跨菌种启动子、多菌种穿梭质粒及其应用

    公开(公告)号:CN117417934B

    公开(公告)日:2024-09-13

    申请号:CN202311415902.7

    申请日:2023-10-27

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了跨菌种启动子、多菌种穿梭质粒及其应用,尤其是设计了一种大肠杆菌、谷氨酸棒杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、毕赤酵母通用的启动子,该启动子可以在上述宿主内具有活性并且启动目的基因的转录。本发明有效解决了合成生物学和代谢工程中对目的基因进行不同宿主表达验证、最优底盘细胞的构建没有足够通用的启动子工具的问题。通过利用本发明构建的跨菌种启动子和多菌种穿梭质粒,可以在不同宿主细胞内快速对目的基因表达情况进行筛选,获得最佳表达宿主,并有效扩充了合成生物学工具箱,为复杂基因电路构建提供了良好的基础元件。

    一种基于调控sigma因子改变大肠杆菌细胞生长与代谢合成的方法

    公开(公告)号:CN116694657B

    公开(公告)日:2024-09-13

    申请号:CN202310663758.2

    申请日:2023-06-06

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于调控sigma因子改变大肠杆菌细胞生长与代谢合成的方法,属于生物技术领域。本发明通过过表达sigma因子实现对大肠杆菌全基因组基因的表达调控,以提高大肠杆菌的生长强度,进而强化其代谢物的生产。与其他调控方法相比,本发明无需额外表达异源元件,也不需要对目的基因进行改造,即可实现全基因组水平的表达调控。且经验证,利用本发明提升细胞生长和代谢产物合成的方法,可以显著提高5‑氨基乙酰丙酸的产量。

    一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法

    公开(公告)号:CN113186143B

    公开(公告)日:2024-01-30

    申请号:CN202110400206.3

    申请日:2021-04-14

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种产四氢嘧啶工程菌株的构建及优化的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供了能够在低盐条件下生产四氢嘧啶的大肠杆菌工程菌ECT‑LA,该菌以大肠杆菌E.coli BL21(DE3)为基础,包含由T7启动子控制的四氢C932T嘧啶合成基因簇ectABC及外源基因lysC 和asd,并优化了四氢嘧啶的制备方法。本发明构建的重组大肠杆菌以葡萄糖为底物,分批补料发酵56h后,四氢嘧啶产量可达60g/L。

    一种发酵合成α-红没药醇的工程菌株及其构建方法

    公开(公告)号:CN110016458B

    公开(公告)日:2022-08-23

    申请号:CN201910333500.X

    申请日:2019-04-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种发酵合成α‑红没药醇的工程菌株及其构建方法,属于生物工程技术领域。本发明以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为宿主,以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌与酿酒酵母的三穿梭质粒pEBS为表达载体,在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌引入将不同来源的BBS基因和不同来源的ispA基因进行不同组合的优化表达,再进行密码子优化、RBS优化、启动子优化等策略,实现了高效生物合成α‑红没药醇。本发明为微生物系统高效发酵制备(﹣)‑α‑红没药醇奠定了基础,适合于工业化生产应用。

    高热稳定性的硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN112430589B

    公开(公告)日:2022-05-24

    申请号:CN202011350745.2

    申请日:2020-11-26

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了高热稳定性的硫酸软骨素ABC裂解酶突变体及其应用,属于生物工程技术领域。本发明将普通变形杆菌来源的硫酸软骨素ABC裂解酶进行了截短突变,且在截短突变体的基础上做了定点突变,得到了热稳定性明显提高的突变体,得到的突变体在37℃下的半衰期较野生型提高了247倍,将表达突变体的重组菌在3‑L罐分批发酵蛋白,蛋白表达量可达1.7g/L。为工业化生产硫酸软骨素、硫酸皮肤素提供了新的方法,同时也可以用于在肝素制备中消除混杂的硫酸软骨素。

    一种微生物发酵法生产制备超高分子量透明质酸的方法

    公开(公告)号:CN113881613A

    公开(公告)日:2022-01-04

    申请号:CN202110396678.6

    申请日:2021-04-13

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种微生物发酵法生产制备超高分子量透明质酸的方法,属于生物工程技术领域。本发明在谷氨酸棒杆菌中游离表达透明质酸合酶编码基因pmhasA,构建了透明质酸的合成途径;采取弱化RBS强度的方法,弱化合酶pmHAS的表达;采取定点突变的策略理性改造透明质酸合成酶编码基因pmhasA;在谷氨酸棒杆菌中通过组合调控策略强化表达前体UDP‑葡萄糖醛酸和UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺的合成途径酶编码基因;对发酵工艺进行优化,采取低温发酵的策略;重组谷氨酸棒杆菌生产的透明质酸分子量达到5‑9MDa。本发明构建的重组谷氨酸棒杆菌适合于工业化生产应用。

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