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公开(公告)号：WO2012046924A1
公开(公告)日：2012-04-12
申请号：PCT/KR2011/000346
申请日：2011-01-18
CPC classification number: C12P7/18
Abstract: 본 발명은 아라비노스 대사경로가 새로이 도입된 자일리톨 생산균주를 이용하여, 자일로스(xylose)와 아라비노스(arabinose)의 혼합 배지에서, 아라비노스를 세포 대사에 이용하게 하여 부산물인 아라비톨(arabitol)의 생성을 억제시킨 효율적인 자일리톨(xylitol) 생산방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 L-arabinose isomerase( araA ), L-ribulokinase( araB ), L-ribulose-5-phosphate 4-epimerase( araD ) 효소들을 캔디다 트로피칼리스( Candida tropicalis ) 균주에서 효율적으로 발현시키기 위하여 유전자 부호 최적화(codon optimization)를 수행한 후, 각각의 유전자를 글리세알데히드-3-인산 탈수소효소(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)의 프로모터 및 선별마커인 URA3를 포함하는 카세트에 삽입하고, 캔디다 속 균주( Candida sp. )에 도입함으로써, 자일리톨 생산시 정제 및 결정화 과정을 방해하는 아라비톨 생성을 억제하는 자일리톨 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명의 아라비노스 대사경로가 새로이 도입된 자일리톨 생산균주는 아라비톨 생성을 억제하여 고생산성으로 자일리톨을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
Abstract translation: 本发明涉及一种有效生产木糖醇的方法，该方法通过使用阿拉伯糖代谢途径新产生的木糖醇生产菌株将阿拉伯糖应用于木糖和阿拉伯糖的复合培养基中的细胞代谢来抑制副产物阿拉伯糖醇的产生 介绍。 更具体地，本发明涉及通过进行密码子优化来抑制木糖醇生产的木糖醇的生产方法，其阻碍木糖醇生产过程中的纯化和结晶，从而有效地表达L-阿拉伯糖异构酶（araA），L- 核糖核酸激酶（araB）和L-核酮糖-5-磷酸4-差向异构酶（araD）酶; 然后将各基因插入到包含甘油醛-3-磷酸脱氢酶和可选择标记URA3的启动子的盒中; 并将其转移到念珠菌属 本发明新引入阿拉伯糖代谢途径的木糖醇生产菌株可以抑制阿拉伯糖醇的生产，因此可用于以高产率生产木糖醇。
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公开(公告)号：KR1020120038030A
公开(公告)日：2012-04-23
申请号：KR1020100097335
申请日：2010-10-06
Applicant: 한국과학기술원
CPC classification number: C12P7/18
Abstract: PURPOSE: An arabinose metabolic pathway-introduced xylitol-producing strain and a method for producing xylitol using the same are provided to suppress arabitol generation. CONSTITUTION: A xylitol-producing strain(deposit number KCTC 11761BP) with suppressed arabitol generation is prepared by introducing a gene expression cassette containing an arabinoser metabolic pathway-associated gene into Candida sp. A method for procuring the strain comprises: a step of preparing a gene expression cassette having a terminator, a promoter, and a polynucleotide encoding L-arabinose isomerase; a step of preparing a gene having a promoter, a terminator, and a polynucleotide encoding L-ribrokinase; and a step of preparing a gene expression cassette having a promoter, a terminator, and a polynucleotide encoding L-ribrose-5-phosphate 4-epimerase.
Abstract translation: 目的：提供一种阿拉伯糖代谢途径引入的木糖醇生产菌株及使用其生产木糖醇的方法以抑制阿糖醇的产生。 构成：通过将含有阿拉伯糖代谢途径的基因的基因表达盒引入假丝酵母属（Candida sp。）制备具有抑制的阿拉伯糖醇生成的木糖醇生产菌株（保藏号KCTC 11761BP）。 获得该菌株的方法包括：制备具有终止子，启动子和编码L-阿拉伯糖异构酶的多核苷酸的基因表达盒的步骤; 制备具有启动子，终止子和编码L-核糖激酶的多核苷酸的基因的步骤; 以及制备具有启动子，终止子和编码L-核糖糖-5-磷酸4-差向异构酶的多核苷酸的基因表达盒的步骤。
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公开(公告)号：KR1020110080138A
公开(公告)日：2011-07-12
申请号：KR1020110059736
申请日：2011-06-20
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: PURPOSE: A method for preparing xylitol of high yield in a medium containing glucose using a xylitol producing strain is provided to produce xylitol of high yield and high productivity without glucose suppression. CONSTITUTION: A gene construct contains a promoter containing a base of sequence number 1, a polynucleotide having a base of sequence number 7, and a terminator having a base of sequence number 2. The gene construct contains a promoter containing 1000bp or more base sequences, a polynucleotide having a base of sequence number 7, and a terminator having a base of sequence number 2. An expression vector contains one or more gene constructs. A method for producing a large amount of xylitols comprises: a step of culturing a xylotol-producing strain in a medium containing biomass hydrolysate and carbon source; a step of producing xylitol from the strain; and a step of isolating xylitol from the culture liquid.
Abstract translation: 目的：提供使用木糖醇生产菌株在含葡萄糖的培养基中制备高产率的木糖醇的方法，以生产高产率和高生产率的木糖醇而不需要葡萄糖抑制。 构成：基因构建体含有启动子，其含有序列号1的碱基，具有序列号7的碱基的多核苷酸和具有序列号2的碱基的终止子。该基因构建体含有含有1000bp或更多碱基序列的启动子， 具有序列号7的碱基的多核苷酸和具有序列号2的碱基的终止子。表达载体含有一种或多种基因构建体。 一种生产大量木糖醇的方法包括：在含有生物质水解物和碳源的培养基中培养产生木糖醇的菌株的步骤; 从菌株中生产木糖醇的步骤; 和从培养液中分离木糖醇的步骤。
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公开(公告)号：KR1020110078548A
公开(公告)日：2011-07-07
申请号：KR1020090135380
申请日：2009-12-31
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: PURPOSE: A method for preparing xylitol at a high yield by the constitutive expression of xylose reductase is provided to massively produce xylitol. CONSTITUTION: A gene construct comprises: a promoter having a base sequence of sequence number 1; a polynucleotide having a base sequence of sequence number 7; and a terminator having a base sequence of sequence number 2. A strain which produces xylitol is cultured in a medium containing biomass hydrolysate and carbon source. The biomass hydrolysate is selected from the group consisting of corncob hydrolysate, sugar cane cob hydrolysate, coconut by-product, and Betula platyphylla var. japonica (Miquel) Hara hydrolysate.
Abstract translation: 目的：提供通过木糖还原酶的组成型表达以高产率制备木糖醇的方法，以大量生产木糖醇。 构成：基因构建体包含：具有序列号1的碱基序列的启动子; 具有序列号7的碱基序列的多核苷酸; 和具有序列号2的碱基序列的终止子。产生木糖醇的菌株在含有生物质水解产物和碳源的培养基中培养。 生物质水解物选自玉米芯水解产物，甘蔗棒状水解产物，椰子副产物和Betula platyphylla var。 粳米（Miquel）Hara水解产物。
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公开(公告)号：KR101227042B1
公开(公告)日：2013-01-28
申请号：KR1020100016842
申请日：2010-02-24
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명의 유전자 클로닝 방법에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명에 따른 유전자 클로닝 방법은 단순히 해당 유전자의 단백질 번역 부위(개시코돈부터 종결코돈까지)만이 아닌 해당 유전자의 프로모터(Promoter)와 터미네이터(terminator) 서열까지 확인이 가능한 방법으로, 프라이머의 설계에 따라 해당 유전자의 단백질 번역부위, 프로모터 부위 또는 터미네이터 부위를 클로닝할 수 있어, 서열이 알려져있지 않은 균주의 유전자 클로닝은 물론, 유전자의 조절 메카니즘 연구에도 유용하게 사용될 수 있다.
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：KR101149001B1
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：KR1020100016836
申请日：2010-02-24
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 포도당을 보조기질로 이용할 수 있는 자일리톨 생산 균주 및 고생산성 발효 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 자일로스 환원효소가 항구적으로 발현되는 자일리톨 생산 균주인 캔디다 트로피칼리스(
Candida tropicalis )에서 EMP 경로에 결정적인 역할을 하는, 포도당인산이성질화효소(phosphoglucoseisomerase,
pgi ), 과당인산키나아제 1(phosphofructokinase 1,
pfk1 ) 또는 과당인산키나아제 2(phosphofructokinase 2,
pfk2 ) 유전자를 녹아웃시켜 상기 유전자가 녹아웃된 균주의 자일리톨 생산속도를 비교한 결과, 상기
pfk2 유전자의 이배체가 모두 녹아웃된 균주의 자일리톨 생산속도가 현저히 증가하였음을 확인함으로써, 자일리톨의 제조 수율 및 생산속도를 향상시킬 수 있는 방법으로 유용하게 사용될 수 있다.-
公开(公告)号：KR1020110097159A
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：KR1020100016842
申请日：2010-02-24
Applicant: 한국과학기술원
CPC classification number: C12Q1/6869 , G06F19/18
Abstract: 본 발명의 유전자 클로닝 방법에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명에 따른 유전자 클로닝 방법은 단순히 해당 유전자의 단백질 번역 부위(개시코돈부터 종결코돈까지)만이 아닌 해당 유전자의 프로모터(Promoter)와 터미네이터(terminator) 서열까지 확인이 가능한 방법으로, 프라이머의 설계에 따라 해당 유전자의 단백질 번역부위, 프로모터 부위 또는 터미네이터 부위를 클로닝할 수 있어, 서열이 알려져있지 않은 균주의 유전자 클로닝은 물론, 유전자의 조절 메카니즘 연구에도 유용하게 사용될 수 있다.
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公开(公告)号：KR101246780B1
公开(公告)日：2013-03-26
申请号：KR1020100097335
申请日：2010-10-06
Applicant: 한국과학기술원
CPC classification number: C12P7/18
Abstract: 본 발명은 아라비노스 대사경로가 새로이 도입된 자일리톨 생산균주를 이용하여, 자일로스(xylose)와 아라비노스(arabinose)의 혼합 배지에서, 아라비노스를 세포 대사에 이용하게 하여 부산물인 아라비톨(arabitol)의 생성을 억제시킨 효율적인 자일리톨(xylitol) 생산방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 L-arabinose isomerase(
araA ), L-ribulokinase(
araB ), L-ribulose-5-phosphate 4-epimerase(
araD ) 효소들을 캔디다 트로피칼리스(
Candida
tropicalis ) 균주에서 효율적으로 발현시키기 위하여 유전자 부호 최적화(codon optimization)를 수행한 후, 각각의 유전자를 글리세알데히드-3-인산 탈수소효소(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)의 프로모터 및 선별마커인 URA3를 포함하는 카세트에 삽입하고, 캔디다 속 균주(
Candida
sp
. )에 도입함으로써, 자일리톨 생산시 정제 및 결정화 과정을 방해하는 아라비톨 생성을 억제하는 자일리톨 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명의 아라비노스 대사경로가 새로이 도입된 자일리톨 생산균주는 아라비톨 생성을 억제하여 고생산성으로 자일리톨을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.-
公开(公告)号：KR101194752B1
公开(公告)日：2012-10-25
申请号：KR1020110059736
申请日：2011-06-20
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 자일로스 환원효소(xylose reductase)가 항구적으로 발현(constitutive expression)되는 자일리톨 생산균주를 이용하여 포도당을 탄소원으로 하는 배지에서 자일리톨을 고수율로 생산하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 뉴로스포라 크라사(
Neurospora crassa )의 자일로스 환원효소를 캔디다 트로피칼리스(
Candida tropicalis )에서 고활성으로 발현시키기 위하여 유전자 부호 최적화(codon optimization)을 수행하여 획득한 최적화된 자일로스 환원효소; 최적화된 유전자를 발현시키기 위해, 클로닝된 캔디다 트로피칼리스(
Candida
tropicalis )의 글리세알데히드-3-인산 탈수소효소(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)의 프로모터와 터미네이터 부분; 및 선별마커인 URA3가 포함된 발현벡터, 상기 발현벡터를 자일리톨 탈수소효소(xylitol dehydrogenase)가 불활화된 캔디다 트로피칼리스에 도입하여 제조된 자일로스 환원효소가 항구적으로 발현되는 자일리톨 생산균주, 및 상기 균주를 유가식 배양을 통해 탄소원인 포도당의 억제를 받지 않고 자일리톨을 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 자일로스 환원효소의 항구적 고발현을 통한 자일리톨 생산방법은 포도당을 보조기질로 사용하여 고수율, 고생산성으로 자일리톨을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.-
公开(公告)号：KR1020110097157A
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：KR1020100016836
申请日：2010-02-24
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 포도당을 보조기질로 이용할 수 있는 자일리톨 생산 균주 및 고생산성 발효 방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 자일로스 환원효소가 항구적으로 발현되는 자일리톨 생산 균주인 캔디다 트로피칼리스(
Candida tropicalis )에서 EMP 경로에 결정적인 역할을 하는, 포도당인산이성질화효소(phosphoglucoseisomerase,
pgi ), 과당인산키나아제 1(phosphofructokinase 1,
pfk1 ) 또는 과당인산키나아제 2(phosphofructokinase 2,
pfk2 ) 유전자를 녹아웃시켜 상기 유전자가 녹아웃된 균주의 자일리톨 생산속도를 비교한 결과, 상기
pfk2 유전자의 이배체가 모두 녹아웃된 균주의 자일리톨 생산속도가 현저히 증가하였음을 확인함으로써, 자일리톨의 제조 수율 및 생산속도를 향상시킬 수 있는 방법으로 유용하게 사용될 수 있다.
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