一种双氧水耐受的脂肪酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN110540979B

    公开(公告)日:2021-02-02

    申请号:CN201910844697.3

    申请日:2019-09-07

    Abstract: 本发明公开了一种双氧水耐受的脂肪酶突变体及其应用,属于生物技术领域,本发明基于酶蛋白结构分析,设计及构建酶突变库,筛选获得对双氧水耐受性增强的脂肪酶突变体,并构建得到高效表达该突变体的毕赤酵母工程菌,该双氧水耐受性增强的脂肪酶突变体,相对于野生型耐受双氧水的能力显著增强,在1M的双氧水中处理24h,其残余活力仍保留是78%,约是野生型的4倍,该突变体可在废纸脱墨的加工过程中应用,具有良好的稳定性能,可在应用过程中寿命延长,节约生产成本和提高生产效率。

    一种β-木糖苷酶体内酶聚集体及其制备方法

    公开(公告)号:CN106520733B

    公开(公告)日:2020-09-22

    申请号:CN201610910450.3

    申请日:2016-10-19

    Abstract: 本发明公开了一种β‑木糖苷酶体内酶聚集体的制备方法,包括如下步骤:(1)将连接肽与双亲短肽拼接,构建得到表达载体;所述双亲短肽为ELK16;(2)将β‑木糖苷酶编码基因与上述表达载体连接,转化入受体菌,获得能表达β‑木糖苷酶–短肽融合蛋白的工程菌;(3)将上述工程菌诱导表达,并对细胞进行破壁处理,离心和/或过滤获得沉淀,即获得β‑木糖苷酶体内酶聚集体。相比于常规表达获得的ThXylC,本发明所得ThXylC‑ELK16活性酶聚集体,比酶活和催化效率得到了提高,且其热耐受性也明显提高。体现出该方法具有在生产中推广应用的巨大潜力。

    检测水溶性样品中重金属离子的全细胞生物传感器及其构建与应用

    公开(公告)号:CN110873790A

    公开(公告)日:2020-03-10

    申请号:CN201811018847.7

    申请日:2018-09-03

    Abstract: 本发明公开一种检测水溶性样品中重金属离子的全细胞生物传感器及其构建与应用。本发明的操作对象为大肠杆菌,无致病风险,操作简单易行。利用SRRz裂解基因作为报告元件,导致微生物菌体裂解,菌液浑浊度明显发生改变,既可通过可见光分光光度计检测,也可通过肉眼直接观察获得结果;且响应迅速,从接触样品到获得结果,仅需30~60min。利用X-gal对释放到胞外的β-半乳糖苷酶进行检测,操作简便。应用无需使用到昂贵的仪器,大大减小了检测成本,并使现场检测成为可能。利用含有oNPG的显色凝胶对胞外β-半乳糖苷酶酶活进行准确定量,检出限低,检测结果准确。本发明为日常重金属污染检测和突发重金属污染检测提供技术支持。

    一种含支化聚硅氧烷(甲基)丙烯酸酯的牙科复合树脂

    公开(公告)号:CN110755270A

    公开(公告)日:2020-02-07

    申请号:CN201911008134.7

    申请日:2019-10-22

    Inventor: 何经纬 刘芳 李爽

    Abstract: 本发明公开了一种含支化聚硅氧烷(甲基)丙烯酸酯的牙科复合树脂。所述的复合树脂包括20-50重量份的(甲基)丙烯酸酯树脂基体和光引发体系混合物、50-80重量份无机填料。(甲基)丙烯酸酯树脂基体和光引发体系混合物中,(甲基)丙烯酸树脂基体占混合物重量的95%-99.6%,光引发体系占混合物重量的0.4%-5%。本发明所述的含支化聚硅氧烷(甲基)丙烯酸酯的牙科复合树脂具有抗细菌黏附功能并可保持复合树脂的力学性能,可降低复合树脂修复牙齿窝洞时由于二次龋齿导致修复失败的现象。

    一种构建酿酒酵母裂解工程菌的重组载体及其应用

    公开(公告)号:CN109337921A

    公开(公告)日:2019-02-15

    申请号:CN201811019561.0

    申请日:2018-09-03

    Abstract: 本发明公开一种构建酿酒酵母裂解工程菌的重组载体及其应用,属于生物技术领域。本发明的重组载体可以敲除酿酒酵母基因组中的SED1基因,得到的突变菌株在裂解酶Zymolyase作用下能使细胞快速裂解,释放细胞内物质至胞外。操作对象为酿酒酵母,具有广泛适用性。裂解过程中无需添加额外试剂,成本廉价。裂解时间短,2h可将细胞完全裂解,大大缩短了以往酿酒酵母细胞裂解的时间。操作简便,不需玻璃珠等繁琐步骤和配制复杂裂解液,只需一种简单的缓冲液,大大简化了实验流程。因此,可利用本发明的酿酒酵母裂解方法进行酶活检测、菌落PCR、质粒提取、蛋白鉴定和高通量筛选等,具有简易、快捷、廉价的优点,具有较广的应用前景。

    一种β‑甘露聚糖酶工程菌的筛选方法

    公开(公告)号:CN107129958A

    公开(公告)日:2017-09-05

    申请号:CN201710432097.7

    申请日:2017-06-09

    Inventor: 李爽 樊吴迪

    Abstract: 本发明公开了一种β‑甘露聚糖酶工程菌的筛选方法,包括如下步骤:(1)将β‑甘露聚糖酶的表达菌在含有台酚蓝的KT平板上培养,直至平板上产生水解圈;(2)测量水解圈直径与微生物菌落直径,以二者大小的比值作为β‑甘露聚糖酶的酶活指数,该指数与酶活正相关。本发明无需对工程菌裂解,即可实现胞内β‑甘露聚糖酶酶活的快速检测。所需步骤简单,耗时短,成本低廉,且利于高通量筛选。

    一种耐热耐碱木聚糖酶及其编码基因和重组载体

    公开(公告)号:CN104263711A

    公开(公告)日:2015-01-07

    申请号:CN201410466572.9

    申请日:2014-09-12

    CPC classification number: C12N9/248

    Abstract: 本发明公开了一种耐热耐碱木聚糖酶及其编码基因和重组载体,该木聚糖酶选自如下(1)或(2)或(3):(1)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的全长木聚糖酶taXynA;(2)由SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列组成的重组木聚糖酶nsXynAΔSLH;(3)将SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有耐热耐碱木聚糖酶活性的由(1)或(2)衍生的蛋白质。本发明所述的木聚糖酶具有良好的木聚糖降解活性,在75℃条件下处理120min,酶活保留90%,在微酸性、中性或碱性环境下有较强的耐受能力。

    基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN103757042A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201410019182.7

    申请日:2014-01-15

    CPC classification number: Y02P20/588

    Abstract: 本发明公开了一种基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用,制备方法如下:(1)将连接肽与自聚集短肽拼接,构建得到表达载体;(2)将腈水解酶基因与上述表达载体连接,转化入受体菌,获得工程菌;(3)上述工程菌诱导表达后,对细胞进行破壁处理,离心和/或过滤获得沉淀,即腈水解酶体内酶聚集体;(4)将得到的腈水解酶体内酶聚集体在海藻酸盐中固定化,得到固定化腈水解酶。本发明固定化所得腈水解酶聚集体,固定化酶颗粒直径约1mm。该固定化该颗粒可以冻干保存,在37℃情况下保存20天,酶活保留90%,而且固定化的腈水解酶酶活性高,操作流程简单。

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