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公开(公告)号：CN115088621A
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202210844762.4
申请日：2022-07-18
Applicant: 南京林业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种利用抽真空处理促进杨树外植体大量、快速分化成芽的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明包括：选取杨树幼苗叶片，去除叶片的边缘部分，切成若干叶盘或叶柄；将叶盘或叶柄放入处理液，置于真空泵中抽真空一段时间；取出叶盘或叶柄后立即用吸水纸吸去表面液体，将叶盘背面朝下放入装有培养基的培养皿中；培养叶盘或叶柄分化为丛生芽。实验表明，利用本发明，可以大幅度提高杨树叶盘和叶柄的分化率，杨树叶片及叶柄分化丛生芽数量较对照组均增加1.5倍以上，叶片及叶柄分化丛生芽鲜重较对照组分别增加3倍和5倍以上，表明本发明能有效促进杨树外植体分化，最终可以显著提高杨树外植体分化成幼苗的数量。
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公开(公告)号：CN110073981B
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN201910522117.9
申请日：2019-06-17
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一种利用胚拯救获得杨树杂交苗的方法，包括采集花枝、插条及培养、授粉和胚拯救等步骤，胚拯救方法：外植体消毒后，将种子置于胚拯救培养基上培养7‑14d，再按长出幼苗和没长出幼苗分两步进行：将长出的幼苗转移到生根培养基上培养，得到无菌苗，长大后移植即得杂交苗；如没长出幼苗，将种子诱导出愈伤组织，用芽分化培养基诱导出芽，最后转生根培养基上培养，得到无菌苗，长大后移植，得到杂交苗。本发明采用胚拯救的方法，对未发育完全的种子进行组织培养，可获得大量杂交苗，方法简单，节省了杨树的育种时间，避免了资源浪费，有效克服了杨树的传统水培法过程中存在的种子败育导致的杂交失败的问题，特别适合于美洲黑杨的水培。
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公开(公告)号：CN113416794A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110760926.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 南京林业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种簸箕柳雄花荧光定量的内参基因及其专用引物和应用。本发明选择簸箕柳雄花为实验材料，这些雄花涵盖4个不同发育阶段：雄花分化期、休眠期、初花期和盛花期。依次通过荧光定量PCR分析，扩增曲线和熔解曲线分析，LinRegPCR扩增效率分析，geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析，筛选出符合适用于簸箕柳雄花荧光定量PCR的2个内参基因(DnaJ和ACT)，其中，DnaJ基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，ACT基因的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本申请填补了不同发育时期的簸箕柳雄花没有内参基因的现状，为簸箕柳雄花发育相关功能基因的精确定量提供有力支持，可提高研究的稳定性和准确性。
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公开(公告)号：CN113249295A
公开(公告)日：2021-08-13
申请号：CN202110365340.4
申请日：2021-04-02
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本申请公开了一种测定拟南芥离体花粉萌发率的方法，属于生物技术领域。该方法包括：1)取拟南芥种子，消毒，在1/2MS培养基上播种，培养至萌发第10d，将萌发的幼苗移栽到营养土中生长，直至拟南芥植株抽薹生长至10‑12cm；2)当天采集主茎上开至第14阶段的花朵，用镊子夹着花柄将雄蕊上的花粉涂布在固体培养基中央，然后将花倒置在花粉涂布的边缘位置，控温保湿，将培养皿倒置在培养箱中暗培养；进行显微观察和花粉萌发率统计。本申请操作便捷，花粉用量更少，对花粉损伤更小，花粉萌发效率高，重复性好，为花粉萌发活力及育性的快速鉴定提供一种有效途径，为研究花粉组织特异的基因功能提供一种有效手段。
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公开(公告)号：CN111763654A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010777047.4
申请日：2020-08-05
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一种杨树落叶松杨珊锈菌单孢扩繁方法，属于微生物培养技术领域。本发明的方法包括种苗、采集感病叶片和菌种初繁、单孢系转接和扩繁等步骤，包括：使用90mm的一次性培养皿，在培养皿底部垫两张滤纸，加入3mL无菌水进行保湿。将病叶上的单孢子堆用移液枪离散至4μL的琼脂水溶液中，将混有夏孢子堆的溶液打在具有感病能力的NL895的嫩叶上，接种完成后置于温度为19℃，光周期为16h/24h的温室中进行培养，待其发病后在进一步扩繁至足量，保存至4℃冰箱待用。本发明采用室内接种的方法，对锈菌进行叶盘法培养，可获得分离的孢子堆，方法简单高效，为更好地研究杨树抗锈性提供纯化单一的菌株。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110295191A
公开(公告)日：2019-10-01
申请号：CN201910636822.1
申请日：2019-07-15
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一种二倍体毛白杨的遗传转化方法，首先采集雄性二倍体毛白杨幼嫩的含芽茎段作为外植体，清洗消毒后依次进行增殖继代培养、芽伸长培养和生根培养，得到毛白杨无菌苗，挑取携带pBI121载体质粒的根癌农杆菌，制备菌液作为侵染液；将毛白杨无菌苗的叶片切成叶盘，培养7d后转入侵染液中进行侵染，侵染后的叶盘先黑暗培养后光照恢复培养，最后进行抗性芽的筛选，得到候选植株，对候选植株进行GUS染色和PCR检测，将均为阳性的植株进行炼苗和移栽，得到二倍体毛白杨转基因植株。本发明方法具有转化效率高、培育周期短、可大规模投入生产等优点，二倍体毛白杨的遗传转化体系可为规模化培育新品种、定向改造优良性状提供帮助。
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公开(公告)号：CN110073981A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910522117.9
申请日：2019-06-17
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明涉及一种利用胚拯救获得杨树杂交苗的方法，包括采集花枝、插条及培养、授粉和胚拯救等步骤，胚拯救方法：外植体消毒后，将种子置于胚拯救培养基上培养7-14d，再按长出幼苗和没长出幼苗分两步进行：将长出的幼苗转移到生根培养基上培养，得到无菌苗，长大后移植即得杂交苗；如没长出幼苗，将种子诱导出愈伤组织，用芽分化培养基诱导出芽，最后转生根培养基上培养，得到无菌苗，长大后移植，得到杂交苗。本发明采用胚拯救的方法，对未发育完全的种子进行组织培养，可获得大量杂交苗，方法简单，节省了杨树的育种时间，避免了资源浪费，有效克服了杨树的传统水培法过程中存在的种子败育导致的杂交失败的问题，特别适合于美洲黑杨的水培。
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公开(公告)号：CN109169256A
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201811071427.5
申请日：2018-09-13
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明提供了一种杨树全同胞子代苗的制备方法及其得到的杨树全同胞子代苗，涉及林木培育技术领域，上述制备方法首先分别从成年杨树上采集雌、雄花枝并将花枝基部浸泡于生根剂中，随后将浸泡生根剂后的雌、雄花枝扦插在育苗基质中，待雄花开放后收集花粉，并对雌花进行人工授粉后进行栽培管理得到杨树全同胞子代种子，然后将种子进行播种培育得到杨树全同胞子代苗。上述方法具有育苗效率高、所构建的苗种为无污染的杨树全同胞子代苗的优点，有效缓解了现有杨树高枝套袋杂交所存在的高空作业危险以及容易造成花粉污染的问题。
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公开(公告)号：CN108363904A
公开(公告)日：2018-08-03
申请号：CN201810123433.4
申请日：2018-02-07
Applicant: 南京林业大学
IPC: G06F19/20
CPC classification number: G16B25/00
Abstract: 本发明公开了一种用于木本植物遗传密码子优化的CodonNX系统及其优化方法，该系统包括输入模块、处理模块、输出模块；其中，输入模块用于用户输入基因序列和密码子使用频率排序表，并选定具体处理模式；处理模块用于接收输入的密码子信息内容、密码子使用频率排序表信息内容，并依据用户选择的处理模式，进行有效处理，并通过输出模块，输出对应的结果。本CodonNX系统提供了完备的可发展的全系统基因优化功能，提高工作效率，节省成本，系统的参数可选择，尤其是最优密码子可选择，几乎所有参数都公开、透明、可选择，并且可以由用户自己进行设置。该系统适合植物表达载体平台，针对性较强，经试验验证，在转基因植株中能得到高表达蛋白。
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公开(公告)号：CN106755558A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710193774.4
申请日：2017-03-28
Applicant: 南京林业大学
Abstract: 本发明公开了一套用于柳树不同品种遗传鉴别的专用引物及其应用，该方法针对国家林业局已经授权的柳树优良品种，开发出了16对用于柳树不同品种鉴定的微卫星引物。利用本发明的柳树专用引物，进行柳树不同品种遗传鉴定，鉴定方法操作简单、高效，鉴定的准确率高，为柳树不同品种真实性鉴定提供了可靠技术手段。本发明将为柳树良种的使用提供重要的监督检验方法，其应用前景广阔，具有很好的实用性，能够产生较好的经济效益和社会效益。
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