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公开(公告)号:KR1020050106831A
公开(公告)日:2005-11-11
申请号:KR1020040031878
申请日:2004-05-06
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 방향족 기질에 대한 효소활성이 향상된 히단토이나제(D-hydantoinase) 변이체에 관한 것으로서, 구체적으로 바실러스 스테아로써머필러스 SD1(
Bacillus stearothermophilus SD1) 유래의 야생형 히단토이나제의 활성부위를 구성하는 3개의 루프(loop)에 위치한 소수성의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하여 수득되는, 방향족 치환기를 갖는 기질에 대하여 효소활성이 증진된 새로운 히단토이나제 변이체에 관한 것이다.
본 발명에 따른 히단토이나제 변이체는 야생형 히단토이나제에 비하여 방향족 기질에 대한 기질 특이성이 최대 150배 이상 향상되어 산업적으로 매우 유용하다.-
公开(公告)号:KR100575058B1
公开(公告)日:2006-05-04
申请号:KR1020040031878
申请日:2004-05-06
Applicant: 한국과학기술원
Abstract: 본 발명은 방향족 기질에 대한 효소활성이 향상된 히단토이나제(D-hydantoinase) 변이체에 관한 것으로서, 구체적으로 바실러스 스테아로써머필러스 SD1(
Bacillus stearothermophilus SD1) 유래의 야생형 히단토이나제의 활성부위를 구성하는 3개의 루프(loop)에 위치한 소수성의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환하여 수득되는, 방향족 치환기를 갖는 기질에 대하여 효소활성이 증진된 새로운 히단토이나제 변이체에 관한 것이다.
본 발명에 따른 히단토이나제 변이체는 야생형 히단토이나제에 비하여 방향족 기질에 대한 기질 특이성이 최대 150배 이상 향상되어 산업적으로 매우 유용하다.
히단토이나제, D-아미노산, 하이드록시페닐히단토인, 변이, 기질 특이성-
公开(公告)号:KR100428998B1
公开(公告)日:2004-04-28
申请号:KR1020010055394
申请日:2001-09-10
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C07K1/00
CPC classification number: C12N15/1058 , C07K14/43595 , C12N9/86 , C12N15/102
Abstract: The present invention relates to a method for manufacturing a mutant library of proteins with various sizes and sequences from a parental protein, microorganisms transformed with plasmids containing recombinant DNAs prepared by the insertion of a genomic DNA fragment into a defective template, a process for preparing proteins with different sizes and sequences from the parental protein which comprises the steps of culturing the transformed microorganisms and obtaining desired proteins from the culture, and proteins prepared by the said process. In accordance with the invention, a mutant library of proteins with various sizes and sequences can be manufactured from a parental protein in an efficient and simple manner, by constructing a library of microorganisms transformed with recombinant plasmids containing E. coli genomic DNA fragments inserted into defective genes and selecting clones expressing proteins with restored functions or modified characteristics.
Abstract translation: 本发明涉及用于从亲代蛋白质制备具有各种大小和序列的蛋白质突变体文库的方法,用包含通过将基因组DNA片段插入缺陷模板中制备的重组DNA的质粒转化的微生物,制备蛋白质的方法 具有来自亲本蛋白质的不同大小和序列,其包括培养转化的微生物并从培养物获得期望的蛋白质的步骤,以及通过所述方法制备的蛋白质。 根据本发明,通过构建用含有插入缺陷中的大肠杆菌基因组DNA片段的重组质粒转化的微生物文库,可以以有效且简单的方式从亲本蛋白质制备具有各种大小和序列的蛋白质突变体文库 基因并选择表达具有恢复功能或修饰特征的蛋白质的克隆。
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公开(公告)号:KR1020030022447A
公开(公告)日:2003-03-17
申请号:KR1020010055394
申请日:2001-09-10
Applicant: 한국과학기술원
IPC: C07K1/00
CPC classification number: C12N15/1058 , C07K14/43595 , C12N9/86 , C12N15/102
Abstract: PURPOSE: A method for manufacturing mutant library of proteins with different sequence and size from a mother protein is provided, thereby the mutant library of proteins can be useful for biotechnology. CONSTITUTION: The method for manufacturing mutant library of proteins with different sequence and size from the mother protein comprises the steps of: (i) inducing mutation to a gene encoding the mother protein to construct a defective template of which function is lost; (ii) inserting a randomly synthesized oligonucleotide sequence or a restriction enzyme-treated genomic DNA into the defective template to construct a recombinant plasmid, and transforming microorganism with the recombinant plasmid to prepare a transformed microorganism library; and (iii) selecting salvage protein of which distinct function is recovered or characteristic is changed from the proteins expressed from the transformed microorganism library, wherein the mutation is induced by deletion or frame shift of nucleotides.
Abstract translation: 目的:提供从母体蛋白质制备具有不同序列和大小的蛋白质突变文库的方法,因此蛋白质突变文库可用于生物技术。 构成:从母体蛋白质制备具有不同序列和大小的蛋白质的突变型文库的方法包括以下步骤:(i)诱导编码母体蛋白质的基因的突变以构建失去功能的缺陷模板; (ii)将随机合成的寡核苷酸序列或限制酶处理的基因组DNA插入缺陷模板中以构建重组质粒,并用重组质粒转化微生物以制备转化的微生物文库; 和(iii)从转化的微生物文库表达的蛋白质中选择回收不同功能或特征的补救蛋白,其中通过核苷酸的缺失或帧移位诱导突变。
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