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公开(公告)号：CN113957028A
公开(公告)日：2022-01-21
申请号：CN202111251656.7
申请日：2021-10-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种胞外蛋白酶失活的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，本发明以B.subtilis 168为出发菌株，使用CRISPR/Cpf1技术在基因组上整合了木糖诱导型启动子PxylA控制的转录因子comK‑comS基因，使其转化效率大幅提高；回复突变了trpC基因和gudB基因，使其能够合成色氨酸并有效利用谷氨酸家族氨基酸；此外，将6个胞外蛋白酶基因进行了敲除，不仅降低了细胞的代谢压力，而且使重组蛋白能在胞外有效累计。利用最终的工程菌株G601在进行发酵时生产的胞外sfGFP的含量是B.subtilis 168的1.88倍，胞内胞外sfGFP总含量是B.subtilis 168的1.94倍。由本发明构建的工程菌转化简便、无营养缺陷、有更好的氨基酸利用能力、胞外蛋白酶活性低，能广泛应用于重组蛋白的分泌表达，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113684141A
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202110926222.6
申请日：2021-08-12
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种胞外转运维生素D3前体角鲨烯的酿酒酵母菌株构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明首先构建了一株高产角鲨烯的重组酿酒酵母菌株Z1O3，所述重组酿酒酵母强化表达了3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子的相关基因INO2、Pdr5蛋白和Osh3蛋白；并且敲除了ROX1基因；对其进行摇瓶发酵时，该菌株胞外十二烷中角鲨烯含量达到893.58mg/L；而在发酵罐中培养，该菌株胞外十二烷中角鲨烯含量可达到6995.81mg/L，由本发明构建的重组菌株不仅具有角鲨烯胞外转运能力，且具有更强的角鲨烯生产性能，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113528495A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110758191.8
申请日：2021-07-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达几丁二糖脱乙酰酶的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过筛选整合位点，提高整合拷贝数，构建了可以稳定高效表达几丁二糖脱乙酰酶Dac的食品安全级工程菌株。与现有技术相比，几丁二糖脱乙酰酶胞外酶活得到了极大的提高，发酵周期大大缩短。本转化方法简单易行，条件温和，高效环保，产物得率高。此法有利于解决传统合成法中污染严重，产率低下等问题，而且此法易于控制，利于推广应用。
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公开(公告)号：CN113355310A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110601441.7
申请日：2021-05-31
Applicant: 江南大学 , 山东润德生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种最适pH降低的几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，通过分子模型和计算机分析预测几丁二糖脱乙酰酶表面电荷及酶活相关位点，再通过定点突变技术构建相关位点的突变体，筛选出不同位点突变时最适pH、酶活以及产物GlcN稳定性均较优的单突变体，构建其组合突变体，得到最适pH下降至6.0，酶活明显提高的组合突变体。
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公开(公告)号：CN113278602A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110601499.1
申请日：2021-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种几丁二糖脱乙酰酶突变体，通过对几丁二糖脱乙酰酶Dac与底物GlcNAc结合的关键位点进行定点饱和突变体库的构建和筛选，从而鉴定一个或多个氨基酸残基在几丁二糖脱乙酰酶Dac的功能和稳定性等方面发挥的重要作用，并对酶活最高的突变体进行组合突变，获得了几丁二糖脱乙酰酶组合突变体，提高了酶的反应活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108424870B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201810302095.0
申请日：2018-04-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种生产N‑乙酰氨基葡萄糖的谷氨酸棒杆菌及其应用，属于代谢工程领域。本发明以谷氨酸棒状杆菌S9114作为出发菌株，使用谷氨酸棒杆菌与大肠杆菌的穿梭表达载体pJYW‑4表达了乙酰氨基葡萄糖合成途径中的一个关键酶基因：来源于秀丽隐杆线虫来源的氨基葡萄糖‑6‑磷酸乙酰转移酶GNA1，并通过在GNA1基因的3’非翻译区插入重复性回文序列来加强乙酰氨基葡萄糖合成途径，提高乙酰氨基葡萄糖的产量，得到了产乙酰氨基葡萄糖重组谷氨酸棒杆菌，产量达到6.1g/L，为进一步代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113155804A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110585941.6
申请日：2021-05-27
Applicant: 江南大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种快速检测氨基葡萄糖的方法。本发明的方法包括配制N‑乙酰氨基葡萄糖溶液，在溶液中加入没食子蓝，得到没食子蓝检测试剂；向含有氨基葡萄糖生产菌株的发酵液中加入没食子蓝检测试剂，培养后检测荧光强度，根据荧光强度降低判断氨基葡萄糖含量。本发明快速检测氨基葡萄糖的方法，主要应用于测量发酵液中，可将底物N‑乙酰氨基葡萄糖转化为氨基葡萄糖的己丁二糖脱乙酰酶的总催化活性。与现有的邻苯二甲醛检测方法不同，本发明的检测方法仅需一步添加试剂混合操作，培养后即可由酶标仪进行检测。相较于现有方法，本方法简单高效，可以明显提升实验效率。
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公开(公告)号：CN110527656B
公开(公告)日：2021-07-20
申请号：CN201910833893.0
申请日：2019-09-04
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的工程菌及其构建方法及应用，属于生物工程技术领域。本发明的重组大肠杆菌是通过在大肠杆菌BL21(DE3)中组合优化二甲苯单加氧酶、苯甲醇脱氢酶和苯甲醛脱氢酶基因的表达，并强化表达二甲苯单加氧酶的电子转移蛋白基因得到，通过改造获得了高效合成5‑甲基吡嗪‑2‑羧酸的大肠杆菌，其产量达到10.2g/L，且摩尔转化率提高到67％。在底物浓度提高的同时，摩尔转化率也有所提高。本发明重组大肠杆菌的构建方法简单，便于使用，具有很好应用前景。
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公开(公告)号：CN112940956A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110415416.X
申请日：2021-04-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种采用双启动子增强乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其应用，本发明通过融合PCR的方式构建Paox1和Pgap串联启动子，进一步优化两个启动子的间隔长度与启动子的顺序，通过发酵实验发现，不同长度的间隔序列导致不同的转录水平。其中当间隔序列达到50bp时，与单个启动子Paox相比，乳铁蛋白的转录水平提高了将近6.5倍，通过western blot发现乳铁蛋白的表达量增加了约3.7倍，达到了150mg/L。本发明能够有效的提高乳铁蛋白的表达量，并将甲醇的用量降低50％以上。
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公开(公告)号：CN110295135B
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN201910664977.6
申请日：2019-07-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种改造枯草芽孢杆菌FMMs的方法及其应用，属于遗传工程技术领域。本发明通过强化固醇类似物前体合成酶——角鲨烯合酶和脚手架蛋白显著增加质膜上FMMs占比。本发明构建的重组枯草芽孢杆菌BSGFMM1‑AY与对照菌株BSGN6‑AY相比，可以更多地将N‑乙酰氨基葡萄糖合成所需的途径酶固定在FMMs中，形成底物通道，显著提高酶的催化效率。在复合培养基摇瓶发酵过程中，对照菌株BSGN6‑AY的GlcNAc滴定量仅为2.84g/L，而BSGFMM1‑AY的GlcNAc滴定量增加至8.86g/L。本发明的重组枯草芽孢杆菌构建方法简单，普适性高，便于使用，具有很好的应用前景。
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