杜氏盐藻TPSP基因、其编码蛋白及其克隆方法和植物转化载体的构建方法

    公开(公告)号:CN101033469A

    公开(公告)日:2007-09-12

    申请号:CN200710037424.5

    申请日:2007-02-09

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种杜氏盐藻TPSP基因、其编码蛋白及其克隆方法和植物转化载体的构建方法。该基因具有SEQ NO 1所示的碱基序列。本发明首次发现杜氏盐藻DvTPSP基因,并首次提供杜氏盐藻DvTPSP基因的全长cDNA序列;经过序列分析,并与其他物种TPS基因对比,可知该基因在盐藻中编码海藻糖-6-磷酸合成酶和海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶。然而,该基因和已知的海藻糖合成酶基因有较大的不同,是在盐藻中首次发现并首次克隆到一个新的海藻糖合成酶基因。将该基因转入不同的酵母突变体中进行功能鉴定,发现该基因在盐敏感突变体G19中具有一定的盐耐受性。另外,将该基因通过农杆菌遗传转化高等植物,进行了分子鉴定和逆境生理分析,结果证明该基因能提高植物的逆境耐受性,特别是抗旱能力,因此该基因具有应用到植物抗逆基因工程的价值。

    在低盐和高盐渗透胁迫下盐藻差异表达的标签、基因片段及其克隆方法

    公开(公告)号:CN1920042A

    公开(公告)日:2007-02-28

    申请号:CN200610029210.9

    申请日:2006-07-21

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及在低盐和高盐渗透胁迫下杜氏盐藻(Dunlaliella virids)差异表达基因片段及其分离方法。本发明使用SAGE技术由极端模式生物盐藻(Dunaliellaviridis)中得到8个与盐胁迫相关的基因标签,通过PCR获得对应标签的基因片段,经RT-PCR验证这8个受盐胁迫诱导表达的基因片段SEQ ID NO:9~16,确实与盐胁迫相关基因。其中,SEQ ID NO:9~12所代表的4个基因在低盐渗透环境下高水平表达,在高盐渗透环境呈低水平表达;而SEQ ID NO:13~16所代表的4个基因在高盐渗透胁迫条件下高水平表达,低盐渗透胁迫条件下呈低水平表达。为进一步研究盐藻耐盐分子机制奠定了基础。

    衣藻红色荧光标记蛋白基因CrmRFP、其合成方法及其真核表达载体的构建方法

    公开(公告)号:CN1844388A

    公开(公告)日:2006-10-11

    申请号:CN200610026203.3

    申请日:2006-04-28

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种衣藻红色荧光标记蛋白基因CrmRFP、其合成方法及其真核表达载体的构建方法。本发明的衣藻红色荧光标记蛋白基因CrmRFP具有SEQ NO23所示的核苷酸序列序列。其合成方法为:比对衣藻密码子使用频率表,找出红色荧光蛋白mRFP衣藻使用频率较低的八个密码子,通过同义突变,使用频率较高的密码子把这八个使用频率较低的密码子替换掉;根据上述的八个使用频率较高的密码子设计引物,借助重叠延伸法,通过五轮15次PCR反应得到改造之后的全长mRFP,命名为CrmRFP。本发明为衣藻的细胞学和分子生物学研究提供了另外一个重要的荧光蛋白标记。同时,为在衣藻中同时使用双(多)色荧光标记奠定了基础。

    玉米Opaque1基因的分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN103695550A

    公开(公告)日:2014-04-02

    申请号:CN201310718089.0

    申请日:2013-12-24

    Applicant: 上海大学

    CPC classification number: C12Q1/6895 C12Q2600/156

    Abstract: 本发明涉及一种玉米Opaque1基因的分子标记及其应用。该分子标记是通过PCR扩增特异性引物,得到的一种共显性分子标记MYO-PD,所述的特异性引物为SEQIDNO.1~SEQIDNO.2所示的碱基序列。利用这个与o1基因完全连锁的分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中o1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。同时,利用这个分子标记能区分突变体与10种国内主要育种亲本,能够在任何育种背景群体中准确检测到o1基因的存在,且错选率为0。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用o1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    提高玉米种子活力和抗寒能力的方法

    公开(公告)号:CN102612890B

    公开(公告)日:2013-10-16

    申请号:CN201210102312.4

    申请日:2012-04-09

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高玉米种子活力和抗寒能力的方法。玉米种子按常规方法表面消毒后,清水洗净,18-30℃浸种12-24小时,所用浸种液为5-10μg/ml Hrf蛋白溶液。然后按常规方法播种。本发明使用的浸种方法简单易行,纯生物制剂绿色环保,无农药或化学试剂污染,是理想的浸种液及浸种处理方法。

    快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶基因的方法

    公开(公告)号:CN102787127A

    公开(公告)日:2012-11-21

    申请号:CN201210184123.6

    申请日:2012-09-07

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶(GS)基因的方法。该方法的主要内容包括:(1)针对细菌类群的GS基因序列设计嵌套式兼并引物;(2)使用嵌套引物中的外引物和内引物下游引物对土壤DNA进行第一轮扩增,扩增产物纯化后作为模版,用内引物上下游引物进行第二轮PCR扩增;(3)对第二轮扩增后的特异片段进行纯化,连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌Top10,挑取正确的阳性克隆;(4)对阳性克隆的插入片段进行测序和序列分析,确定基因的正确性;(5)用大肠杆菌GS缺陷型ET6017的功能互补实验来验证所克隆基因的功能。本发明所描述的基因克隆方法具有很高的成功率和较好的准确性。

    用于分离和鉴定Ac/Ds转座子侧翼序列的特异性引物

    公开(公告)号:CN102649959A

    公开(公告)日:2012-08-29

    申请号:CN201210162980.6

    申请日:2012-05-24

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种用于分离和鉴定Ac/Ds转座子侧翼序列的引物及方法。该引物为:a.用于分离Ac/Ds5’端侧翼序列的Ac末端特异性引物为SEQIDNO:1~SEQIDNO:7所示的碱基序列;b.用于分离Ac/Ds3’端侧翼序列的Ac末端特异性引物为SEQIDNO:8~SEQIDNO:14所示的碱基序列。本发明涉及一种用于鉴定区分Ac和Ds侧翼序列的特异性引物及方法,其特征在于该引物为:SEQIDNO:15~SEQIDNO:18所示的碱基序列。利用这些Ac特异性引物可以很好扩增获得基因组中的Ac或Ds的侧翼序列。这种检测方法操作简单,为大规模的获得Ac突变体的Ac侧翼序列和分离Ac插入突变体的基因的重要的技术手段。

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