provided. The enzymes remove ubiquitin bound to p53 protein to stabilize p53 protein in a cell, so that they can be useful for development of anticancer drugs related to p53 protein. CONSTITUTION: The ubiquitin-specific proteases from chick muscle are UBP75a, UBP75b and UBP135, wherein the ubiquitin-specific protease digests protein or peptide bound to ubiquitin by alpha-peptide bond; the ubiquitin-specific protease digests protein or peptide bound to ubiquitin by epsilon-peptide bond; the ubiquitin-specific protease comprises the total or portion of the amino acid sequence of SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 or SEQ ID NO:6; and UBP75a, UBP75b and UBP135 have molecular weight of 75 kDa, 75 kDa and 135 kDa, respectively. The ubiquitin-specific protease genes are ubp75a, ubp75b and ubp135, wherein the ubiquitin-specific protease genes are isolated from cDNA of chicken; genes ubp75a, ubp75b and ubp135 have the total or portion of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:3, respectively. The expression vectors pBS-UBP75a, pBS-UBP75b and pBS-UBP135 contains the genes ubp75a, ubp75b and ubp135, respectively.

Abstract translation: 目的：提供来自鸡肌肉的泛素特异性蛋白酶及其基因。 酶除去与p53蛋白结合的泛素以稳定细胞中的p53蛋白，从而可用于开发与p53蛋白相关的抗癌药物。 构成：来自鸡肌肉的泛素特异性蛋白酶是UBP75a，UBP75b和UBP135，其中泛素特异性蛋白酶通过α-肽键消化与泛素结合的蛋白质或肽; 通过ε-肽键，泛素特异性蛋白酶消化与泛素结合的蛋白质或肽; 泛素特异性蛋白酶包含SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的氨基酸序列的全部或部分; UBP75a，UBP75b和UBP135的分子量分别为75kDa，75kDa和135kDa。 泛素特异性蛋白酶基因是ubp75a，ubp75b和ubp135，其中泛素特异性蛋白酶基因从鸡的cDNA中分离出来; 基因ubp75a，ubp75b和ubp135分别具有SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的核苷酸序列的全部或部分。 表达载体pBS-UBP75a，pBS-UBP75b和pBS-UBP135分别含有基因ubp75a，ubp75b和ubp135。

公开(公告)号：KR100532242B1

公开(公告)日：2006-01-10

申请号：KR1020030021537

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이문희 ,  노영민 ,  최수준 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C12N9/64

Abstract: 본 발명은 유비퀴틴-유사 단백질의 하나인 SUMO의 C-말단을 특이적으로 절단하는 단백질 분해효소인 SUMO-프로테아제, mUlpB와 그 유전자에 관한 것이다. 즉, 쥐의 뇌 조직 mRNA에서 SUMO-특이 단백질 분해효소를 찾아내는 5'-RACE 방법과 이 방법으로 찾은 SUMO-프로테아제의 유전자, mUlpB 단백질 그리고 이 단백질을 발현하는 벡터에 관한 것이다.
유비퀴틴-유사 단백질, 단백질 분해효소, SUMO-프로테아제, mUlpB, 5'-RACE

Abstract translation: 本发明泛素相关的SUMO-蛋白酶蛋白酶切割与SUMO特异性相似的蛋白质的C-末端，并且所述基因mUlpB。 即，本发明涉及表达5'-RACE方法找到脑组织中SUMO-特异性蛋白酶的载体，大鼠基因的mRNA并以这种方式，mUlpB蛋白和蛋白质中找到的SUMO-蛋白酶。

公开(公告)号：KR100807184B1

公开(公告)日：2008-02-27

申请号：KR1020060129755

申请日：2006-12-19

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 정진하 ,  방옥선 ,  강성환

IPC: C12N9/50 ,  C12N15/09

Abstract: A Ufm1-specific protease 1(UfSP1) is provided to be able to show the protein decomposing activity on Ufm1 acting on an important mechanism in a cell, thereby being widely utilized for investigating the important mechanism in the cell where the Ufm1 involves. A Ufm1-specific protease 1(UfSP1) includes an amino acid sequence of SEQ ID : NO. 1. An expression plasmid includes a gene having a sequence of SEQ ID : NO. 2 AND encoding the UfSP1 and is pMAL-c2X-UfSP1. A method for preparing the UfSP1 comprises the steps of: (a) culturing a transformant prepared by transforming E. coli BL21 using the expression plasmid; and (b) obtaining the UfSP1 from the cultured fungus bodies.

Abstract translation: 提供Ufm1特异性蛋白酶1（UfSP1）能够显示Ufm1上的蛋白质分解活性，作用于细胞中的重要机制，从而广泛用于研究Ufm1所涉及的细胞中的重要机制。 Ufm1特异性蛋白酶1（UfSP1）包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。 表达质粒包含具有SEQ ID NO：1的序列的基因。 2编码UfSP1并且是pMAL-c2X-UfSP1。 制备UfSP1的方法包括以下步骤：（a）培养使用表达质粒转化大肠杆菌BL21制备的转化体; 和（b）从培养的真菌体获得UfSP1。

公开(公告)号：KR100736743B1

公开(公告)日：2007-07-09

申请号：KR1020050088971

申请日：2005-09-23

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 정진하 ,  방옥선 ,  강성환

IPC: C12Q1/37

Abstract: 본 발명은 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법에 관한 것이다.
본 발명은 (1) 특정 기질단백질의 특이적 분해효소에 의해 절단되는 부위를 포함하는 폴리펩티드의 카르복시 말단에는 에코틴을 융합시키고 아미노 말단에는 GST,GFP,MBP로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 단백질을 융합시켜서 융합 단백질을 얻는 단계; (2) 상기 융합 단백질을 기질로 상기 특정 기질단백질 분해효소와 기질-효소 반응을 수행하는 단계; 및 (3) 상기 기질-효소 반응의 반응물을 가열한 후 원심분리하여 상층액을 분리하고, 상기 상층액의 트립신 활성 억제도를 측정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법을 제공한다.
본 발명의 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성 측정 방법을 사용할 경우 트립신 활성의 억제 정도를 통해 형광 측정기상에서 빠르게 그리고 간단하고 효율적으로 특정 기질단백질의 특이적 분해효소의 활성을 측정할 수 있다.
유비퀴틴, 유비퀴틴 유사 단백질, 단백질 분해효소, 에코틴, 트립신

公开(公告)号：KR1020040087363A

公开(公告)日：2004-10-14

申请号：KR1020030021548

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 김정화 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C12N9/64

CPC classification number: C12N9/6421 ,  C12N15/74

Abstract: PURPOSE: Ubiquitin-specific proteases from rat muscle and genes thereof are provided, which enzymes remove ubiquitin bound to p53 protein to stabilize p53 protein in a cell, and regulates differentiation process of muscle cells, so that they can be useful for development of anticancer drugs related to p53 protein. CONSTITUTION: The ubiquitin-specific proteases from rat muscle are UBP45 and UBP69, wherein the ubiquitin-specific protease digests protein or peptide bound to ubiquitin by alpha-peptide bond; the ubiquitin-specific protease digests protein or peptide bound to ubiquitin by epsilon-peptide bond; the ubiquitin-specific protease comprises the total or portion of the amino acid sequence of SEQ ID NO:2; and the UBP45 and UBP69 have molecular weight of 45 kDa and 69 kDa, respectively. The ubiquitin-specific protease genes are ubp45 and ubp69, wherein the ubiquitin-specific protease genes are isolated from cDNA of rat cDNA; the ubiquitin-specific protease genes have the total or portion of the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2. The expression vector pBS-Ubp45 contains the genes ubp45. A transformant is produced by transforming a host cell of bacteria JM109 strain with the expression vector pBS-Ubp45.

Abstract translation: 目的：提供来自大鼠肌肉的泛素特异性蛋白酶及其基因，这些酶可以去除与p53蛋白结合的泛素，以稳定细胞中的p53蛋白，调节肌细胞的分化过程，从而可用于开发抗癌药物 与p53蛋白相关。 构成：来自大鼠肌肉的泛素特异性蛋白酶是UBP45和UBP69，其中泛素特异性蛋白酶通过α-肽键消化与泛素结合的蛋白质或肽; 通过ε-肽键，泛素特异性蛋白酶消化与泛素结合的蛋白质或肽; 泛素特异性蛋白酶包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的全部或部分; UBP45和UBP69的分子量分别为45kDa和69kDa。 泛素特异性蛋白酶基因是ubp45和ubp69，其中泛素特异性蛋白酶基因从大鼠cDNA的cDNA中分离; 泛素特异性蛋白酶基因具有SEQ ID NO：2的核苷酸序列的全部或部分。 表达载体pBS-Ubp45含有基因ubp45。 通过用表达载体pBS-Ubp45转化细菌JM109菌株的宿主细胞产生转化体。

公开(公告)号：KR100532199B1

公开(公告)日：2006-01-10

申请号：KR1020030021548

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 김정화 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C12N9/64

Abstract: 본 발명은 새로운 유비퀴틴-프로테아제 (ubiquitin-specific protease, UBP) 및 그 유전자에 관한 것이다. 즉, 쥐의 새로운 유비퀴틴-프로테아제로 분자량 45 킬로달톤 및 69 킬로달톤의 유비퀴틴 단백질 분해효소, UBP45 및 UBP69와 그들의 유전자, 그리고 그 유전자를 함유하는 발현 플라스미드에 관한 것이다. 그리고, 이 플라스미드를 이용한 단백질 분해효소의 발현, 정제 방법과 UBP45 및 UBP69 단백질의 효소활성 및 그 특성에 관한 것이다.
유비퀴틴, 유비퀴틴-프로테아제, UBP45, UBP69

Abstract translation: 本发明涉及新颖的泛素特异性蛋白酶（UBP）及其基因。 也就是说，在大鼠新泛素 - 到分子量为45千道尔顿和69千道尔顿的泛素蛋白酶，UBP45和UBP69和关于他们的基因，以及含有该基因的表达质粒的蛋白酶。 本发明还涉及使用该质粒的蛋白水解酶的表达和纯化，以及UBP45和UBP69蛋白的酶活性和特征。

公开(公告)号：KR1020040087358A

公开(公告)日：2004-10-14

申请号：KR1020030021542

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 오규희 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C07K19/00

CPC classification number: C07K14/00 ,  C07K2319/00 ,  C12N15/52 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A screening method for ubiquitin and ubiquitin-like protein specific proteases using cI gene of lambda phage is provided, thereby easily screening ubiquitin and ubiquitin-like protein specific proteases and simultaneously measuring activity of enzymes, so that the enzymes are useful for development of drugs for treating brain neuronal diseases. CONSTITUTION: The screening method for ubiquitin and ubiquitin-like protein specific proteases using cI gene of lambda phage comprises the steps of: (1) cloning Ub, UbI and cI genes, preparing a mutant of cI gene, preparing an expression plasmid of Ub-cI* or UbI-cI* fusion protein, and preparing transformed E. coli using the expression plasmid; (2) introducing cDNA library into the transformed E. coli using recombinant lambda-phage; (3) selecting E. coli expressing desired protein by heat shock at 42 deg. C for 2 hours; and analyzing enzyme activity of the expressed protein, wherein the Ub-cI* or UbI-cI* fusion protein is produced by fusing ubiquitin-like protein Nedd8 or SUMO-1 with cI protein mutant(cI*); and the fusion protein expression plasmid is pACYC184.

Abstract translation: 目的：提供使用λ噬菌体cI基因的泛素和泛素样蛋白特异性蛋白酶的筛选方法，从而轻松筛选泛素和泛素样蛋白特异性蛋白酶，同时测定酶的活性，使酶可用于开发 用于治疗脑神经元疾病的药物。 构成：使用λ噬菌体cI基因的泛素和泛素样蛋白特异性蛋白酶的筛选方法包括以下步骤：（1）克隆Ub，UbI和cI基因，制备cI基因突变体，制备Ub- cI *或UbI-cI *融合蛋白，并使用表达质粒制备转化的大肠杆菌; （2）使用重组λ噬菌体将cDNA文库导入转化的大肠杆菌; （3）通过42度热休克选择表达所需蛋白质的大肠杆菌。 C 2小时; 并分析表达蛋白的酶活性，其中通过将泛素样蛋白Nedd8或SUMO-1与cI蛋白突变体（cI *）融合产生Ub-cI *或UbI-cI *融合蛋白; 融合蛋白表达质粒为pACYC184。

公开(公告)号：KR100807182B1

公开(公告)日：2008-02-27

申请号：KR1020060129759

申请日：2006-12-19

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 정진하 ,  방옥선 ,  강성환

IPC: C12N9/88 ,  C12N9/00

Abstract: A novel protease is provided to show the specific protease activity on Ufm1, which acts on an important mechanism in a cell, thereby being widely utilized for investigating the important mechanism in the cell where the Ufm1 involves. A Ufm1-specific protease 2(UfSP2) includes an amino acid sequence of SEQ ID : NO. 1. A method for preparing the UfSP2 comprises the steps of: (a) culturing a transformant which is prepared by transforming E. coli BL21 using an expression plasmid of pMAL-c2X-UfSP2; and (b) obtaining the UfSP2 from the cultured fungus bodies.

Abstract translation: 提供了一种新型蛋白酶，以显示Ufm1的特异性蛋白酶活性，其作用于细胞中的重要机制，从而广泛用于研究Ufm1所涉及的细胞中的重要机制。 Ufm1特异性蛋白酶2（UfSP2）包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。 1.一种制备UfSP2的方法，包括以下步骤：（a）培养通过使用pMAL-c2X-UfSP2的表达质粒转化大肠杆菌BL21而制备的转化体; 和（b）从培养的真菌体获得UfSP2。

公开(公告)号：KR100532234B1

公开(公告)日：2006-01-10

申请号：KR1020030021533

申请日：2003-04-07

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이문희 ,  방옥선 ,  정진하

IPC: C12N9/64

Abstract: 본 발명은 새로운 유비퀴틴-프로테아제 (ubiquitin-specific protease, UBP) 및 그 유전자에 관한 것이다. 즉, 닭의 근세포에 존재하는 분자량 75 킬로달톤 (UBP75a, UBP75b) 및 135 킬로달톤 (UBP135)의 새로운 유비퀴틴 분해효소들과 그들의 유전자, 그리고 각 유전자를 함유하는 발현 플라스미드와 이를 이용하여 단백질 분해효소를 발현시키는 방법에 관한 것이다.
유비퀴틴, 유비퀴틴-프로테아제, UBP75a, UBP75b, UBP135

Abstract translation: 本发明涉及新颖的泛素特异性蛋白酶（UBP）及其基因。 即，存在于鸡75千道尔顿至（UBP75a，UBP75b）和135千道尔顿（UBP135）新泛素分解酶及其基因，并通过使用这一点，含有基因的蛋白酶表达质粒的肌细胞中的分子量 Lt。