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公开(公告)号：CN112877303A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110332462.3
申请日：2021-03-29
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N7/01 , C12N15/861 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N15/62 , C12N15/90 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种EGFP与Fiber‑2融合表达的重组血清4型禽腺病毒及其制备方法，本发明的原理和最核心的关键技术是选择合适插入位点以及sgRNA。插入RFP后进行病毒的纯化，获得可以稳定扩增的重组禽腺病毒。利用当下流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入外源基因RFP，成功获得了表达RFP的重组FAdV‑4病毒，由此可见，RFP的插入位置可以作为插入其他病原的保护性抗原插入位点，为构建FAdV‑4重组多价苗提供了夯实的理论基础。
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公开(公告)号：CN112710832A
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202011533179.9
申请日：2020-12-22
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/543
Abstract: 本发明提供了一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条，涉及禽类疾病诊断技术领域，包括底板和依次搭建于底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫，所述金标垫上喷绘有金标抗体，所述硝酸纤维素膜上喷绘有检测线和质控线；所述金标抗体为杂交瘤细胞株5A3制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的金标的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体5A3；所述检测线上喷绘有检测抗体，所述检测抗体为杂交瘤细胞株1D7制备小鼠腹水后经Protein G柱进行IgG纯化后得到的特异性识别血清4型禽腺病毒Fiber2蛋白的单克隆抗体1D7。采用本发明提供的试纸条能够准确地检测禽类是否感染FAdV‑4，准确率达到100％。
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公开(公告)号：CN112522447A
公开(公告)日：2021-03-19
申请号：CN202011574377.X
申请日：2020-12-28
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种鸡传染性贫血病病毒绝对荧光定量PCR检测方法，科学地设计特异扩增鸡传染性贫血病病毒病毒VP1基因片段的引物，然后通过使用TaKaRa公司的TB Green™Premix Ex Taq™II试剂来进行绝对荧光定量PCR方法的建立。根据鸡传染性贫血病病毒VP1基因的高度保守区，科学设计并合成了扩增片段大小为140bp的上下游引物，引物序列如下：上游引物为VP1‑F：5′‑GCCCCGGTACGTATAGTGTG‑3′；下游引物为VP1‑R：5′‑CCCGTACATGTGGTCTGCAT‑3′；本发明可用于企业对鸡传染性贫血病病毒疫苗污染残留及临床样品中低含量鸡传染性贫血病病毒的快速且特异的检测；可通过定量检测鸡传染性贫血病病毒含量情况，从而了解鸡传染性贫血病病毒在体内的变化规律等，为进一步探究鸡传染性贫血病病毒的分子生物学特征及制定有效防控策略提供了有效手段。
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公开(公告)号：CN111304172A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010098971.X
申请日：2020-02-18
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及到基于CRISPR-Cas9编辑技术的敲除鸡EphA2基因的细胞系的构建方法，本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向鸡EphA2基因的sgRNA，之后转染带有sgRNA和Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒，利用CRISPR-Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选杀死阴性细胞，随后通过亚克隆的方法获得单克隆细胞株，从而获得鸡源EphA2敲除的细胞系。通过本发明，构建一种基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的方法，及其靶向鸡EphA2基因的sgRNA，以期获得鸡源EphA2基因敲除的细胞模型，用于相关疾病的研究。本发明基于CRISPR-Cas9靶向敲除鸡EphA2基因的细胞系构建在相关领域未见报道，本发明将填补国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值。
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公开(公告)号：CN110951761A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911343703.3
申请日：2019-12-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，设计扩增出OASL启动子片段的引物，利用限制性内切酶对OASL启动子部分基因片段和pGL3-basic载体进行双酶切，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌，经PCR和测序验证后，获得pGL3-basic-OASL报告基因质粒，并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能。此发明可检测鸡OASL启动子活性，其具有快速简便、准确灵敏、便于高通量检测等显著优势，对监控禽源病毒对OASL启动子活性影响，以及OASL在不同类型禽源病毒致病过程所起作用具有重要应用价值，填补国内外空白。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109295010A
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201811178904.8
申请日：2018-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种利用鸡肝细胞进行坦布苏病毒高效扩增的方法，包括以下步骤：（1）细胞培养：将鸡肝细胞用含体积浓度为10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以质量浓度为0.25%的胰酶进行消化、传代至细胞培养板中；（2）鸡肝细胞高效扩增坦布苏病毒：将鸡肝细胞接种至细胞培养板内培养，在汇合度为60%到70%时，将坦布苏病毒AHRD2018株接种鸡肝细胞，MOI为0.01，以2ml含体积浓度为2%胎牛血清的培养基培养4天，定时收集200μl上清冻存于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含体积浓度为2%胎牛血清的培养基。本发明利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，利用病毒复制速率显著高于DF-1细胞和BHK-21细胞的鸡肝细胞来扩增坦布苏病毒。
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公开(公告)号：CN107603957A
公开(公告)日：2018-01-19
申请号：CN201710935163.2
申请日：2017-10-10
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种高效扩增J亚群禽白血病病毒的方法，本发明采用鸡肝细胞可高效扩增J亚群禽白血病病毒，利用鸡肝细胞可以更早产生高滴度病毒的特性，缩短J亚群禽白血病病毒分离检测时间，实现提早检测到病原，提高J亚群禽白血病病毒检测方法的敏感度。在J亚群禽白血病病毒感染MOI为0.001时，ELISA检测感染维持培养3天的鸡肝细胞的效果与感染维持培养7天的DF-1细胞相当。本发明建立发高效扩增方法的将加快J亚群禽白血病病毒的净化进程，节约时间、成本，本发明在J亚群禽白血病病毒净化检测中具有很好的应用价值。
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公开(公告)号：CN118894915A
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202411032283.8
申请日：2024-07-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种可溶性鸡源PML蛋白及其高效原核表达方法和应用，所述PML蛋白命名为PML‑P2，如SEQ ID NO:1所示。本发明筛选的蛋白PML‑P2不仅高效表达，其融合蛋白免疫小鼠产生的多抗血清，不仅能够与鸡源PML发生特异性反应，还能有效识别人、犬的细胞中内源性PML蛋白，表现出优异的广谱反应性，同时该多抗血清还能在免疫沉淀试验中高效地将外源高表达的鸡PML蛋白进行免疫沉淀。本发明表达载体构建及纯化的PML‑P2融合蛋白将为探究鸡源PML生物学功能及其在疾病中的作用提供有效的免疫学试剂，也为其他物种相关生物学研究提供了有效生物学材料。
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公开(公告)号：CN118879777A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410983164.4
申请日：2024-07-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9敲除鸡EphrinA2基因的细胞系的构建方法，包括如下步骤：设计特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA；构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源EphrinA2基因的sgRNA的敲除质粒；对细胞进行转染，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因沉默，随后通过亚克隆获得鸡源EphrinA2敲除细胞。本发明获得鸡源EphrinA2基因敲除的细胞模型，不仅方法成本低、效率高、简单易用，并且所构建的敲除鸡EphrinA2基因细胞系细胞活性显著降低，为解析EphrinA2在鸡体内中的功能作用及其在某些病毒入侵宿主中的作用与机制提供帮助。
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公开(公告)号：CN118240780A
公开(公告)日：2024-06-25
申请号：CN202410361186.7
申请日：2024-03-27
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas9技术的表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒及其构建方法，禽传染性法氏囊病毒新型变异株的VP2蛋白，其序列如SEQ ID NO.1所示；重组血清4型禽腺病毒，使用禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因替换血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因，替换的是血清4型禽腺病毒Fiber‑2基因的838位核苷酸到1440位核苷酸，FAdV‑4的Fiber‑2基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用目前流行的血清4型禽腺病毒作为载体插入禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2基因，成功获得了表达禽传染性法氏囊病毒新型变异株VP2蛋白的重组血清4型禽腺病毒，为研发禽传染性法氏囊病毒和血清4型禽腺病毒的二联疫苗提供了技术支撑。
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